补骨脂又名破故纸，为豆科（Leguminosae）植物补骨脂Psoralea corylifolia L. 的干燥成熟果实^[1]。该植物分布于四川、云南、河南、安徽、山西、陕西等地，资源丰富^[2]。自古以来其就作为温肾助阳的常用中药，有补肾壮阳、温脾止泻之功效，为《中国药典》收载的中药。现代药理学研究表明该药有扩张冠状动脉、抗菌、抗衰老的作用，对平滑肌有双向调节作用，还有雌激素样作用以及抗肿瘤等药理活性^[3]。补骨脂含有多种活性成分，如香豆素类（主要为呋喃香豆素类、补骨脂素psoralen和异补骨脂素isopsoralen等）；拟雌内酯类（如补骨脂定psoralidin等）；黄酮类（主要有补骨脂甲素corylifolin、补骨脂乙素corylifolinin、补骨脂异黄酮corylin、补骨脂查耳酮bavachalcone等）；酚萜类（如补骨脂酚bakuchiol）等^[4]。为充分利用我国丰富的资源，进一步寻找新的活性天然产物化学成分；本实验对补骨脂果实的化学成分进行了研究，并从中分离得到1个具有细胞毒活性的二氢异黄酮类新化合物，3R-6-羟基-8-羟甲基-4′,7-二甲氧基-二氢异黄酮（1），命名为补骨脂异黄酮A。

UV-2401A紫外光谱仪（日本岛津公司）；JascoJ-810圆二色光谱仪（日本分光公司）；Bio-Rad FTS-185傅里叶变换红外光谱仪（美国伯乐BIO-RAD公司公司）；DRX-500高分辨核磁共振仪（瑞士布鲁克公司）；半制备HPLC分析仪器为岛津LC-8A型高效液相色谱仪，色谱柱为安捷伦公司Zorbax PrepHT GF（250 mm×21.2 mm，7 μm）和安捷伦Zorbax C₁₈（250 mm×9.4 mm，5 μm）。

拌样用硅胶（80～100目）、柱色谱分离用硅胶（200～300目）、GF₂₅₄（100 mm×100 mm）薄层硅胶板均为青岛海洋化工厂产品；MCI-gel CHP-20P（75～150 μm）反相微孔树脂，日本三菱公司；Sephadex LH-20凝胶，美国GE公司；工业用三氯甲烷、丙酮、甲醇、醋酸乙酯、石油醚，天津化学试剂厂提供；色谱纯乙腈、四氢呋喃，美国Fisher公司提供；超纯水，实验室用美国GE EDI超纯水处理器制备。

补骨脂药材2002年9月购自昆明菊花村药材市场，产地为云南西双版纳，经云南中医学院中药学院袁琳博士鉴定为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L. 的干燥果实，标本（YNMZ0952）保存于云南民族大学民族药资源化学重点实验室。急性早幼粒细胞白血病细胞（NB4）、人肺腺癌细胞（A549）、人神经母细胞瘤细胞（SHSY5Y）、人前列腺癌细胞（PC3）和人乳腺癌细胞（MCF7），均购于上海拜力生物科技有限公司。

补骨脂成熟的果实4.5 kg粉碎到30目，然后用95%乙醇提取4次；每次提取乙醇用量为5.0 L，超声4次（每次30 min）后滤过；合并4次提取液减压浓缩得浸膏185 g。浸膏选用MCI脱色，然后经硅胶柱色谱，氯仿-丙酮（20∶1、9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5）洗脱分成6个部分。选取氯仿-丙酮6∶4洗脱部分用HPLC进行进一步分离，采用Agilent Zorbax PrepHT GF反相柱，以45%甲醇为流动相，体积流量为15 mL/min，进样量100 μL，检测波长为308 nm，收集25.2～26.8 min流出的组分可得化合物粗品。粗品再次用甲醇溶解，以甲醇为流动相，用葡聚糖凝胶柱色谱纯化可得化合物1（12.8 mg）。

化合物1：浅黄色胶状物，[α]_D^24.6 -41.6° (c 0.25,MeOH)；UVλ_max^MeOH(nm): 210 (4.05),242 (3.32),308 (3.20)；CD (c 0.2,MeOH) λ_max: 248 (+1.58),346 (+1.22)；IRυ_max^KBr(cm^-1): 3 428,2 947,2 880,1 647,1 610,1 532,1 478,1 368,1 226,1 047,957,862。HR-ESI-MS显示其准分子离子峰为353.100 1 [M＋Na]⁺（计算值353.100 1，C₁₈H₁₈NaO₆），结合¹H-和¹³C-NMR确定分子式为C₁₈H₁₈O₆。其红外光谱显示化合物中有羟基（3 428 cm^-1）、羰基（1 647 cm^-1）和芳环（1 610,1 532,1 478 cm^-1）信号，紫外光谱在210、242和308 nm有最大吸收也证实化合物中存在芳环结构。化合物的¹H-和¹³C-NMR谱（表 1）显示其含有18个碳和18个氢，包括1个五取代的苯环 (δ_C 117.2 d、142.5 s、155.8 s、124.5 s、149.0 s和119.2 s，δ_H 7.38 s)；1个1,4-二取代苯环 [δ_C 129.7 s、131.1 d (2C)、115.2 d (2C) 和161.5 s；δ_H7.70 (d,J = 8.6 Hz)，δ_H6.86 (d,J = 8.6 Hz)]；1个氧化的亚甲基 [δ_C 73.1 t；δ_H4.54 (dd J = 11.2,6.4 Hz),4.74 (t,J = 11.2 Hz)]；1个次甲基 (δ_C 47.3 d；δ_H 4.22,dd,J = 11.2,6.4 Hz)；1个羟甲基 (δ_C 54.0 t；δ_H 4.45 s)；2个甲氧基 (δ_C 61.1 q和56.0 q；δ_H 3.85 s和3.81 s)；1个羰基 (δ_C 196.2 s) 信号，以及1个酚羟基 (δ_H10.92 s)。2个苯环基及化合物中二氢异黄酮类化合物特征信号（C-2～4）可初步推测化合物为二氢异黄酮类化合物^[5]。根据H-2和C-9、C-3、C-4、C-1′，以及H-3和C-1′、C-2′，C-6′、C-2、C-4、C-10的HMBC（图 1）相关和进一步确定化合物为二氢异黄酮类化合物。进一步分析其HMBC相关信号，根据甲氧基氢 (δ_H 3.85 s 和3.80 s) 分别和C-7 (δ_C 120.7)和C-4′ (δ_C 161.0) 有HMBC相关可证实2个甲氧基分别取代在C-6和C-4′位，根据羟甲基氢H-1″和C-7、C-8和C-9有HMBC相关可证实羟甲基取代在C-8位。酚羟基取代在C-6位可由酚羟基信号和C-5、C-6和C-7的HMBC相关得到确认。根据化合物中C-2和C-3的核磁共振数据、化合物的旋光度和CD谱数据和已报道过的同类化合物（3R构型的异黄酮旋光度为左旋，CD谱在250和344 nm有正cotton效应；而3S构型的异黄酮旋光度为右旋，CD谱在230和326 nm有负cotton效应）对比^{[6, 7]}，确认化合物中的手性碳C-3为R构型。至此，鉴定化合物1的结构为3R-6-羟基-8-羟甲基-4′,7-二甲氧基-二氢异黄酮，为1个新化合物，命名为补骨脂异黄酮A。

表 1(Table 1)

表 1 化合物1的1H- 和13C-NMR数据(500/125 MHz,C5D5N) Table 1 1H- and 13C-NMR data of compound 1 (500/125 MHz,C5D5N) 碳位 δC δH 2 73.1 t 4.54 (dd,J= 11.2,6.4 Hz) 4.74 (t,J= 11.2 Hz) 3 47.3 d 4.22 (dd,J= 11.2,6.4 Hz) 4 196.2 s 5 117.2 d 7.38 (s) 6 142.5 s 7 155.8 s 8 124.5 s 9 149.0 s 10 119.2 s 1′ 129.7 s 2′,6′ 131.1 d 7.70 (d,J = 8.6 Hz) 3′,5′ 115.2 d 6.86 (d,J = 8.6 Hz) 4′ 161.5 s 1′′ 54.0 t 4.45 (s) 7-OMe 61.1 q 3.85 (s) 4′-OMe 56.0 q 3.81 (s) Ar-OH 10.92 (s)

表 1 化合物1的1H- 和13C-NMR数据(500/125 MHz,C5D5N) Table 1 1H- and 13C-NMR data of compound 1 (500/125 MHz,C5D5N)

图 1 化合物1的结构及主要HMBC相关Fig.1 Structure and key HMBC correlations of compound 1

由于有文献报道补骨脂中的黄酮类化合物具有明显的细胞毒活性，因此对化合物1进行了细胞毒活性筛选。细胞毒活性检测采用改良的MTT法^[8]，测试细胞株为NB4、A549、SHSY5Y、PC3、MCF7。结果表明，化合物1对所选的5株细胞的IC₅₀值分别为12.6、5.3、15.5、4.8和11.2 μmol/L；以紫杉醇为阳性对照（其对各细胞株的IC₅₀值分别为0.03、0.02、0.10、0.10、0.05 μmol/L），化合物1表现出一定的细胞毒活性。