中草药  2015, Vol. 46 Issue (12): 1723-1726
0
  PDF    
引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.12.002
李曼曼, 李月婷, 黄正, 张静, 霍会霞, 庞道然, 郑姣, 张倩, 赵云芳, 李军, 屠鹏飞. 牡荆叶中1个新黄酮苷类化合物[J]. 中草药, 2015, 46(12): 1723-1726.
LI Man-man, LI Yue-ting, HUANG Zheng, ZHANG Jing, HUO Hui-xia, PANG Dao-ran, ZHENG Jiao, ZHANG Qian, ZHAO Yun-fang, LI Jun, TU Peng-fei. A new flavonoid glycoside from leaves of Vitex negundo var. cannabifolia[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2015, 46(12): 1723-1726.
牡荆叶中1个新黄酮苷类化合物
李曼曼1,2, 李月婷1,2, 黄正1,2, 张静1,2, 霍会霞1,2, 庞道然1,2, 郑姣1, 张倩1, 赵云芳1, 李军1 , 屠鹏飞1     
1. 北京中医药大学 中药现代研究中心, 北京 100029;
2. 北京中医药大学中药学院, 北京 100102;
收稿日期: 2015-03-18;
基金项目： 教育部新世纪优秀人才支持计划资助项目(NCET-13-0693);国家"重大新药创制"科技重大专项资助项目(2013ZX09402201001)
作者简介：李曼曼(1988—),女,硕士研究生,研究方向为中药活性成分和质量评价研究。Tel:(010)64286490E-mail:limanman00@163.com
通讯作者：李军Tel:(010)64286350E-mail:drlj666@163.com屠鹏飞Tel:(010)82802750E-mail:pengfeitu@163.com
摘要：目的 研究牡荆Vitex negundo var. cannabifolia叶中黄酮苷类化学成分。方法 采用硅胶、Sephadex LH-20和ODS等柱色谱技术, 对牡荆叶的化学成分进行分离、纯化, 通过其理化性质及MS、NMR等谱学数据鉴定化合物的结构。结果 从牡荆叶95%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位分离得到7个黄酮苷类化合物, 分别鉴定为木犀草素-4'-O-(6"-O-对羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷(1)、木犀草素-7-O-(6"-O-对羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷(2)、木犀草素-6-C-(6"-O-反式-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷(3)、木犀草素-6-C-(2"-O-反式-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷(4)、perfoliatumin A(5)、异牡荆素(6)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(7)。结论 化合物1为新化合物, 命名为牡荆宁G;化合物2～4、7为首次从该植物中分离得到, 化合物5为首次从牡荆属植物中分离得到。
关键词： 马鞭草科     牡荆     黄酮苷     牡荆宁G     异牡荆素    
A new flavonoid glycoside from leaves of Vitex negundo var. cannabifolia
LI Man-man1,2, LI Yue-ting1,2, HUANG Zheng1,2, ZHANG Jing1,2, HUO Hui-xia1,2, PANG Dao-ran1,2, ZHENG Jiao1, ZHANG Qian1, ZHAO Yun-fang1, LI Jun1 , TU Peng-fei1     
1. Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China;
2. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China;
Abstract: Objective To investigate the flavonoid glycosides from the leaves of Vitex negundo var. cannabifolia. Methods Column chromatography including silica gel, Sephadex LH-20, and ODS was used to separate and purify the chemical constituents, and their structures were elucidated by physicochemical properties, MS, and NMR spectroscopic data. Results Seven flavonoid glycosides were obtained from the ethyl acetate layer of 95% EtOH extract of the leaves of V. negundo var. cannabifolia, and identified as luteolin-4'-O-(6"-O-p-hydroxybenzoyl)-β-D-glucoside (1), luteolin-7-O-(6"-O-p-hydroxybenzoyl)-β-D-glucoside (2), luteolin-6-C- (6"-O-trans-caffeoyl)-β-D-glucoside (3), luteolin-6-C-(2"-O-trans-caffeoyl)-β-D-glucoside (4), perfoliatumin A (5), isovitexin (6), and luteolin-7-O-β-D-glucoside (7). Conclusion Compound 1 is a new compound named cannabifolin G; Compounds 2—4 and 7 are obtained from this plant for the first time; Compound 5 is firstly isolated from the plants in Vitex L.
Key words: Verbenaceae     Vitex negundo L. var. cannabifolia (Sieb. et Zucc.) Hand. -Mazz.     flavonoid glycoside     cannabifolin G     isovitexin    

牡荆叶为马鞭草科（Verbenaceae）牡荆属Vitex L. 植物牡荆Vitex negundo L. var. cannabifolia (Sieb. et Zucc.) Hand. -Mazz. 的叶，在全国各地均有分布。牡荆的新鲜叶具有祛痰、止咳、平喘的功效，主要用于咳嗽痰多，鲜叶提取的挥发油可用于治疗慢性支气管炎[1]。牡荆的干燥叶具有解表化湿、祛痰平喘、解毒等功效，主要用于伤风感冒、咳嗽哮喘、胃痛、腹痛、暑湿泻痢、脚气肿胀、风疹瘙痒、脚癣、乳痈肿痛、蛇虫咬伤等[2]。文献报道，牡荆主要含有二萜[3, 4]、黄酮[3, 4, 5, 6]、环烯醚萜苷[3, 5]、木脂素[5]、酚苷[4, 5]及挥发性成分。目前，对牡荆叶的化学和药理活性研究多集中于其挥发油部分，而对其非挥发性成分研究报道较少。本课题组前期对牡荆干燥叶95%乙醇提取物的醋酸乙酯部位进行了系统的化学研究[7]。本实验从牡荆叶醋酸乙酯部位中分离得到7个黄酮苷类化合物，分别鉴定为木犀草素-4′-O- (6″-O-对羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷 [luteolin-4′- O-(6″-O-p-hydroxybenzoyl)-β-D-glucoside，1]、木犀草素-7-O-(6″-O-对羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷 [luteolin-7-O-(6″-O-p-hydroxybenzoyl)-β-D-glucoside，2]、木犀草素-6-C-(6″-O-反式-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷 [luteolin-6-C-(6″-O-trans-caffeoyl)-β-D-glucoside，3]、木犀草素-6-C-(2″-O-反式-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷 [luteolin-6-C-(2″-O-trans-caffeoyl)-β-D-glucoside，4]、perfoliatumin A（5）、异牡荆素（isovitexin，6）和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（luteolin-7-O-β-D- glucoside，7）。化合物1为新化合物，化合物5为首次从牡荆属植物中分离得到，化合物2～4、7为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

高效液相-离子阱-飞行时间质谱仪（日本岛津公司）；Varian 500核磁共振仪（美国Varian公司）；Sephadex LH-20填料（Amersham Biosciences，瑞典）；ODS柱色谱填料（40～63 μm，德国Merck）；硅胶GF254薄层预制板（烟台化学工业研究所）；柱色谱用硅胶（200～300目）为青岛海洋化工厂生产，其他试剂均为分析纯。

牡荆叶于2012年9月采自河南省信阳市，由北京大学药学院屠鹏飞教授鉴定为牡荆Vitex negundo L. var. cannabifolia (Sieb. et Zucc.) Hand. -Mazz. 的叶。植物标本（编号JLI-VNC-201209）存放于北京中医药大学中药现代研究中心。

2 提取与分离

牡荆叶（10.0 kg）用95%乙醇回流提取（3×100 L，每次3 h），提取液减压回收溶剂，得到总浸膏（3.6 kg），加适量水混悬，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚部位（310 g）、醋酸乙酯部位（350 g）、正丁醇部位（1 300 g）。

醋酸乙酯部位（290 g）经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇（20∶1→0∶1）梯度洗脱得到12个流分（Fr. 1～12）。Fr. 8经硅胶柱色谱（200～300目）分离，得9个流分（Fr. 8A～8I）。Fr. 8E经Sephadex LH-20、硅胶柱色谱纯化，得到化合物1（4 mg）和2（2 mg）。Fr. 10经硅胶柱色谱（200～300目）分离，氯仿-甲醇（20∶1→0∶1）梯度洗脱，得9个流分（Fr. 10A～10I）。Fr. 10F经反复硅胶、ODS和Sephadex LH-20柱色谱分离，得化合物3（200 mg）、4（50 mg）和5（20 mg）。Fr. 10G经Sephadex LH-20柱色谱分离，得化合物6（55 mg）和7（15 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：比旋光度 -83° (c 0.1，MeOH)。(nm): 326,261,211。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 567.112 6 [M－H]-，计算值567.114 4，结合13C-NMR谱数据确定该化合物的分子式为C28H24O13。IR谱显示该化合物含羟基（3 440 cm-1）、羰基（1 658 cm-1）及苯基（1 619 cm-1和1 508 cm-1）等官能团。在化合物1的1D NMR中，出现1组对羟基苯甲酰基信号δH 7.83 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-2′′′,6′′′),6.88 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-3′′′,5′′′)；δC 165.8 (C=O),162.5 (C-4′′′),131.9 (C-2′′′,6′′′),115.8 (C-3′′′,5′′′)，1组葡萄糖残基信号δH4.98 (1H,d,J = 7.0 Hz,H-1″)；δC101.4 (C-1″),73.7 (C-2″),76.2 (C-3″),70.7 (C-4″),74.5 (C-5″),64.1 (C-6″) 和1组木犀草素的信号 δH 6.73 (1H,s,H-3),6.49 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-8),6.21 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),7.46 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),7.25 (1H,dd,J = 8.5,2.0 Hz,H-6′),7.18 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′)。提示化合物1是1 个木犀草素葡萄糖苷类化合物[8]。将化合物1和木犀草素- 7-O-(6″-O-对羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷（2）的NMR数据[8]进行比较，发现二者数据接近。在化合物1的HMBC谱中，葡萄糖的H-1″ (δH 4.98) 与木犀草素的C-4′ (δC 148.7) 存在氢-碳远程相关；在NOE实验中，照射葡萄糖的H-1″ (δH 4.98) 时，木犀草素的H-5′ (δH 7.18) 信号发生明显增益。上述数据证明化合物1中葡萄糖的1位连接在木犀草素的C-4′位而不是C-7位。在1D NMR谱中，葡萄糖的H-6″ (δH 4.54,4.25) 和C-6″ (δC 64.1) 明显向低场位移，推测葡萄糖的6-OH被酰化，由此推断对羟基苯甲酰基连接在葡萄糖的6位；根据HMBC谱中葡萄糖H-6″b (δH 4.25) 与对羟基苯甲酰基的羰基C-7′′′ (δC 165.8) 的氢-碳远程相关信号进一步证实了上述推断。综上所述，化合物1的结构鉴定为木犀草素-4′-O-(6″-O-对羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷，命名为牡荆宁G。结构见图 1，其核磁数据归属见表 1。

图 1 化合物1的结构式和关键的NOE、HMBC相关Fig.1 Structure and key NOE and HMBC correlations of compound 1

表 1 化合物1和2的NMR数据 Table 1NMR spectroscopic data of compounds 1 and 2

化合物2：黄色粉末，ESI-MS m/z: 567 [M－H]－。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.02 (1H,s,5-OH),7.79 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-2′′′,6′′′),7.42 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),7.41 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-6′),6.89 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′),6.77 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),6.75 (1H,s,H-3),6.71 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-3′′′,5′′′),6.51 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),5.20 (1H,d,J = 7.5 Hz,H-1″),4.56 (1H,d,J = 11.0 Hz,H-6″a),4.13 (1H,dd,J = 12.0,7.5 Hz,H-6″b),3.91(1H,d,J = 10.0 Hz,H-5″),3.45 (1H,m,H-2″),3.45 (1H,m,H-3″),3.32 (1H,m,H-4″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 数据见表 1。以上数据与文献报道基本一致[8]，故鉴定化合物2为木犀草素-7-O-(6″-O-对羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷。

化合物3：黄色粉末，ESI-MS m/z: 609 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.51 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-7′′′),7.23 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),7.21 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-6′),6.96 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′′′),6.84 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-6′′′),6.81 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′′′),6.72 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′),6.37 (1H,s,H-3),6.34 (1H,s,H-8),6.23 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-8′′′),4.96 (1H,d,J = 10.0 Hz,H-1″),4.57 (1H,d,J = 11.5 Hz,H-6″a),4.41 (1H,dd,J = 12.0,5.5 Hz,H-6″b),4.27 (1H,m,H-2″),3.73 (1H,brs,H-5″),3.58 (1H,m,H-4″),3.58 (1H,m,H-3″)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 183.8 (C-4),169.4 (C-9′′′),166.0 (C-2),164.8 (C-7),162.0 (C-5),158.6 (C-9),150.8 (C-4′),149.5 (C-4′′′),147.2 (C-7′′′),146.8 (C-3′′′),146.6 (C-3′),127.8 (C-1′′′),123.5 (C-1′),123.1 (C-6′′′),120.5 (C-6′),116.8 (C-5′),116.5 (C-5′′′),115.3 (C-2′′′),114.9 (C-8′′′),114.2 (C-2′),108.6 (C-6),105.2 (C-10),103.9 (C-3),95.4 (C-8),79.9 (C-3″),79.9 (C-5″),75.5 (C-1″),72.6 (C-2″),72.0 (C-4″),65.1 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致[8]，故鉴定化合物3为木犀草素-6-C-(6″-O-反式-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷。

化合物4：黄色粉末，ESI-MS m/z: 609 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.36 (1H,d,J = 15.5 Hz,H-7′′′),7.25 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),7.22 (1H,dd,J = 8.5,2.5 Hz,H-6′),6.89 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′′′),6.82 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-6′′′),6.78 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′′′),6.68 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′),6.40 (1H,s,H-8),6.38 (1H,s,H-3),6.04 (1H,d,J = 15.5 Hz,H-8′′′),5.66 (1H,brs,H-2″),5.12 (1H,d,J = 10.0 Hz,H-1″),3.96 (1H,dd,J = 12.0,2.0 Hz,H-6″a),3.82 (1H,dd,J = 12.0,5.5 Hz,H-6″b),3.77 (1H,t,J = 9.0 Hz,H-3″),3.63 (1H,t,J = 9.0 Hz,H-4″),3.53 (1H,m,H-5″)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 183.9 (C-4),168.4 (C-9′′′),166.3 (C-2),164.6 (C-7),161.5 (C-5),158.8 (C-9),151.0 (C-4′),149.5 (C-4′′′),147.1 (C-7′′′),146.9 (C-3′),146.7 (C-3′′′),128.0 (C-1′′′),123.6 (C-1′),123.0 (C-6′′′),120.5 (C-6′),116.8 (C-5′),116.6 (C-5′′′),115.2 (C-2′′′),115.0 (C-8′′′),114.3 (C-2′),107.9 (C-6),105.1 (C-10),104.0 (C-3),95.5 (C-8),82.9 (C-5″),78.1 (C-3″),74.0 (C-2″),73.3 (C-1″),71.9 (C-4″),62.9 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致[8]，故鉴定化合物4为木犀草素-6-C -(2″- O-反式-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：黄色粉末，ESI-MS m/z: 567 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.59 (1H,s,5-OH),7.80 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-2′′′,6′′′),7.40 (1H,dd,J = 8.5,2.0 Hz,H-6′),7.39 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),6.88 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′),6.84 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-3′′′,5′′′),6.65 (1H,s,H-3),6.47 (1H,s,H-8),4.65 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-1″),4.43 (1H,d,J = 11.5 Hz,H-6″a),4.25 (1H,dd,J = 11.5,4.5 Hz,H-6″b),4.13 (1H,t,J = 8.0 Hz,H-2″),3.50 (1H,brs,H-5″),3.32 (1H,t,J = 9.0 Hz,H-4″),3.26 (1H,t,J = 8.5 Hz,H-3″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 181.8 (C-4),165.5 (C-7′′′),163.6 (C-2),163.3 (C-7),161.9 (C-4′′′),160.8 (C-5),156.2 (C-9),149.7 (C-4′),145.7 (C-3′),131.4 (C-2′′′,6′′′),121.3 (C-1′),120.4 (C-1′′′),118.9 (C-6′),116.0 (C-5′),115.3 (C-3′′′,5′′′),113.2 (C-2′),108.6 (C-6),103.3 (C-10),102.7 (C-3),93.5 (C-8),78.7 (C-3″),78.1 (C-5″),73.2 (C-1″),70.2 (C-2″),70.0 (C-4″),64.2 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致[9]，故鉴定化合物5为perfoliatumin A。

化合物6：黄色粉末，ESI-MS m/z: 431 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.58 (1H,s,5-OH),7.87 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.92 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),6.73 (1H,s,H-8),6.54 (1H,s,H-3),4.66 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-1″),4.10 (1H,m,H-2″),3.74 (1H,d,J = 11.0 Hz,H-6″a),3.50 (1H,dd,J = 10.5,4.5 Hz,H-6″b),3.29～3.18 (3H,m,H-3″～5″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 182.1 (C-4),163.8 (C-2),163.5 (C-7),161.3 (C-4′),160.8 (C-5),156.5 (C-9),128.6 (C-2′,6′),121.3 (C-1′),116.2 (C-3′,5′),108.9 (C-6),103.7 (C-10),103.0 (C-3),94.0 (C-8),81.7 (C-5″),79.1 (C-3″),73.3 (C-1″),70.8 (C-2″),70.5 (C-4″),61.7 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致[6]，故鉴定化合物6为异牡荆素。

化合物7：黄色粉末，ESI-MS m/z: 447 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 7.44 (1H,dd,J = 8.0,1.5 Hz,H-6′),7.41 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-2′),6.91 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′),6.79 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-8),6.74 (1H,s,H-3),6.44 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-6),5.08 (1H,d,J = 7.5 Hz,H-1″),3.72～3.19 (6H,m,H-2″～6″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 181.9 (C-4),164.5 (C-2),162.9 (C-7),161.1 (C-5),156.9 (C-9),150.0 (C-4′),146.0 (C-3′),121.3 (C-1′),119.2 (C-6′),116.0 (C-5′),113.5 (C-2′),105.3 (C-10),103.1 (C-3),99.9 (C-6),99.5 (C-1″),94.7 (C-8),77.2 (C-3″),76.4 (C-5″),73.1 (C-2″),69.6 (C-4″),60.6 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化合物7为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[2] 国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草 (第18卷) [M]. 上海: 上海科技出版社, 1999.
[3] Taguchi H. Studies on the constituents of Vitex cannabifolia [J]. Chem Pharm Bull, 1976, 24(7): 1668-1670.
[4] Chen Y J, Li C M, Ling W W, et al. A rearranged labdane-type diterpenoid and other constituents from Vitex negundo var. cannabifolia [J]. Biochem Syst Ecol, 2012, 40(2): 98-102.
[5] Yamasaki T, Kawabata T, Masuoka C, et al. Two new lignan glucosides from the fruit of Vitex cannabifolia [J]. J Nat Med, 2008, 62(1): 47-51.
[6] Ling T J, Ling W W, Chen Y J, et al. Antiseptic activity and phenolic constituents of the aerial parts of Vitex negundo var. cannabifolia [J]. Molecules, 2010, 15(11): 8469-8477.
[7] Li M M, Su X Q, Sun J, et al. Anti-inflammatory ursane- and oleanane-type triterpenoids from Vitex negundo var. cannabifolia [J]. J Nat Prod, 2014, 77(10): 2248-2254.
[8] Hirobe C, Qiao Z S, Takey K, et al. Cytotoxic flavonoids from Vitex agnus-castus [J]. Phytochemistry, 1997, 46(3): 521-524.
[9] Zhu G H, Wang D Y, Jurrcai M. New compounds from Polygonum perfoliatum L. [J]. Indian J Heterocy Ch, 2000, 10(1): 41-44.
[10] 徐燕, 梁敬钰. 苦苣菜的化学成分 [J]. 中国药科大学学报, 2005, 36(5): 411-413.