2015, Vol. 46
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.01.006 |
黄芪为滋补类传统中药，主要含黄芪皂苷类、多糖类和黄酮类生物活性物质，具有增强和调节机体免疫功能、促进机体代谢、抗疲劳、抗缺氧、抗辐射和保肝等作用，在抗肿瘤、抗病毒等方面也有显著功效[1]。黄芪药材原植物为黄芪属植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. 或蒙古黄芪A. membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao[2]，这两种植物在云南无天然分布。然而，由于云南在地理、气候等方面的多样性，致使该地区黄芪属植物种类十分丰富，为公认的黄芪属植物分布中心之一，许多云南黄芪属植物在民间多被当作草药广泛应用，部分种类的药用功效与正品黄芪十分相似[1]。云南黄芪属植物种类虽然异常丰富，但绝大多数至今没有进行系统、深入的研究开发。为全面系统了解云南黄芪属植物品质，本课题组选取分布于云南和西藏东南部海拔2 000～3 700 m山坡林缘，具有益气固表、升阳举陷功效，在《中华本草》上被称为“野黄芪”的长果颈黄芪Astragalus englerianus Ulbr. 为研究对象，采用色谱分离技术结合现代波谱分析、DPPH法等研究手段，对其化学成分和生物活性进行了系统研究，结果从该植物根甲醇提取物的醋酸乙酯部位分离得到29个化合物，分别鉴定为异甘草素（isoliquiritigenin，1）、4′-羟基-2,4-二甲氧基査耳酮（4′-hydroxy-2,4- dimethoxychalcone，2）、xenognosin（3）、芒柄花素（formononetin，4）、毛蕊异黄酮（calycosin，5）、樱黄素（prunetin，6）、(3R)-vestitol（7）、甘草素（liquiritigenin，8）、(6aR,11aR)-美迪紫檀素- 3-O-β-D-葡萄糖苷[(6aR,11aR)-medicarpin-3-O-β-D- glucopyranoside，9]、齐墩果-12-烯-3β,22β,24-三醇（olean-12-en-3β,22β,24-triol，10）、无羁萜（friedelin，11）、β-谷甾醇（β-sitosterol，12）、豆甾醇（stigmasterol，13）、7β-羟基谷甾醇（7β- hydroxysitosterol，14）、7-氧谷甾醇（7-oxositosterol，15）、(9′Z)-9′-十七烯酸-3β-谷甾醇酯 [3β-sitosteryl (9′Z)-9′-heptadecenoate，16]、豆甾-4-烯-3-酮（stigmast-4-en-3-one，17）、3β-羟基-5α,8α-桥二氧麦角甾-6,9,22E-三烯（5α,8α-epidioxy-ergosta-6,9,22E-trien-3β-ol，18）、3β-羟基-5α,8α-桥二氧麦角甾- 6,22E-二烯（5α,8α-epidioxy-ergosta-6,22E-dien-3β- ol，19）、D-2-O-甲基肌醇（D-2-O-methylinositol，20）、二十八醇（octacosanol，21）、硬脂酸甲酯（methyl stearate，22）、二十烷酸（eicosanoic acid，23）、二十一烷酸（heneicosanoic acid，24）、油酸（oleic acid，25）、亚油酸（linoleic acid，26）、α-亚麻酸（α-linolenic acid，27）、十六烷酸甘油三酯（tripalmitin，28）、亚油酸甘油三酯（trilinolein，29）。其中化合物2、3、6、10、11、14～22以及28为首次从黄芪属植物中分离得到，所有化合物均为首次从该植物中分离得到。DPPH法测得长果颈黄芪根甲醇提取物及其所有萃取部位均有一定抗氧化活性，从其根中分离得到的10个受试化合物中有7个化合物对DPPH也具有不同程度的清除作用，其中化合物1和3的活性较好。 1 仪器和材料
Jasco P-1020型数字式旋光仪（日本分光公司）；Waters AutoSpec Premier P776双聚焦三扇型磁质谱仪，电离条件为70 eV；Bruker HCT Esquire 3000液相色谱/离子阱质谱联用仪；Bruker Avance III-400核磁共振仪；BioTek Synergy HT酶标仪（BioTek Instruments Inc.，Winooski，VT）；Sephadex LH-20（Amersham Biosciences,Sweden）；RP18（40～75 μm，日本Fuji公司）；柱色谱硅胶和薄层色谱硅胶板GF254（青岛海洋化工厂）；DPPH（1,1-二苯基- 2-苦基苯肼；Aldrich Chem. Co.，美国）。
本实验所用药材于2011年11月采自云南大理苍山，由中国科学院昆明植物研究所向春雷博士鉴定为长果颈黄芪Astragalus englerianus Ulbr. 的根，植物标本（20100928-1b）存放于大理学院药学与化学学院姜北教授研究组。 2 提取分离
长果颈黄芪干燥根6.1 kg，粉碎后甲醇冷浸提取6次，减压浓缩得总浸膏后用适量水混悬，再依次用醋酸乙酯和正丁醇分配数次；得相应部位萃取物。醋酸乙酯萃取物（100 g）经200～300目硅胶柱色谱，氯仿-丙酮混合溶剂（1∶0→0∶1）梯度洗脱，得10个组分（A～J）。
A组分经硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯10∶1→1∶1）、反相RP18柱色谱（甲醇-水）和凝胶（Sephadex LH-20氯仿-甲醇1∶1）柱色谱，得化合物11（87.6 mg）、12（600.0 mg）、13（600.0 mg）、16（874.6 mg）、17（101.2 mg）、21（43.8 mg）、22（39.8 mg）、28（867.0 mg）。B组分经反复硅胶柱色谱（石油醚-丙酮30∶1→0∶1、石油醚-醋酸乙酯10∶1）和凝胶柱色谱（Sephadex LH-20，氯仿-甲醇1∶1），得化合物2（115.6 mg）、6（65.0 mg）、15（121.8 mg）、18（19.4 mg）、19（39.3 mg）、23（168.8 mg）、24（34.7 mg）、25（496.2 mg）、26（600.0 mg）、27（500.0 mg）、29（103.0 mg）。C组分室温下静置后有沉淀析出，经有机溶剂反复洗涤得化合物4（349.3 mg）；母液部分经反复硅胶柱色谱（石油醚-丙酮10∶1→0∶1、石油醚-醋酸乙酯5∶1、氯仿-甲醇120∶1）和凝胶柱色谱（纯甲醇），得化合物1（115.5 mg）、3（20.2 mg）、7（88.2 mg）、8（35.8 mg）、10（114.2 mg）、14（111.5 mg）。D组分经硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯3∶1），得到6个组分D1～D6。D5放置后有橙黄色沉淀析出，以有机溶剂反复洗涤得化合物5（63.7 mg）。G组分室温下静置后即有沉淀析出，经有机溶剂反复洗涤得化合物9（106.9 mg）。I组分室温下静置后即有沉淀析出，经有机溶剂反复洗涤得化合物20（200.0 mg）。 3 结构鉴定
化合物1：橙黄色粉末。1H-NMR (400 MHz,CD3COCD3) δ: 13.68 (1H,s,2′-OH),9.73,9.22 (各1H,s,2×-OH),8.11 (1H,d,J = 8.9 Hz,H-6′),7.85 (1H,d,J = 15.3 Hz,H-β),7.74 (1H,d,J = 15.3 Hz,H-α),7.72 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2,6),6.94 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3,5),6.48 (1H,dd,J = 8.9,2.2 Hz,H-5′),6.40 (1H,d,J = 2.2 Hz,H-3′)；13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3) δ: 192.9 (-C=O),118.3 (C-α),145.2 (C-β),127.5 (C-1),131.8 (C-2,6),116.4 (C-3,5),161.1 (C-4),114.5 (C-1′),165.7 (C-2′),103.8 (C-3′),167.6 (C-4′),108.8 (C-5′),133.3 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致[3]，故鉴定化合物1为异甘草素。
化合物2：橙黄色片晶（氯仿-甲醇）。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 8.85 (1H,s,4′-OH),8.07 (1H,d,J = 15.5 Hz,H-β),7.96 (2H,d,J = 8.1 Hz,H-2′,6′),7.56 (1H,d,J = 15.5 Hz,H-α),7.51 (1H,d,J = 8.1 Hz,H-6),6.97 (2H,d,J = 8.1 Hz,H-3′,5′),6.49 (1H,brd,J = 8.1 Hz,H-5),6.42 (1H,brs,H-3),3.81,3.80 (各3H,s,2×-OCH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 190.9 (-C=O),119.9 (C-α),140.7 (C-β),117.0 (C-1),160.5 (C-2),98.4 (C-3),163.2 (C-4),105.6 (C-5),131.0 (C-6),130.5 (C-1′),131.2 (C-2′,6′),115.7 (C-3′,5′),161.5 (C-4′),55.6,55.5 (2×-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[4]，并经HSQC、HMBC、COSY二维谱图中的相关耦合信息确证，故鉴定化合物2为4′-羟基-2,4-二甲氧基査耳酮。
化合物3：淡棕色油状物。1H-NMR (400 MHz,CD3COCD3) δ: 8.37 (1H,brs,-OH),7.23 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2,6),6.97 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-6′),6.78 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3,5),6.48 (1H,d,J = 1.8 Hz,H-3′),6.39 (1H,dd,J = 8.0,1.8 Hz,H-5′),6.34 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-7),6.18 (1H,dd,J = 16.0,6.8 Hz,H-8),3.80 (3H,s,-OCH3),3.38 (2H,d,J = 6.8 Hz,H-9)；13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3) δ: 130.5 (C-1),128.0 (C-2,6),116.2 (C-3,5),157.5 (C-4),130.7 (C-7),127.2 (C-8),33.3 (C-9),120.4 (C-1′),159.1 (C-2′),99.8 (C-3′),158.0 (C-4′),107.6 (C-5′),130.9 (C-6′),55.6 (-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[5]，故鉴定化合物3为xenognosin。
化合物4：无色簇晶（吡啶）。1H-NMR (400 MHz,C5D5N) δ: 8.43 (1H,d,J = 8.6 Hz,H-5),8.14 (1H,s,H-2),7.77 (2H,brd,J = 8.8 Hz,H-2′,6′),7.21 (1H,brd,J = 8.6 Hz,H-6),7.11 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),7.06 (2H,brd,J = 8.8 Hz,H-3′,5′),3.79 (3H,s,-OCH3)；13C-NMR (100 MHz,C5D5N) δ: 153.3 (C-2),124.3 (C-3),176.1 (C-4),128.7 (C-5),116.4 (C-6),164.7 (C-7),103.6 (C-8),159.0 (C-9),118.4 (C-10),125.1 (C-1′),131.3 (C-2′,6′),114.7 (C-3′,5′),160.4 (C-4′),55.7 (-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[6]，并经HSQC、HMBC、COSY二维谱图中的相关耦合信息确证，故鉴定化合物4为芒柄花素。
化合物5：浅黄色针晶（吡啶）。1H-NMR (400 MHz,C5D5N) δ: 8.43 (1H,brd,J = 7.7 Hz,H-5),8.18 (1H,s,H-2),7.81 (1H,brs,H-2′),7.32 (1H,brd,J = 7.3 Hz,H-6′),7.19 (1H,brd,J = 7.7 Hz,H-6),7.09 (1H,brs,H-8),7.03 (1H,brd,J = 7.3 Hz,H-5′),3.75 (3H,s,-OCH3)；13C-NMR (100 MHz,C5D5N) δ: 153.3 (C-2),125.4 (C-3),176.2 (C-4),128.7 (C-5),116.4 (C-6),164.7 (C-7),103.6 (C-8),159.0 (C-9),118.4 (C-10),126.8 (C-1′),118.3 (C-2′),148.5 (C-3′),149.2 (C-4′),112.7 (C-5′),120.9 (C-6′),56.4 (-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[7]，并经HSQC、HMBC、COSY二维谱图中的相关耦合信息确证，故鉴定化合物5为毛蕊异黄酮。
化合物6：无色针晶（石油醚-醋酸乙酯）。1H-NMR (400 MHz,CD3COCD3) δ: 13.02 (1H,brs,5-OH),8.58 (1H,brs,4′-OH),8.24 (1H,s,H-2),7.48 (2H,brd,J = 8.8 Hz,H-2′,6′),6.93 (2H,brd,J = 8.8 Hz,H-3′,5′),6.57 (1H,d,J = 1.9 Hz,H-8),6.37 (1H,d,J = 1.9 Hz,H-6),3.79 (3H,s,-OCH3)；13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3) δ: 154.6 (C-2),124.2 (C-3),181.8 (C-4),163.6 (C-5),98.9 (C-6),166.7 (C-7),92.9 (C-8),158.5 (C-9),106.8 (C-10),122.8 (C-1′),131.2 (C-2′,6′),116.0 (C-3′,5′),158.9 (C-4′),56.5 (-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[8]，并经HSQC、HMBC、COSY二维谱图中的相关耦合信息确证，故鉴定化合物6为樱黄素。
化合物7：棕黄色针晶（丙酮）。[α]16.4D -4.84° (c 10.00,MeOH)。1H-NMR (400 MHz,CD3COCD3) δ: 8.56 (1H,brs,2′-OH),8.13 (1H,brs,7-OH),7.06 (1H,d,J = 8.4 Hz,H-6′),6.91 (1H,d,J = 8.2 Hz,H-5),6.52 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-3′),6.43 (1H,dd,J = 8.2,2.5 Hz,H-5′),6.39 (1H,dd,J = 8.2,2.4 Hz,H-6),6.31 (1H,d,J = 2.4 Hz,H-8),4.24 (1H,ddd,J = 10.4,3.2,1.9 Hz,H-2a),3.97 (1H,d,J = 10.4 Hz,H-2b),3.73 (3H,s,-OCH3),3.50 (1H,m,H-3),2.97 (1H,dd,J = 15.5,10.8 Hz,H-4a),2.83 (1H,ddd,J = 15.5,5.1,1.9 Hz,H-4b)；13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3) δ: 70.8 (C-2),32.7 (C-3),31.1 (C-4),131.1 (C-5),108.8 (C-6),157.4 (C-7),103.7 (C-8),156.2 (C-9),114.4 (C-10),120.9 (C-1′),156.7 (C-2′),102.5 (C-3′),160.4 (C-4′),105.7 (C-5′),128.8 (C-6′),55.2 (-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[3,9,10]，并经HSQC、HMBC、COSY二维谱图中的相关耦合信息确证，故鉴定化合物7为 (3R)-vestitol。
化合物8：黄色粉末。[α]16.4D -38.73 (c 0.79,MeOH)。1H-NMR (400 MHz,CD3COCD3) δ: 7.75 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5),7.41 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.91 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),6.59 (1H,dd,J = 8.7,2.3 Hz,H-6),6.44 (1H,d,J = 2.3 Hz,H-8),5.45 (1H,dd,J = 13.0,2.9 Hz,H-2),3.06 (1H,dd,J = 16.6,13.0 Hz,H-3a),2.70 (1H,dd,J = 16.6,2.9 Hz,H-3b)；13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3) δ: 80.5 (C-2),44.6 (C-3),190.9 (C-4),129.6 (C-5),111.3 (C-6),165.4 (C-7),103.7 (C-8),164.6 (C-9),115.2 (C-10),131.2 (C-1′),129.0 (C-2′,6′),116.2 (C-3′,5′),158.6 (C-4′)。以上数据与文献报道基本一致[11,12]，故鉴定化合物8为甘草素。
化合物9：无色针晶（吡啶）。[α]13.5D-110.51 (c 0.13,C5H5N)；ESI-MS m/z: 455 [M＋Na]+，C22H24O9。1H-NMR (400 MHz,C5D5N) δ: 7.52 (1H,d,J = 8.3 Hz,H-1),7.18 (1H,d,J = 8.3 Hz,H-7),7.08 (1H,dd,J = 8.3,2.4 Hz,H-2),7.05 (1H,d,J = 2.4 Hz,H-4),6.67 (1H,d,J = 2.4 Hz,H-10),6.55 (1H,dd,J = 8.3,2.4 Hz,H-8),5.63 (1H,d,J = 7.3 Hz,H-1′α),5.55 (1H,d,J = 7.3 Hz,H-11a),5.18 (4H,brs,4×-OH),4.49 (1H,dd,J = 11.8,1.8 Hz,H-6′a),4.35 (1H,overlapped,H-6′b),4.34 (1H,overlapped,H-4′β),4.32 (1H,overlapped,H-5′α),4.29 (1H,overlapped,H-2′β),4.25 (1H,overlapped,H-6a),4.09 (1H,overlapped,H-3′α),3.67 (1H,t,J = 9.8 Hz,H-6b),3.64 (3H,brs,-OCH3),3.54 (1H,m,H-6a)；13C-NMR (100 MHz,C5D5N) δ: 133.0 (C-1),111.6 (C-2),160.3 (C-3),105.7 (C-4),157.7 (C-4a),67.3 (C-6),40.5 (C-6a),120.3 (C-6b),125.9 (C-7),107.2 (C-8),162.1 (C-9),97.7 (C-10),161.8 (C-10a),79.4 (C-11a),115.2 (C-11b),102.5 (C-1′),75.3 (C-2′),79.3 (C-3′),71.6 (C-4′),78.9 (C-5′),62.7 (C-6′),55.9 (-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[13,14]，并经HSQC、HMBC、COSY二维谱图中的相关耦合信息确证，故鉴定化合物9为 (6aR,11aR)-美迪紫檀素-3-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物10：白色针晶（氯仿）。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 5.25 (1H,brs,H-12),4.21 (1H,brd,J = 10.7 Hz,H-22α),3.45 (1H,overlapped,H-3α),3.44 (1H,overlapped,H-24a),3.35 (1H,brt,J = 9.5 Hz,H-24b),2.76 (1H,brd,J = 7.4 Hz,H-18β),1.25,1.11,1.04,0.95,0.91,0.90,0.87 (各3H,s,7×-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 38.4 (C-1),27.7 (C-2),80.9 (C-3),42.8 (C-4),55.6 (C-5),18.4 (C-6),33.1 (C-7),39.7 (C-8),47.0 (C-9),36.7 (C-10),23.7 (C-11),122.3 (C-12),143.9 (C-13),42.1 (C-14),25.9 (C-15),28.2 (C-16),37.4 (C-17),44.7 (C-18),46.2 (C-19),30.5 (C-20),41.5 (C-21),77.2 (C-22),22.4 (C-23),64.5 (C-24),16.2 (C-25),16.9 (C-26),25.4 (C-27),28.2 (C-28),32.8 (C-29),20.0 (C-30)。以上数据与文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物10为齐墩果-12-烯-3β,22β,24-三醇。
化合物18：无色针晶（石油醚-醋酸乙酯）。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 6.60 (1H,d,J = 8.6 Hz,H-7),6.29 (1H,d,J = 8.6 Hz,H-6),5.43 (1H,brd,J = 5.0 Hz,H-11),5.24 (1H,dd,J = 15.2,7.4 Hz,H-23),5.16 (1H,dd,J = 15.2,7.4 Hz,H-22),4.00 (1H,m,H-3α),1.09 (3H,s,19-CH3),1.00 (3H,d,J = 6.7 Hz,21-CH3),0.91 (3H,d,J = 6.7 Hz,28-CH3),0.84 (3H,d,J = 6.7 Hz,26-CH3),0.82 (3H,d,J = 5.8 Hz,27-CH3),0.74 (3H,s,18-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 32.6 (C-1),29.7 (C-2),66.3 (C-3),36.0 (C-4),82.7 (C-5),135.5 (C-6),130.7 (C-7),78.4 (C-8),142.5 (C-9),38.0 (C-10),119.7 (C-11),41.2 (C-12),43.6 (C-13),48.2 (C-14),20.8 (C-15),28.6 (C-16),55.9 (C-17),12.9 (C-18),25.6 (C-19),39.3 (C-20),20.7 (C-21),135.2 (C-22),132.4 (C-23),42.8 (C-24),33.1 (C-25),19.7 (C-26),19.9 (C-27),17.6 (C-28)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物18为3β-羟基-5α,8α-桥二氧麦角甾-6,9,22E-三烯。
通过NMR、MS谱图数据和理化性质与相关文献数据进行对比，9个化合物被分别鉴定为7-氧谷甾醇（15）[17]、(9′Z)-9′-十七烯酸-3β-谷甾醇酯（16）[18,19]、豆甾-4-烯-3-酮（17）[20]、3β-羟基-5α,8α-桥二氧麦角甾-6,22E-二烯（19）[16]、D-2-O-甲基肌醇（20）[21]、二十八醇（21）[22]、硬脂酸甲酯（22）[23,24]、二十烷酸（23）[25]、二十一烷酸（24）[26]。
此外，通过在TLC上多种溶剂系统展开对比，化合物11～14、25～29与各自相应的对照品Rf值及斑点颜色均一致，分别鉴定为无羁萜（11）、β-谷甾醇（12）、豆甾醇（13）、7β-羟基谷甾醇（14）、油酸（25）、亚油酸（26）、α-亚麻酸（27）、十六烷酸甘油三酯（28）、亚油酸甘油三酯（29）。 4 抗氧化活性测试
由于黄芪具有抗氧化作用[1]，同时本研究分离得到的化合物以黄酮类酚性化合物为主；因此本研究选取所有分得的酚性化合物以及环多醇类化合物（D-2-O-甲基肌醇，20），参照文献中DPPH法[27]对长果颈黄芪进行抗氧化活性测试。结果表明（表 1），长果颈黄芪根甲醇提取物及其所有萃取部位均有一定抗氧化活性，其中醋酸乙酯部位较为显著，活性大小：醋酸乙酯部位＞甲醇总提物＞正丁醇部位＞水部位。10个受试化合物中有7个化合物对DPPH具有不同程度的清除作用，其中化合物1和3抗氧化活性较好。
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表 1 长果颈黄芪抗氧化活性结果(x±s,n = 4) Table 1 Anti-oxidative activity of A.englerianus (x±s,n = 4) |
从长果颈黄芪根甲醇提取物醋酸乙酯部位中分离鉴定了29个化合物，涉及黄酮、甾体、三萜、长链脂肪酸及其酯等类型成分，其中黄酮类化合物为其主要成分。黄酮类化合物多具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化、解痉、改善心脑血管系统、提高免疫力、雌性激素样作用以及抗寄生虫等诸多生物活性[28,29]，如本研究分离得到的毛蕊异黄酮、异甘草素、甘草素和 (3R)-vestitol等，因此从一个侧面证实了该植物的药用功效具有相应的物质基础。另外，从长果颈黄芪根中还分到一具有胰岛素样作用和抗炎、抗水肿等作用的环多醇化合物——D-2-O-甲基肌醇（俗名右旋肌醇甲醚）[30]，是否与该植物药用功效相关有待进一步研究。
研究结果显示，查耳酮类化合物1～3的抗氧化活性大于异黄酮、异黄烷、紫檀烷类化合物，化合物1、3（B环上有羟基取代）的活性大于化合物2（B环上无羟基取代），而D-2-O-甲基肌醇（20，无共轭体系）无活性，表明能生成稳定的半醌式自由基的活泼酚羟基为抗氧化活性必需基团，该结构越稳定其活性越强；供氢体具有较大的共轭体系，有助于在供氢后形成相对稳定的自由基中间体，提高抗氧化能力[31]。实验中还发现长果颈黄芪醋酸乙酯部位质量浓度为2.5 mg/mL时对DPPH的清除率低于质量浓度为0.5和0.1 mg/mL时的清除率。初步推断可能为高质量浓度时，分子间氢键作用较强，从而抑制活泼氢的解离，导致其抗氧化活性降低。
长果颈黄芪根成分复杂多样，从中分离得到的化合物具有多种生物活性。因此，本研究为长果颈黄芪的开发利用奠定了一定的基础。
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