栀子Gardeniae Fructus为茜草科（Rubiaceae）植物栀子Gardenia jasminoides Eills的干燥成熟果实，《中国药典》2010年版收载的有生栀子、炒栀子和焦栀子^[1]。栀子是临床常用中药，有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效，现代药理研究表明栀子具有抗炎、镇静、镇痛、保肝利胆、抗凝血等作用。已知的主要有效成分为有机酸、环烯醚萜苷和色素。其中有机酸以绿原酸等为代表，环稀醚萜苷 以栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平苷酸等为代表，色素以西红花苷I和西红花苷II等为代表。但其味苦，性大寒，易损伤脾胃，自古以来即很重视对其的炮制处理^[2]。栀子常见炮制法为药典法^[1]、章帮法^[3]和建昌帮法^[4]，各种炮制法仅从栀子果实选用部位就存在差异，药典法是对全果炮制、章帮法是弃皮留仁炮制，建昌帮法中还有对栀子果皮单独炮制。虽已有报道关于栀子果皮、果仁成分差异和栀子炮制研究^[5]，但选用的指标成分较少，也缺乏系统性。

通过对22批栀子类药材中10种主要有效成分研究，发现虽然不同产地批次栀子有效成分的量存在差异，但栀子中栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、去乙酰车叶草酸甲酯、西红花苷I、西红花苷II等的量稳定^[6]；京尼平苷酸是栀子中环烯醚萜类代表成分之一，绿原酸是栀子有机酸中最具有代表性成分之一，具有显著的抗炎活性。为了更好地阐明栀子果仁、果皮分开药用的物质基础和栀子炮制的机制，也为制定栀子炮制规范提供依据，本实验利用HPLC-DAD对栀子全果、果仁、果皮及各自炮制品中绿原酸、栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平苷酸、西红花苷I、西红花苷II 7种成分的量进行测定比较分析。

Agilent1260，美国Agilent公司，包括G1311C四元梯度泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G4212B二极管阵列检测器；BP224S型万分之一电子天平，Sartorius公司；KQ-300E超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；永历111B中药粉碎机；CCFG-160型电炒锅，广东湛江家用电器工业公司。

京尼平苷酸（批号111828-201102，质量分数96.0%）、栀子苷（批号110749-201316，质量分数97.5%）、去乙酰车叶草酸甲酯（批号111786-200801，质量分数99.9%）、绿原酸（批号110753-201314，质量分数96.6%）、西红花苷I（批号111588-201202，质量分数91.1%）、西红花苷II（批号111589-201304，质量分数92.4%），以上对照品均购自中国食品药品检定研究院；京尼平龙胆双糖苷（HPLC测定质量分数＞98%，批号ZM0501BA14），购自上海源叶生物科技有限公司；进口色谱纯乙腈（ACS）；甲醇、磷酸为分析纯；水为娃哈哈纯净水。

栀子生品由汇仁集团提供，批号为20140601，经江西中医药大学药学院葛菲教授鉴定为栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。栀子各种炮制品（栀子全果炒黄、炒焦，栀子果仁炒黄、炒焦，栀子果皮炒黄、炒焦）由同一批生栀子炮制8批，在江西中医药大学药学院钟凌云教授指导下完成炮制。

取栀子各种生品及其炮制品粉末约0.20 g（过4号筛），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，称定质量，超声处理40 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得。

分别精密称取京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I、西红花苷II对照品适量，加50%甲醇溶解制成质量浓度分别43.00、25.63、154.56、1 249.00、27.60、145.50、51.90 μg/mL的混合对照品溶液，取适量混合对照品溶液分别稀释2、4、8、16、32倍，待用。

色谱柱为Venusil MPC₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.1%磷酸水溶液-乙腈，梯度洗脱：0～18 min，8%～15%乙腈；18～25 min，15%～23%乙腈；25～40 min，23%～35%乙腈；40～55 min，35%～65%乙腈；柱温20 ℃；体积流量0.8 mL/min；检测波长为240、330、440 nm；进样量为10 μL。色谱见图 1。

1-京尼平苷酸 2-去乙酰车叶草酸甲酯 3-京尼平龙胆二糖苷 4-栀子苷 5-西红花苷I 6-西红花苷II 7-绿原酸 1-geniposidic acid 2-deacetyl asperulosidic acid methyl ester 3-genipin-1-β-D-gentiobioside 4-gardenoside 5-crocin-I 6-crocin-II 7-chlorogenic acid 图 1 栀子生品及其不同炮制品在检测波长240 nm (A)、440nm (B) 和330 nm (C) 下的HPLC-DAD色谱图Fig.1 HPLC-DAD chromatograms of Gardeniae Fructus by different processing methods at detection wavelength of 240 (A),440 (B),and 330 (C)nm

将“2.2”项中稀释不同倍数的混合对照品溶液，按“2.3”项下的色谱条件进行测定，进样量10 μL。以峰面积积分值为纵坐标（Y），进样质量浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程分别为京尼平苷酸：Y＝16 936.4 X＋0.55，r＝0.999 91，线性范围1.34～43.00 μg/mL；去乙酰车叶草酸甲酯：Y＝15 464.7 X－1.18，r＝0.999 99，线性范围0.80～25.63 μg/mL；京尼平龙胆二糖苷：Y＝87 772.2 X＋15.1，r＝0.999 90，线性范围4.83～154.56 μg/mL；栀子苷：Y＝13 032.6 X＋57.0，r＝0.999 92，线性范围39.03～1 249.00 μg/mL；绿原酸：Y＝24 543.2 X＋17.8，r＝0.999 14，线性范围0.86～27.60 μg/mL；西红花苷I：Y＝53 426.4 X＋71.0，r＝0.999 51，线性范围 4.55～145.50 μg/mL；西红花苷II：Y＝31 275.0 X－1.4，r＝0.999 93，线性范围1.62～51.90 μg/mL；结果表明各成分在相应的范围内，进样质量浓度与峰面积线性关系良好。

取“2.2”项中混合对照品2倍稀释液，按“2.3”项下的色谱条件，连续进样6次，每次10 μL，测定得各峰面积的RSD分别为0.47%、0.83%、0.15%、0.12%、0.54%、0.26%、0.32%，符合规定，说明仪器精密度良好。

取栀子生品（汇仁集团，批号20140601）粉末约0.2 g，精密称定6份，按“2.1”项中制备供试品溶液，以“2.3”项下的色谱条件分别进行测定，测得样品中京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I、西红花苷II的平均质量分数的RSD分别为1.73%、1.39%、1.40%、0.81%、1.10%、1.18%、1.38%，表明该方法重复性良好。

精密吸取同一供试品溶液，按“2.3”项下的色谱条件分别在0、2、4、6、8、12、24 h进样测定，测得样品中京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I、西红花苷II平均质量分数的RSD分别为0.55%、0.22%、0.42%、0.15%、0.99%、0.20%、0.64%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

取栀子生品粉末约0.2 g，精密称定，共6份，分别加入一定量的京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I、西红花苷II对照品，按“2.1”项中方法制备供试品溶液，以“2.3”项下的色谱条件分别进行测定，计算加样回收率，结果京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I、西红花苷II的平均回收率分别为98.38%、99.05%、97.95%、98.78%、97.16%、98.20%、98.35%，RSD分别为1.82%、0.31%、0.20%、0.82%、0.99%、1.01%、0.74%。

取栀子全果、果皮、果仁及其炒黄和炒焦品9种样品粉末各0.20 g，每种饮片8批次，按“2.1”项方法制备供试品溶液，以“2.3”项色谱条件测定各种供试品溶液峰面积，按回归方程计算各成分质量分数，结果见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 样品测定结果 (±s, n = 8) Table 1 Determination of content in sample (±s,n = 8) 样品 质量分数/(mg∙g-1) 京尼平苷酸 去乙酰车叶草酸甲酯 京尼平龙胆二糖苷 绿原酸 栀子苷 西红花苷I 西红花苷II 全果生品 0.198±0.006 2.251±0.041 4.113±0.042 1.304±0.023 50.991±0.918 15.163±0.285 2.146±0.038 全果炒黄 0.261±0.009 1.945±0.039 4.173±0.046 1.123±0.027 51.263±1.021 11.032±0.231 1.674±0.037 全果炒焦 0.503±0.012 1.613±0.035 4.122±0.051 1.031±0.025 47.384±1.112 1.734±0.037 0.203±0.005 果仁生品 0.191±0.007 0.761±0.018 7.154±0.141 0.605±0.010 86.572±1.635 16.381±0.316 2.272±0.032 果仁炒黄 0.255±0.010 0.624±0.017 7.111±0.150 0.483±0.011 86.425±1.589 13.975±0.294 1.775±0.035 果仁炒焦 0.292±0.011 0.492±0.011 7.192±0.148 0.201±0.008 81.523±1.037 5.542±0.135 0.632±0.014 果皮生品 0.225±0.005 3.215±0.063** 0.333±0.006** 2.563±0.049** 17.621±0.324** 9.560±0.182 1.803±0.042 果皮炒黄 0.324±0.008 2.823±0.059 0.324±0.007 2.302±0.051 17.385±0.319 8.840±0.206 1.521±0.034 果皮炒焦 0.363±0.009 2.421±0.060 0.331±0.007 1.834±0.042 16.493±0.278 2.070±0.073 0.385±0.009 与栀子果仁生品比较：*P＜0.05 **P＜0.01 *P< 0.05 **P < 0.01 vs peels of Gardeniae Fructus

表 1 样品测定结果 (±s, n = 8) Table 1 Determination of content in sample (±s,n = 8)

对栀子果仁、果皮、全果生品中的7种成分测定结果比较分析，发现各组分质量分数相差较大。其中去乙酰车叶草酸甲酯、绿原酸的量在栀子果皮中远高于栀子果仁（P＜0.01），而栀子苷、京尼平龙胆二糖苷的量在栀子果仁中远高于栀子果皮（P＜0.01），西红花苷I、西红花苷II的量在栀子果仁中明显高于栀子果皮（P＜0.05）。分别对栀子全果及其炮制品，栀子果仁及其炮制品，栀子果皮及其炮制品7种成分质量分数进行比较分析，发现栀子各生品经炮制后，7种成分质量分数变化趋势基本一致，表现在京尼平苷酸质量分数升高，去乙酰车叶草酸甲酯、绿原酸、栀子苷、西红花苷I、西红花苷II质量分数下降，而京尼平龙胆二糖苷质量分数变化没有显著性差异。其中栀子苷在果仁、果皮生品炒黄后质量分数稍有下降，炒焦后质量分数下降明显（P＜0.05）；西红花苷I和西红花苷II在栀子各生品炮制后质量分数急剧下降。

栀子中京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷为环稀醚萜类化合物，结构相似，最大吸收波长均为240 nm，梯度洗脱有较好分离度；绿原酸最大吸收波长为330 nm；西红花苷I、西红花苷II的最大吸收波长均为440 nm，分离效果良好。通过方法学考察，本色谱条件可以准确检测栀子中7种成分的量。

实验结果表明，栀子炮制过程中不同化合物对热稳定性存在差异，强弱的顺序依次为京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、去乙酰车叶草酸甲酯、绿原酸、西红花苷I、西红花苷II。京尼平苷酸质量分数升高，说明炮制可能促使栀子中其他化合物生成京尼平苷酸。

樟帮法炮制栀子需去皮留仁，从本实验中可以找到其内在的依据。鉴于果仁、果皮中栀子苷、西红花苷I、京尼平龙胆二糖苷质量分数的差异，可以认为栀子果仁在很多药效方面要比等量的栀子果皮的效果好。建昌帮法炮制栀子以果皮、果仁分用为特点，虽然栀子中很多有效成分的分布果仁中远高于果皮，但果皮中绿原酸、去乙酰车叶草酸甲酯质量分数远高于果仁，分别为果仁中的4.2、4.3倍。同时说明栀子果皮、果仁内在成分各有其特点，也可以认为在某些药效方面栀子果皮比果仁效果好。《本草备要》中也有“内热用仁，表热用皮”的论述^[8]，表明栀子果皮、果仁的使用具有针对性，与栀子建昌帮法炮制相一致。药典法炮制栀子是以栀子全果入药或炮制。由实验结果可知，尽管栀子果皮、果仁中的各种成虽然质量分数存在差异，但其有效成分种类极具相似性，说明了栀子药典法炮制的合理性。不同的炮制方法有其各自的特点，这也与一味药常有数种功效有关。为了更好地开发利用栀子，从资源保护角度，建议提倡药典法炮制栀子，且栀子樟帮法炮制与建昌帮法炮制并行发展。