八味沉香散收载于《中国药典》2010年版一部，本品系藏族验方，该药由沉香、肉豆蔻、广枣、石灰华、乳香、木香、诃子（煨）、木棉花8味中药组成，具有清心热、养心、安神、开窍之功效，临床用于热病攻心、神昏谵语、冠心病、心绞痛。

八味沉香散《中国药典》2010年版中定量测定采用HPLC法测定木香烃内酯的方法^[1]，文献中也有HPLC法测定没食子酸与原儿茶酸量的报道^{[2, 3]}。

只用1～2种成分来衡量八味沉香散的质量是不足的，多指标成分定量测定方法能更加客观地体现制剂的质量^[4]。乳香的主要活性成分之一为11-羰基-β-乙酰乳香酸^[5]；广枣的主要指标成分为没食子酸和原儿茶酸^[6]；肉豆蔻的主要指标成分为去氢二异丁香酚^[7]；木香的主要活性成分为木香烃内酯和去氢木香内酯^[8]。本实验采用梯度洗脱法与分段变波长检测法，首次建立了没食子酸、原儿茶酸、木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸6种指标成分同时测定的RP-HPLC方法；结果表明，该方法简便、快速、灵敏度高，为该药的质量控制提供了依据。

Agilent 1200高效液相色谱仪，美国安捷伦公司，包括四元泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器；梅特勒托利多XS3DU电子天平，十万分之一；KQ5200型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

没食子酸（批号110831-201304）、原儿茶酸（批号110809-201208）、木香烃内酯（批号111524- 201310）、去氢木香内酯（批号111525-200706）、去氢二异丁香酚（批号18388-201305）、11-羰基-β-乙酰乳香酸（批号111760-201301）购于中国食品药品检定研究院；八味沉香散，规格：2 g，西藏神猴药业有限责任公司，批号20131106、20131107、20131108、20131212、20131213、20131214；乙腈、甲醇、乙醇、乙酸，色谱纯，天津康科德试剂有限公司；水为超纯水。

色谱柱为Waters XBridge-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流动相为甲醇-乙腈（50∶ 50，A）和甲醇-0.1%乙酸水溶液（10∶90，B），梯度洗脱：0～6.0 min，100% B；6.0～9.0 min，100%～80% B；9.0～17.0 min，80%～60% B；17.0～35.0 min，60%～45% B；35.0～40.0 min，100% B；分段变波长测定：0～8.0 min为274 nm（检测没食子酸和去氢二异丁香酚），8.0～17.0 min为254 nm（检测原儿茶酸和11-羰基-β-乙酰乳香酸），17.0～40.0 min为225 nm（检测木香烃内酯和去氢木香内酯）；体积流量0.8 mL/min，柱温35 ℃；进样量10 μL。

取对照品没食子酸、原儿茶酸、木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸适量，精密称定，用50%乙醇配制成含没食子酸75 μg/mL、原儿茶酸50.0 μg/mL、木香烃内酯100 μg/mL、去氢木香内酯100 μg/mL、去氢二异丁香酚10 μg/mL、11-羰基-β-乙酰乳香酸175 μg/mL的混合对照品溶液，即得。

取待测制剂约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中。精密加入50%乙醇水溶液20 mL，摇匀，称定质量，超声（功率250 W，频率45 kHz）处理30 min，放冷，称定质量，用50%乙醇水溶液补足减失的质量，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

根据八味沉香散的生产标准，取沉香、石灰华、诃子（煨）、木棉花药材以及相关辅料制得八味沉香散阴性样品，按照“2.3”项方法制得阴性空白对照溶液。

按照“2.1”～“2.3”项方法进行试验，结果供试品中各待测成分色谱峰的分离度均大于1.5，对照品、样品及阴性空白对照品的色谱图见图 1。

1-没食子酸 2-去氢二异丁香酚 3-原儿茶酸 4-11-羰基-β-乙酰乳香酸 5-木香烃内酯 6-去氢木香内酯 1-gallic acid 2-ehydrodiisoeugenol 3-protocatechuic acid 4-acetyl-11-keto-β-boswellic acid 5-costunolide 6-dehvdrocostuslactone图 1 混合对照品 (A)、供试品(B) 和阴性空白对照品 (C) 的HPLC图谱Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A), sample (B), and negative blank reference substances (C)

精密吸取按“2.2”项下方法制备的混合对照品储备液1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、17.5、20.0 mL，分别置50 mL量瓶中，以50%乙醇定容，摇匀，即得系列质量浓度的混合对照品溶液。分别吸取上述系列混合对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值（Y）对质量浓度（X）进行线性回归，得回归方程：没食子酸Y＝7 823.1 X－459.3，r＝0.999 0，线性范围1.5～30.0 mg/L；原儿茶酸Y＝389 234 X－3 993，r＝0.999 2，线性范围1.0～20.0 mg/L；木香烃内酯Y＝5 234 X－239.1，r＝0.999 1，线性范围2.0～40.0 mg/L；去氢木香内酯Y＝2 738 X－661.2，r＝0.999 3，线性范围2.0～40.0 mg/L；去氢二异丁香酚Y＝45 274 X－3 371，r＝0.999 4，线性范围0.2～4.0 mg/L；11-羰基-β-乙酰乳香酸Y＝3 489 X－336.7，r＝0.999 1，线性范围3.5～70.0 mg/L。

精密吸取“2.5.2”项下中间质量浓度梯度点的混合对照品溶液（没食子酸15.0 mg/L、原儿茶酸10.0 mg/L、木香烃内酯20.0 mg/L、去氢木香内酯20.0 mg/L、去氢二异丁香酚2.0 mg/L、11-羰基-β-乙酰乳香酸35.0 mg/L）10 μL，连续进样6次，按上述色谱条件测定峰面积值。结果表明没食子酸、原儿茶酸、木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸峰面积的RSD分别为0.76%、0.34%、0.96%、0.72%、1.12%、0.95%，表明精密度良好。

取同一份供试品溶液（批号20131106），分别于0、2、4、6、8、12、24 h，按上述色谱条件测定峰面积。结果供试品溶液在24 h内色谱峰面积无明显变化，没食子酸、原儿茶酸、木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸的RSD分别为0.63%、1.33%、1.12%、1.11%、1.49%、1.14%，表明供试品溶液在制备后24 h内保持稳定。

取同一批样品（批号20131106）6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定各物质的量。结果没食子酸、原儿茶酸、木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸的平均质量分数分别为1.545、0.116、1.822、1.767、0.150、3.533 mg/g，RSD分别为0.78%、0.93%、0.98%、0.34%、1.03%、1.05%。

取同一批号已测定的样品6份（批号20131106），每份约2.0 g，精密称定，分别精密加入对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样，记录色谱峰峰面积，计算回收率。结果没食子酸、原儿茶酸、木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸的平均回收率分别为101.19%、100.12%、101.55%、100.31%、99.25%、98.49%，RSD分别为1.56%、1.22%、1.08%、1.73%、1.49%、1.52%。

取6批八味沉香散，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，采用外标法计算，结果见表 1。6批样品中原儿茶酸与去氢二异丁香酚的量较低，11-羰基-β-乙酰乳香酸的量最高，但是批与批之间差异较小，可以有效地控制该药品的质量。

表 1(Table 1)

表 1 八味沉香散中指标性成分的质量分数 (n＝2) Table 1 Contents of target components in BCP (n＝2) 批号 质量分数 / (mg∙g−1) 没食子酸 原儿茶酸 木香烃内酯 去氢木香内酯 去氢二异丁香酚 11-羰基-β-乙酰乳香酸 20131106 1.545 0.116 1.822 1.767 0.150 3.533 20131107 1.489 0.101 1.988 1.897 0.178 3.672 20131108 1.601 0.098 2.009 1.956 0.135 3.712 20131212 1.409 0.089 1.884 1.799 0.149 3.668 20131213 1.563 0.095 1.952 1.953 0.156 3.654 20131214 1.522 0.099 1.942 1.864 0.163 3.511

表 1 八味沉香散中指标性成分的质量分数 (n＝2) Table 1 Contents of target components in BCP (n＝2)

在样品处理过程中，参照了《中国药典》2010年版中定量测定项下的样品处理方法，比较了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、醋酸乙酯5种提取溶媒，结果表明以50%乙醇为最佳提取溶媒；同时比较了冷浸法、回流提取法、超声提取法3种不同的提取方法，超声提取法的提取效率最高；此外，还考察了提取溶剂的体积与提取时间。

分别对没食子酸、原儿茶酸、木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品溶液，进行紫外扫描，根据紫外扫描可知，没食子酸与去氢二异丁香酚在274 nm处有最大吸收，原儿茶酸的最大吸收峰在260 nm处，木香烃内酯与去氢木香内酯在225 nm处有最大吸收，11-羰基-β-乙酰乳香酸的最大吸收峰在250 nm处，同时参考文献报道^{[2, 3, 4, 5, 6, 7]}，确定本实验中没食子酸与去氢二异丁香酚的检测波长为274 nm，木香烃内酯与去氢木香内酯的检测波长为225 nm，其余2个成分的检测波长为254 nm。

色谱分离的关键是流动相的筛选，实验中比较了以甲醇-乙腈-水、甲醇-乙腈-甲酸-水、甲醇-乙腈-乙酸-水、甲醇-乙腈-磷酸-水构成的洗脱系统，分别进行等度与梯度的洗脱方式。最后确定了甲醇-乙腈和甲醇-乙酸-水系统。

经方法学研究结果表明，本方法具有良好的精密度、准确度和重复性，能够同时测定没食子酸、原儿茶酸、木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸的量，有效地控制八味沉香散质量。