路路通中1个新的三萜类化合物

引用本文	doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.09.002

商洪杰, 王文静, 李丹毅, 华会明, 李占林. 路路通中1个新的三萜类化合物[J]. 中草药, 2014, 45(9): 1207-1210. 复制到剪切板

SHANG Hong-jie, WANG Wen-jing, LI Dan-yi, HUA Hui-ming, LI Zhan-lin. A new triterpenoid isolated from fruits of Liquidambaris Fructus[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2014, 45(9): 1207-1210. 复制到剪切板

路路通中1个新的三萜类化合物

商洪杰^1,2, 王文静^1,2, 李丹毅², 华会明^1,2, 李占林^1,2

1. 沈阳药科大学基于靶点的药物设计与研究教育部重点实验室, 辽宁沈阳 110016;
2. 沈阳药科大学中药学院, 辽宁沈阳 110016

收稿日期: 2014-2-21;

基金项目：教育部创新团队发展计划；辽宁省高校创新团队支持计划

作者简介：商洪杰（1987-），女，硕士研究生。Tel：（024）23986488

通讯作者：李占林 Tel: (024)23986488 E-mail: lzl1030@hotmail.com

摘要：目的研究路路通Liquidambaris Fructus（枫香树Liquidambar formosana果实）的化学成分。方法采用制备薄层色谱、反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS柱色谱等方法进行分离纯化，根据理化性质及波谱数据确定化合物的结构。结果从路路通70%乙醇提取物中共分离得到7个化合物，分别鉴定为11α-methoxyl-28-nor-β-amyrenone（1）、28-nor-β-amyrenone（2）、3-oxo-12α-hydroxy-oleanan-28，13β-olide（3）、3α-acetoxyl-25-hydroxy-olean-12-en-28-oic acid（4）、古柯二醇（5）、路路通酸（6）和苏合香素（7）。结论化合物1为未见文献报道的新化合物，命名为路路通酮A；化合物5、7为首次从枫香树属植物中分离得到。

关键词：路路通枫香树三萜路路通酮A 古柯二醇路路通酸苏合香素

A new triterpenoid isolated from fruits of Liquidambaris Fructus

SHANG Hong-jie^1,2, WANG Wen-jing^1,2, LI Dan-yi², HUA Hui-ming^1,2, LI Zhan-lin^1,2

1. Key Laboratory of Structure-Based Drug Design and Discovery (Shenyang Pharmaceutical University), Ministry of Education, Shenyang 110016, China;
2. School of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang110016, China

Abstract: Objective To study the chemical constituents from Liquidambaris Fructus (fruits of Liquidambar formosana). Methods The constituents were isolated and purified by preparative TLC and silica gel, Sephadex LH-20, and ODS column chromatography, and their structures were elucidated on the basis of their physicochemical properties and spectral data. Results Seven compounds were obtained from 70% ethanol extract of the fruits of Liquidambaris Fructus and identified as 11α-methoxyl-28-nor-β-amyrenone (1), 28-nor-β-amyrenone (2), 3-oxo-12α-hydroxy-oleanan-28, 13β-olide (3), 3α-acetoxyl-25-hydroxy-olean-12-en-28-oic acid (4), erythodiol (5), betulonic acid (6), and styracin (7), respectively. Conclusion Compound 1 is a new triterpenoid named liquidaformone A, and compounds 5 and 7 are isolated from the plants of Liquidambar Linn. for the first time.

Key words: Liquidambaris Fructus Liquidambar formosana Hance triterpenoid liquidaformone A erythodiol betulonic acid styracin

中药材路路通Liquidambaris Fructus为金缕梅科（Hamamelidaceae）植物枫香树Liquidambar formosana Hance的干燥成熟果实。其味苦、性平，归肝、肾经，具有祛风除湿、通经、利尿等功效，用于治疗风湿、腰腿痛、月经不调、少乳、水肿、小便不利、荨麻疹等病症。国内外学者从路路通中分离得到一些三萜^[1-5]及桂皮酸酯^[6]类成分，本实验从路路通70%乙醇提取物中分离得到7个化合物，分别鉴定为11α-methoxyl- 28-nor-β-amyrenone（1）、28-nor-β-amyrenone（2）、3-oxo-12α-hydroxy-oleanan- 28, 13β-olide（3）、3α-acetoxyl-25-hydroxy-olean-12- en-28-oic acid（4）、古柯二醇（erythodiol，5）、路路通酸（betulonic acid，6）和苏合香素（styracin，7）。其中，化合物1为新的三萜类化合物，命名为路路通酮A；化合物5和7为首次从枫香树属植物中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker ARX—300和AV—600核磁共振波谱仪（瑞士Bruker Biospin公司）；Bruker micro TOF—Q型高分辨质谱仪（美国Bruker Daltonics公司）；Bruker IFS—55型红外光谱仪（德国Bruker Optics公司）；Shimadzu UV—2201型紫外光谱仪（日本岛津制作所）；Hitachi L2130型高压输液泵及Hitachi L2400型紫外检测器（日本日立制作所）。柱色谱硅胶（200～300目）和薄层用硅胶（青岛海洋化工有限公司）；ODS柱色谱填料（50 μm，日本YMC公司）；Sephadex LH-20为GE Healthcare产品。

路路通药材于2011年10月购于辽宁省沈阳市中街同仁堂大药房，由沈阳药科大学中药学院路金才教授鉴定为枫香树Liquidambar formosana Hance的果实。

2 提取与分离

路路通粗粉14.0 kg，用3倍量的70%乙醇溶液加热回流提取3次，时间均为2 h，提取液减压回收溶剂后静置过夜，滤过除去水不溶物，滤液依次用等体积的二氯甲烷和正丁醇分别萃取3次，回收溶剂后分别得到二氯甲烷萃取物322.7 g和正丁醇萃取物307.5 g。其中二氯甲烷萃取物经硅胶（200～300目）柱色谱，石油醚-丙酮梯度洗脱（100︰0→0︰100），流分Fr. 36～39（石油醚-丙酮 100︰2）经硅胶柱色谱分离纯化，得到化合物1（10 mg）；流分Fr. 40～49（石油醚-丙酮 100∶3）经硅胶柱色谱、制备薄层色谱分离纯化，得到化合物2（25 mg）和7（19 mg）；流分Fr. 50～54（石油醚-丙酮 100∶3）经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及半制备型高效液相色谱分离纯化，得到化合物6（15 mg）；流分Fr. 99～101（石油醚-丙酮100︰7）经Sephadex LH-20柱色谱及硅胶柱色谱分离纯化，得到化合物5（13 mg）；流分Fr. 120～121（石油醚-丙酮 100∶7→100∶10）经重结晶得到化合物3（35 mg）；流分Fr. 150～152（石油醚-丙酮 100∶20）经重结晶得到化合物4（23 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：无色针状结晶（甲醇），10%硫酸乙醇溶液显粉色。UVλMeOH max(nm): 213 (3.65), 276 (2.68)。IR光谱给出羟基（3 451 cm^-1）和酮羰基（1 705 cm^-1）特征吸收峰。HR-ESI-MS: m/z: 463.353 3 [M＋Na]⁺（C₃₀H₄₈NaO₂，计算值463.355 2），从而确定分子式为C₃₀H₄₈O₂。¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) 谱低场区给出1个烯氢质子信号δ 5.37 (1H,d,J = 3.3 Hz)，1个连氧次甲基质子信号δ 3.88 (1H,dd,J = 8.9,3.3 Hz) 和1个甲氧基信号δ 3.24 (3H,s)；高场区给出7个甲基单峰信号δ: 1.20 (3H,s),1.14 (3H,s),1.10 (3H,s),1.06 (3H,s),0.95 (3H,s),0.92 (3H,s) 和0.88 (3H,s)。¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃) 谱中给出30个碳信号，低场区给出1组烯碳信号δ 150.6和120.9，其中120.9处的碳信号在HSQC谱中与烯氢质子信号δ 5.37相关。同时碳谱中还给出1个饱和环酮羰基信号δ 218.1，而在化学位移δ 180左右未见羧基碳信号。结合氢谱中的7个甲基单峰质子信号，推测化合物1与化合物2具有类似结构，为1个具有齐墩果-12-烯基本骨架且C-3位为酮羰基，C-28位脱羧的三萜类化合物。将1和2的NMR数据比较发现，化合物1除了比2多1个甲氧基外，在碳谱中，C-7～C-13、C-25及C-26数据相差较大；而在氢谱中，C-12位的烯氢质子由2中的δ 5.22 (1H,t,J = 3.5 Hz) 变为1中的δ 5.37 (1H,d,J = 3.3 Hz)，化学位移和偶合常数的变化均提示化合物1结构中C-11位存在取代。进一步在HMBC谱（图 1）中，甲氧基质子信号δ 3.24和C-12位烯氢质子δ 5.37均与一个连氧碳信号δ 76.2存在远程相关，而该连氧碳上质子信号δ3.88存在和C-10、C-13和甲氧基碳信号的远程相关，从而确证了化合物1中的甲氧基连在C-11位上。在NOESY图谱中，可以观察到甲氧基质子信号δ 3.24与C-27位甲基质子信号δ 1.20 (3H, s) 存在NOE效应，提示C-11位的甲氧基为α构型；C-18位质子信号δ 2.40与C-30位甲基质子信号δ 0.92 (3H, s) 存在NOE效应，提示H-18为β构型。结合HSQC、HMBC、NOESY谱图，并参考文献报道^{[7, 8]}确定化合物1为11α- methoxyl-28-nor-β-amyrenone，为新化合物，命名为路路通酮A，其NMR信号归属见表 1。

图 1 化合物1的结构及主要HMBC相关 Fig. 1 Structure and key HMBC correlations of compound 1

表 1 化合物1的¹H-NMR、¹³C-NMR数据和HMBC相关 Table 1 ¹H-NMR and ¹³C-NMR data and HMBC correlations of compound 1

碳位	δ_H	δ_C	HMBC (H→C)
1	β-2.22 (1H,ddd,J = 14.0,7.3,3.8 Hz) α-1.68 (1H,m)	40.1	C-2,3,10,25
2	β-2.54 (1H,ddd,J = 16.0,10.7,7.3 Hz) α-2.38 (1H,m)	34.6	C-1,3,10
3		218.1
4		47.8
5	1.38 (1H,m)	55.6	C-3,4,6,7,10,23,24,25
6	1.49 (2H,m)	20.0	C-4,5,7,10
7	β-1.49 (1H,m) α-1.36 (1H,m)	33.4	C-5,6,8,9,26
8		42.5
9	1.80 (1H,d,J = 8.9 Hz)	51.2	C-1,5,7,8,10,11,25,26
10		38.0
11	3.88 (1H,dd,J = 8.9,3.3 Hz)	76.2	C-9,10,12,13,-OCH₃
12	5.37 (1H,d,J = 3.3 Hz)	120.9	C-9,11,13,14,18
13		150.6
14		42.9
15	β-1.54 (1H,m) α-1.24 (1H,m)	31.2	C-14,16,17,27
16	β-1.84 (1H,m) α-1.59 (1H,m)	22.2	C-15,17,18
17	1.59 (1H,m)	35.4
18	2.40 (1H,m)	40.8	C-12,13,14,16,17,19
19	β-1.08 (1H,m) α-1.63 (1H,t,J = 13.5 Hz)	44.7	C-13,17,18,20,21,29,30
20		31.4
21	β-1.10 (1H,m) α-1.26 (1H,m)	33.7	C-17,18,20,22,29
22	β-1.72 (1H,m) α-1.38 (1H,m)	27.9	C-16,17,20,21
23	1.10 (3H,s)	26.8	C-3,4,5,24
24	1.06 (3H,s)	21.6	C-3,4,5,23
25	1.14 (3H,s)	16.4	C-1,5,9,10
26	0.95 (3H,s)	19.3	C-6,9,14
27	1.20 (3H,s)	24.4	C-14,15
29	0.88 (3H,s)	33.7	C-19,20,21,30
30	0.92 (3H,s)	24.0	C-19,20,21,29
11-OCH₃	3.24 (3H,s)	54.0	C-11

表 1 化合物1的¹H-NMR、¹³C-NMR数据和HMBC相关 Table 1 ¹H-NMR and ¹³C-NMR data and HMBC correlations of compound 1

化合物2：无色针状结晶（二氯甲烷）。¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) δ: 5.22 (1H,t,J = 3.5 Hz,H-12),2.54 (1H,ddd,J = 16.0,11.0,7.4 Hz,H-2β),2.37 (1H,ddd,J = 16.0,7.1,3.7 Hz,H-2α),2.37 (1H,m,H-18),1.12 (3H,s,H-27),1.09 (3H,s,H-23),1.06 (3H,s,H-25),1.05 (3H,s,H-24),0.92 (3H,s,H-26),0.89 (3H,s,H-30),0.87 (3H,s,H-29)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) 数据见表 2。以上数据与文献报道基本一致^[9]，故化合物2鉴定为28-nor-β-amyrenone。

化合物3：白色粉末（丙酮）。¹H-NMR (300 MHz,CDCl₃) δ: 3.91 (1H,brs,H-12),2.49 (2H,m,H-2β,21β),2.09 (1H,m,H-18),1.92 (1H,m,H-1β,11β),1.65 (1H,m,H-22),1.64 (1H,dd,J = 8.8,3.5 Hz,H-9),1.45 (1H,m,H-1α,11α),1.32 (3H,s,27-CH₃),1.20 (3H,s,26-CH₃),1.10 (3H,s,24-CH₃),1.05 (3H,s,23-CH₃),0.99 (6H,s,25,29-CH₃),0.91 (3H,s,30-CH₃)；¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃) 数据见表 2。以上数据与文献报道基本一致^[5]，故鉴定该化合物3为3-oxo-12α-hydroxy-oleanan-28,13β-olide。

表 2 化合物2、3、5的¹³C-NMR数据 (150 MHz,CDCl₃) Table 2 ¹³C-NMR data of compounds 2, 3, and 5 (150 MHz, CDCl₃)

碳位	2	3	5	碳位	2	3	5
1	39.3	39.7	38.8	16	22.4	21.3	22.2
2	34.3	34.2	27.4	17	35.9	44.8	47.7
3	218.0	217.9	79.2	18	41.2	51.3	42.5
4	47.6	47.5	38.9	19	45.1	39.6	46.6
5	55.5	55.0	55.3	20	31.3	31.2	31.1
6	19.8	19.7	18.5	21	33.8	34.5	34.2
7	32.7	33.4	32.7	22	28.1	27.6	31.2
8	39.3	42.3	39.9	23	26.7	26.8	28.2
9	47.1	43.9	47.9	24	21.6	21.2	15.7
10	37.0	36.8	37.1	25	15.3	16.4	15.7
11	23.6	29.3	23.7	26	17.6	18.3	16.9
12	121.0	76.3	122.5	27	25.1	18.5	26.1
13	146.2	90.7	144.4	28	—	180.0	69.8
14	42.7	42.3	41.9	29	33.8	33.5	33.3
15	31.2	28.1	25.7	30	24.0	24.0	23.7

表 2 化合物2、3、5的¹³C-NMR数据 (150 MHz,CDCl₃) Table 2 ¹³C-NMR data of compounds 2, 3, and 5 (150 MHz, CDCl₃)

化合物4：白色粉末（丙酮）。¹H-NMR (600 MHz,C₅D₅N) δ: 5.53 (1H,t,J = 3.1 Hz,H-12),4.98 (1H,t,J = 2.3 Hz,H-3β),4.28 (1H,d,J = 11.9 Hz,H-25a),4.16 (1H,d,J = 11.9 Hz,H-25b),3.31 (1H,dd,J = 13.8,3.8 Hz,H-1β),2.89 (1H,m,H-11β),2.06 (3H,s,CH₃COO-),1.25 (3H,s,27-CH₃),1.22 (3H,s,26-CH₃),1.04 (3H,s,24-CH₃),1.00 (3H,s,23-CH₃),0.99 (3H,s,30-CH₃),0.93 (3H,s,29-CH₃)。以上波谱数据与文献报道基本一致^[5]，故鉴定该化合物4为3α-acetoxyl-25-hydroxy-olean-12-en-28-oic acid。

化合物5：白色粉末（二氯甲烷）。¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) δ: 5.19 (1H,t,J = 3.5 Hz,H-12),3.55 (1H,d,J = 11.0 Hz,H-28a),3.22 (1H,d,J = 11.0 Hz,H-28b),3.21 (1H,m,H-3),1.16,1.00,0.94,0.93,0.89,0.87,0.79 (各3H,s,7×CH₃)；¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃) 数据见表 2。以上数据与文献报道基本一致^[10]，故鉴定化合物5为古柯二醇。

化合物6：白色粉末（二氯甲烷）。¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) δ: 4.73 (1H,s,H-29a),4.60 (1H,s,H-29b),3.00 (1H,brs,H-19),1.68 (3H,s,30-CH₃),1.06 (3H,s),1.00 (3H,s),0.98 (3H,s),0.97 (3H,s),0.91 (3H,s)。以上数据与文献报道基本一致^{[1, 4]}，故鉴定化合物6为路路通酸。

化合物7：黄色油状物（二氯甲烷）。¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) δ: 7.74 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-7),7.24～7.53 (10H,m,Ar-H),6.71 (1H,d,J = 15.8 Hz,H-7′),6.49 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-8),6.36 (1H,dt,J = 15.8,6.4 Hz,H-8′),4.87 (2H,brd,J = 6.4 Hz,H-9′)。以上数据与文献报道基本一致^[11]，故鉴定化合物7为苏合香素。

参考文献

[1]	孙玉茹, 孙友富. 中药路路通化学成分研究[J]. 中草药, 1988, 19(8): 342-343.
[2]	孙玉茹, 孙友富. 路路通内酯的化学结构[J]. 药学学报, 1996, 31(6): 437-440.
[3]	赖作企, 董勇. 中药路路通化学成分的研究 (Ⅰ)—一种新的五环三萜的结构测定[J]. 中山大学学报: 自然科学版, 1996, 35(4): 64-69.
[4]	赖作企, 董勇. 中药路路通化学成分的研究 (Ⅱ)[J]. 中山大学学报: 自然科学版, 1996, 35(Suppl. 2): 40-44.
[5]	李春, 孙玉茹, 孙有富. 中药路路通化学成分的研究[J]. 药学学报, 2002, 37(4): 263-266.
[6]	Konno C, Oshima Y, Hikino H, et al. Antihepatotoxic principles of Liquidambar formosana fruits[J]. Planta Med, 1988, 54(5): 417-419.
[7]	Guo N, Zhao Y, Fang W S. Biotransformation of 3-oxo-oleanolic acid by Absidia glauca[J]. Planta Med, 2010, 76(10): 1904-1907.
[8]	Cheng S Y, Wang C M, Hsu Y M, et al. Oleanane-type triterpenoids from the leaves and twigs of Fatsia polycarpa[J]. J Nat Prod, 2011, 74(8): 1744-1750.
[9]	Yang N Y, Chen J H, Zhou G S, et al. Pentacyclic triterpenes from the resin of Liquidambar formosana[J]. Fitoterapia, 2011, 82(6): 927-931.
[10]	许文清, 龚小见, 周欣, 等. 马兰化学成分研究[J]. 中草药, 2010, 41(7): 1056-1060.
[11]	Mahajan R P, Patil U K, Patil S L. A facile microwave assisted synthesis and antimicrobial activities of naturally occurring (E)-cinnamyl (E)-cinnamates and (E)-aryl cinnamates[J]. Indian J Chem, 2007, 46B: 1459-1465.


中草药 2014, Vol. 45 Issue (9): 1207-1210	0	PDF