补阳还五汤（BHD）出自清代王清任著《医林改错》，由黄芪、赤芍、川芎、当归、地龙、桃仁、红花7味中药组成。方中重用生黄芪以补元气，气行则血行，为君药；当归活血补血，为臣药；再配以赤芍、川芎、红花、桃仁等活血祛瘀之品，使瘀祛而不伤正；地龙长于通行经络，诸药合用共奏补气活血通络之功，是治疗气虚血瘀所致偏瘫的常用方。现代药效学研究证实BHD药理作用广泛^[1,2,3]，其中抗氧化^[4]、保护心脑血管功效近几年关注较多^[5,6]，临床上，常用于多种心脑血管疾病的治疗^[7]。

本实验是在BHD药动学研究基础上^[8]采用整体及血清药理学的方法^[9,10]，以丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）为抗氧化作用的指标，评价BHD在小鼠体内的药效动力学过程，明确 其抗氧化作用的量-效关系与时-效关系，获取相应的动力学参数，为临床合理用药提供了依据。 1 材料 1.1 药材与试剂

BHD处方饮片均购自北京同仁堂陕西分公司，经西安交通大学生药学专业牛晓峰教授鉴定，均符合《中国药典》2010年版要求。BHD按《医林改错•卷下•瘫痿论》古方比例（黄芪120 g、归尾3 g、赤芍5 g、地龙3 g、川芎3 g、红花3 g和桃仁3 g）组方。MDA试剂盒（批号20090711）、SOD试剂盒（批号20090703）均购自南京建成生物工程研究所；NaCl、冰醋酸、乙醚（分析纯，西安化学试剂厂），蒸馏水（自制）。 1.2 动物

SPF级ICR小鼠，体质量（22±2）g，雌雄各半，购自西安交通大学医学院实验动物中心，实验动物使用许可证号SYXK（陕）2007-003。 1.3 仪器

752型分光光度计（上海光谱仪器有限公司），GENIUS 16K-R高速冷冻离心机（长沙市鑫奥仪器仪表有限公司），EH₂O蒸馏水机（上海摩勒生物科技有限公司），SC-3616低速离心机（合肥科大创新股份有限公司中佳分公司），XH-B涡旋混合器（姜堰市康健医疗器具有限公司），HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），ANKE LQP-B-4制冰机（上海安亭科学仪器厂），FJ-200高速分散匀质机（上海标本模型厂）。 2 方法 2.1 BHD冻干粉制备

取黄芪120 g、归尾3 g、赤芍5 g、地龙3 g、川芎3 g、桃仁3 g、红花3 g，沸水提取3次（加水量分别为1 400、1 200、900 mL），每次30 min，合并滤液约2 000 mL，经旋转蒸发仪浓缩至约300 mL，冻干，得55.3 g BHD冻干粉备用。 2.2 含药血清制备

健康小鼠，随机分为11组，禁食不禁水12 h，按体质量ig给予BHD（20 g冻干粉加适量蒸馏水定容至50 mL，成流浸膏状），给药体积0.5 mL/20 g（剂量为生药30 g/kg，相当于人临床用药剂量的10倍），给药后5、10、15、30、45、60、90、120、180、360 min，取血，分离血清，冻存备用。 2.3 含药血清对肝组织MDA及SOD影响

健康小鼠禁食12 h，断头放血处死，迅速取出肝脏，冰浴中用预冷的4 ℃生理盐水洗去表面血污，称质量，以1∶9比例加入生理盐水，800×g离心10 min取上清，得肝匀浆，备用。每支2 mL EP管中加入空白肝匀浆1.5 mL后加入0.1 mL BHD含药血清或空白血清，按试剂盒方法测定肝组织中MDA水平及SOD活性，计算BHD含药血清对MDA生成的抑制率及SOD活性提高率。

MDA抑制率＝(空白血清组MDA值－含药血清组MDA值)/空白血清组MDA值

SOD活性提高率＝(含药血清组SOD值－空白血清组SOD值)/空白血清组SOD值 2.4 BHD整体给药对肝组织MDA及SOD影响

将“2.2”项下含药血清制备所用小鼠处死，立即取出肝脏，按“2.3”项操作测定肝组织中MDA水平及SOD活性，计算BHD整体给药后对小鼠肝组织MDA生成的抑制率及SOD活性提高率。 2.5 药效动力学参数估算

时间-效应参数估算：将上述整体及血清药效结果，绘制MDA及SOD时间-效应曲线。计算效应消除速率常数（K_e）、效应消除半衰期［t_1/2(Ke)］、效应呈现速率常数（K_a）、效应呈现半衰期［t_1/2(Ka)］、效应维持时间（t_m）、效应达峰时间（t_p）。 2.6 剂量-效应参数估算

BHD以生药剂量3、12、21、30、39 g/kg（分别相当于人临床用药剂量的1、4、7、10、13倍）分别对小鼠ig给药，根据时效曲线的达峰时间，在给药后90 min时，按“2.3”和“2.4”项方法测定BHD不同剂量整体给药及含药血清对小鼠肝组织MDA及SOD的影响，以正常小鼠作为对照。以剂量对数和相应的抑制率或提高率求出量效方程，计算最低起效剂量D_min＝lg^-1(a/b)（a、b分别为量效方程中的截距和斜率）。 2.7 数据处理

数据采用药效动力学参数估算软件PKSolver 2.0处理，估算药效动力学参数；数据用x±s表示，结果采用SPSS 18.0统计软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析。 3 结果 3.1 对小鼠肝脏MDA的时间-效应关系

BHD给药后小鼠肝脏MDA生成抑制率的时间-效应曲线见图 1，含药血清对空白肝脏MDA生成抑制率的时间-效应曲线见图 2。

图 1 BHD给药后对小鼠肝脏MDA抑制作用时间-效应曲线(x±s,n=10) Fig. 1 Inhibition time-effect curve of MDA level in liver tissue of mice after treatment with BHD(x±s,n=10)

图 2 BHD含药血清对空白肝脏MDA抑制作用时间-效应曲线(x±s,n=10) Fig. 2 Inhibition time-effect curve of MDA inblank liver tissue of mice treated with serum containing BHD(x±s,n=10)

BHD给药后小鼠肝脏SOD活性提高率的时间-效应曲线见图 3，含药血清对空白肝脏SOD活性提高率的时间-效应曲线见图 4。

图 3 BHD给药后对小鼠肝脏SOD活性提高作用时间-效应曲线(x±s,n=10) Fig. 3 Improvement time-effect curve of SOD activity in liver tissue of mice after treatment with BHD(x±s,n=10)

图 4 BHD含药血清对空白肝脏SOD活性提高作用时间-效应曲线(x±s,n=10) Fig. 4 Improvement time-effect curve of SOD activity in blank liver tissue of mice treated with serum containing BHD (x±s,n=10)

给予不同剂量BHD后的小鼠含药血清对空白肝脏MDA生成具有明显抑制作用，与空白血清组比较，差异显著（P＜0.05）；SOD活性明显提高，与空白血清组比较，差异显著（P＜0.05）。整体实验中，给予不同剂量BHD小鼠肝脏中MDA水平受到明显抑制，且SOD活性明显提高，与对照组比较，差异显著（P＜0.05）。方程回归结果见表 1，给药剂量-效应曲线见图 5和6。

表 1(Table 1)

表 1 量效关系回归结果 (n＝3) Table 1 Regression results of dose-effect relationship (n＝3) 指标 样品 回归方程 R2 MDA 整体实验 Y＝17.054 X－1.283 6 0.998 3 含药血清 Y＝14.905 X－3.888 3 0.986 9 SOD 整体实验 Y＝9.048 6 X－1.276 3 0.994 7 含药血清 Y＝17.054 X－1.283 6 0.998 2

表 1 量效关系回归结果 (n＝3) Table 1 Regression results of dose-effect relationship (n＝3)

图 5 不同剂量BHD对小鼠肝脏MDA生成的抑制作用(x±s,n=10) Fig. 5 Inhibition of BHD at different dosages on MDA level inliver of mice(x±s,n=10)

图 6 不同剂量BHD对小鼠肝脏SOD活性的提高作用(x±s,n=10) Fig. 6 Improvement of BHD at different dosages on SOD activity in liver of mice(x±s,n=10)

根据整体实验和血清药理学实验的时间-效应数据，计算效应呈现相和消除相方程，并推算各效应动力学参数，结果见表 2和3，时间-效应曲线整体趋势符合一室开放模型。

表 2(Table 2)

表 2 BHD给药后MDA抑制率药效动力学参数 (n＝10) Table 2 Pharmacodynamic parameters of inhibition on MDA level of miceafter treatment with BHD (n＝10) 参数 单位 整体给药 含药血清 D（给药剂量） g∙kg-1 30 30 Dmin g∙kg-1 0.89 1.71 Ke min-1 0.000 26 0.000 63 Ka min-1 0.143 7 0.104 1 t1/2(Ke) min 2 674.53 1 093.33 t1/2(Ka) min 4.82 6.66 tp min 44.05 49.29 tm min 621.73 276.11

表 2 BHD给药后MDA抑制率药效动力学参数 (n＝10) Table 2 Pharmacodynamic parameters of inhibition on MDA level of miceafter treatment with BHD (n＝10)

表 3(Table 3)

表 3 BHD给药后SOD提高率药效动力学参数 (n＝10) Table 3 Pharmacodynamic parameters of improvement on SOD activity of mice after treatment with BHD (n＝10) 参数 单位 整体给药 血清药理 D（给药剂量） g∙kg-1 30 30 Dmin g∙kg-1 1.17 0.89 Ke min-1 0.004 37 0.002 23 Ka min-1 0.109 8 0.169 0 t1/2(Ke) min 158.45 310.85 t1/2(Ka) min 6.31 4.10 tp min 30.58 25.94 tm min 201.15 375.68

表 3 BHD给药后SOD提高率药效动力学参数 (n＝10) Table 3 Pharmacodynamic parameters of improvement on SOD activity of mice after treatment with BHD (n＝10)

单次ig给药后血清药理与整体药效实验结果表明BHD具有明显抑制小鼠肝组织过氧化脂质生成的作用（P＜0.05），同时对小鼠肝组织SOD活性具有明显的提高作用（P＜0.05）。MDA及SOD的整体和血清药理实验的时-效曲线均呈现明显的多峰现象，药物在实验动物体内药效的呈现和消除相并不具有明显的界限，但整体效应都呈现出先快速升高，后慢慢降低的趋势，与药物在体内的浓度变化过程基本一致。量效研究表明，药效与药物浓度存在一定程度上的相关性。在一定浓度范围内，随着剂量的增加，药理效应呈现出升高的趋势，但随着剂量的进一步增大，药理效应反而减小，说明BHD抗氧化药理作用的发挥存在着最适的药物浓度。超出药物的最适浓度可能会引起一定的其他效应（如药物毒性反应及其他不良反应等），干扰药效。这种关系也能够解释，在时效曲线中给药后药理效应呈现出的多峰现象。BHD抑制MDA生成的最低起效剂量整体实验为0.89 g/kg，血清药理学实验为1.71 g/kg，SOD活性提高的最低起效剂量整体实验为1.17 g/kg，血清药理学实验为0.89 g/kg，说明BHD在较低的剂量下即可产生药理效应。BHD的时间-效应曲线符合一室开放模型。

从BHD抑制MDA水平、增强SOD活性研究的药效动力学参数来看，整体实验和血清药理学实验除t_p和t_1/2(Ka)比较接近外，其余参数均具有明显的差异（P＜0.05），说明药物在体内和体外的作用存在一定的差异，这与体内与体外的药物作用环境的差异直接相关。BHD进入动物体内吸收较快，能够比较迅速地进入血液循环，产生药理效应。用数学“量”的角度解释了BHD血清药理与整体药效在抑制小鼠肝组织MDA生成和提高肝组织SOD活性作用。

综上所述，BHD单次给药在体内作用时间较长，产生药理效应比较迅速，产生效应所需的剂量较低，该方剂为起效较快、疗效好的中药复方制剂。