绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino 的全草，主要分布在陕西、福建、江西、湖南、广西、广东、云南等省，具有清热解毒、止咳化痰、补气生津、健脾安神之功效；用于治疗咳嗽、痰喘、老年慢性气管炎、传染性肝炎及劳伤虚损等^{[1, 2]}。其主要含皂苷类、黄酮类、多糖类、甾醇类、氨基酸及微量元素等类成分^{[1, 2, 3, 4]}。现代医学研究表明绞股蓝的抗氧化、抗衰老、促进学习记忆能力等作用与阿尔茨海默病（AD）的治疗息息相关^{[5, 6, 7, 8]}。本课题组对绞股蓝提取物不同极性部位进行抗老年性痴呆活性筛选，结果表明其石油醚部位、醋酸乙酯部位和正丁醇部位均有一定的抗老年性痴呆活性。在此基础上对其化学成分进行研究，从中分离得到17个化合物，分别鉴定为月桂酸（dodecanoic acid，1）、β-谷甾醇（β-sitosterol，2）、3,5,3′-三羟基-4′，7-二甲氧基二氢黄酮（3,5,3′-trihydroxy-4′,7-dimethoxy- flavanone，3）、邻二苯酚（1,2-benzenediol，4）、3′-O-甲基花旗松素（3′-O-methyltaxifolin，5）、槲皮素（quercetin，6）、鼠李素（rhamnetin，7）、α-菠菜甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（α-spinasterol-3-O-β-D- glucopyranoside，8）、3,4-二羟基苯甲酸（3,4-dihydroxy benzoic acid，9）、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷（narcissoside，10）、鼠李糖（L-rhamno- semonohydrate，11）、丙二酸（malonic acid，12）、β-乙氧基芸香糖苷（β-ethoxy-rutinoside，13）、芦丁（rutin，14）、商陆苷（ombuoside，15）、人参皂苷Rb₁（ginsenoside Rb₁，16）、β-胡萝卜苷（β- daucosterol，17）。其中化合物1、3～5、7、9、10、12为首次从该植物中分离得到。

METTLER—AE100电子分析天平（瑞士METTLER公司）；MS Finnigan Trace DSQ四极杆质谱仪；NMR瑞士Bruker Drx—500 MHz；瑞士Bruker AV—400 MHz；AB-8大孔吸附树脂（南开大学树脂厂）；RP-C₁₈反相硅胶（加拿大Silicycle公司）；Sephadex LH-20（美国Pharmacia公司）；MCI GEL CHP20P（日本三菱化学公司）。其余试剂均为分析纯，由国药控股集团化学试剂有限公司提供。

绞股蓝药材2010年购买于广西南宁，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino 的全草。

绞股蓝药材粗粉20.0 kg，用乙醇渗漉提取，回收溶剂得乙醇总提取物，总提取物加水悬浮后依次用石油醚（60～90 ℃）、醋酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，得石油醚部位286 g，醋酸乙酯部位524 g，正丁醇部位974 g，水部位1 303 g和不溶物1 800 g。石油醚部位浸膏45 g用硅胶柱色谱分离，以石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱。石油醚-醋酸乙酯（8∶1）流分经反复硅胶柱色谱分离得到化合物1（80 mg）。

醋酸乙酯部位用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脱，得到的8个流分经硅胶、聚酰胺、MCI和Sephadex LH-20柱色谱分离，得到化合物2（20 mg）、3（50 mg）、4（10 mg）、5（80 mg）、6（1 g）、7（30 mg）、8（30 mg）、9（20 mg）、10（5 mg）、11（25 mg）。正丁醇部位浸膏经AB-8大孔吸附树脂柱色谱分离，水-乙醇梯度洗脱，再利用正相和反相硅胶柱色谱、MCI柱色谱、聚酰胺柱色谱和Sephadex LH-20柱色谱分离纯化得到化合物12（5 mg）、13（20 mg）、14（500 mg）、15（70 mg）、16（3 mg）、17（5 mg）。

化合物1：白色粉末（醋酸乙酯），EI-MS m/z: 73,101,115,129,143,157,171,185；分子式C₁₂H₂₄O₂。¹H-NMR (500 MHz,CDCl₃) δ: 0.89 (3H,t,J = 6.7 Hz,-CH₃),2.34 (2H,t,J = 7.5 Hz,H-2),1.63 (2H,m,H-3),1.25～1.29 (16H,m,H-4～11)；¹³C-NMR (125 MHz,CDCl₃) δ: 14.0 (C-12),22.6 (C-13),24.6 (C-10),29.0 (C-9),29.1 (C-8),29.3 (C-7),29.3 (C-6),29.5 (C-5),29.6 (C-4),31.8 (C-3),33.9 (C-2),179.4 (C-1)。以上数据与文献报道基本一致^[9]，故鉴定化合物1为月桂酸。

化合物2：无色针状结晶（氯仿），mp 129～130 ℃，Liebermann-Burchard反应阳性，与β-谷甾醇对照品共薄层，Rf值一致，与对照品混合后熔点不下降，故鉴定化合物2为β-谷甾醇。

化合物3：白色鳞片状结晶（甲醇），EI-MS m/z: 355 [M＋Na]⁺,332 [M]⁺,304,275,179,167 [A₁＋H]⁺,166 [B₁]⁺,151,136；分子式C₁₇H₁₆O₇。¹H-NMR (500 MHz,C₅D₅N) δ: 3.70 (3H,s,7-OCH₃),5.05 (1H,d,J = 11.6 Hz,H-3),5.46 (1H,d,J = 11.6 Hz,H-2),6.25 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),6.36 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),7.31 (1H,s,H-5′),7.40 (1H,m,H-6′),7.55 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-2′),12.51 (1H,s,5-OH)；¹³C-NMR (100 MHz,C₅D₅N) δ: 55.8 (7-OCH₃),55.8 (4′-OCH₃),73.3 (C-3),84.9 (C-2),94.5 (C-8),95.6 (C-6),102.5 (C-10),112.4 (C-2′),116.3 (C-5′),122.1 (C-6′),129.0 (C-1′),148.7 (C-3′),149.0 (C-4′),163.5 (C-9),164.5 (C-5),168.4 (C-7),199.3 (C-4)。以上数据与文献报道基本一致^[10]，故鉴定化合物3为3,5,3′-三羟基-4′,7-二甲氧基二氢黄酮。

化合物4：无色片状结晶（氯仿-甲醇），EI-MS m/z: 110 [M]⁺，分子式为C₆H₆O₂。¹H-NMR (500 MHz,CDCl₃) δ: 6.82 (2H,dd,J = 9.7,3.5 Hz,H-3,6),6.76 (2H,dd,J = 9.7,3.6 Hz,H-4,5)；¹³C-NMR (125 MHz,CDCl₃) δ: 115.2 (C-2,5),120.6 (C-3,4),144.1 (C-1,6)。以上数据与文献报道基本一致^[11]，故鉴定化合物4为邻二苯酚。

化合物5：白色簇状结晶（乙醇），盐酸-镁粉反应呈阳性，提示可能为黄酮或黄酮醇类化合物。三氯化铁反应呈蓝黑色，表明有酚羟基。ZrOCl₂反应呈亮黄色，加入枸橼酸后无明显褪色，提示含有3-OH。氨性氯化锶反应呈阴性，显示分子中无邻二酚羟基。EI-MS m/z: 319 [M＋H]⁺,318 [M]⁺,166 [B₁]⁺,153 [A₁＋H]⁺,152,124。结合¹³C-NMR数据，可知相对分子质量为318，分子式为C₁₆H₁₄O₇，不饱和度为10。¹H-NMR (500 MHz,CD₃OD) δ: 5.92 (1H,d,J = 2.1 Hz),5.88 (1H,d,J = 2.1 Hz)，提示A环为5,7-二取代；结合EI-MS的碎片离子153 [A₁＋H]⁺，可知A环应为5-OH、7-OH取代；7.11 (1H,d,J = 1.9 Hz),6.97 (1H,dd,J = 8.0,1.9 Hz),6.83 (1H,d,J = 8.0 Hz)，为B环的3个芳氢信号，结合3.88 (3H,s,-OCH₃) 和MS的碎片离子166([B₁]⁺)，分析可知B环应为3′-OCH₃，4′-OH取代；4.98 (1H,d,J = 11.6 Hz),4.62 (1H,d,J = 11.6 Hz) 分别为2位和3位氢。¹³C-NMR (100 MHz,CD₃OD) δ: 显示16个碳信号，其中δ 198.4，56.3分别为酮羰基碳和甲氧基碳信号。δ 85.1和73.5是二氢黄酮类2和3位碳的特征信号，提示该化合物为二氢黄酮类。以上数据与3′-O-甲基花旗松素光谱数据基本一致^[11]，鉴定化合物5为3′-O-甲基花旗松素。具体核磁数据见表 1。

表 1(Table 1)

表 1化合物5的1H-NMR (400 MHz,CD3OD) 和13C-NMR (100 MHz,CD3OD) 数据 Table 1 1H-NMR (400 MHz,CD3OD) and 13C-NMR (100 MHz,CD3OD) data of compound 5 碳位 δc δH 3′-OCH3 56.3 3.88 (3H,s) 2 85.1 4.98 (1H,d,J = 11.6 Hz) 3 73.5 4.62 (1H,d,J = 11.6 Hz) 4 198.4 5 165.2 6 97.2 5.88 (1H,d,J = 2.1 Hz) 7 168.6 8 96.2 5.92 (1H,d,J = 2.1 Hz) 9 164.4 10 101.8 1′ 129.7 2′ 112.3 6.95 (1H,d,J = 2.1 Hz) 3′ 148.3 4′ 148.8 5′ 115.9 6.85 (1H,d,J = 8.6 Hz) 6′ 122.1 6.97 (1H,dd,J = 8.0,1.9 Hz)

表 1化合物5的1H-NMR (400 MHz,CD3OD) 和13C-NMR (100 MHz,CD3OD) 数据 Table 11H-NMR (400 MHz,CD3OD) and 13C-NMR (100 MHz,CD3OD) data of compound 5

化合物6：黄色针状结晶（甲醇），EI-MS m/z: 302（苷元的M⁺），285,274,273,229,153 [B₂]⁺,128,69，分子式C₁₅H₁₀O₇。¹H-NMR (500 MHz,DMSO-d₆) δ: 6.16 (1H,s,H-6),6.38 (1H,s,H-8),6.86 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′),7.52 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-6′),7.65 (1H,s,H-2′),9.39 (1H,brs,-OH),12.48 (1H,s,5-OH)。以上数据与文献报道基本一致^[13]，故鉴定化合物6为槲皮素。

化合物7：黄色针状结晶（甲醇），EI-MS m/z: 316 [M]⁺,288,273,167 [A₁＋H]⁺,150 [B₁]⁺,137，分子式C₁₆H₁₂O₇。¹H-NMR (500 MHz,DMSO-d₆) δ: 3.84 (3H,s,7-OCH₃),6.33 (1H,d,J = 2.0 Hz,6-H),6.68 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),6.89 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′),7.57 (1H,dd,J = 8.5,2.0 Hz,H-6′),7.71 (1H,d,J = 1.6 Hz,H-2′),9.48 (2H,s,2×-OH),12.47 (1H,s,5-OH)；¹³C-NMR (125 MHz,DMSO-d₆) δ: 55.9 (7-OCH₃),147.2 (C-2),136.0 (C-3),175.9 (C-4),160.3 (C-5),97.4 (C-6),164.8 (C-7),91.8 (C-8),156.0 (C-9),103.9 (C-10),121.8 (C-1′),115.2 (C-2′),145.0 (C-3′),147.8 (C-4′),115.5 (C-5′),120.0 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致^[14]，故鉴定化合物7为鼠李素。

化合物8：白色粉末(甲醇)，EI-MS m/z: 574 [M]⁺,429,395,355,281,221,147，分子式C₃₅H₅₈O₆。¹H-NMR (500 MHz,C₅D₅N) δ: 0.57（3H,s,H-18),0.71 (3H,s,H-19),0.84 (3H,m,H-29),0.87 (3H,d,J = 6.6 Hz,H-26),0.89 (3H,d,J = 6.6 Hz,H-27),1.05 (3H,J = 6.6 Hz,H-21),5.18 (1H,dd,J = 15.6,8.9 Hz,H-22),5.08 (1H,dd,J =15.6,8.9 Hz,H-23),5.04 (1H,m,H-7)。¹³C-NMR (125 MHz,C₅D₅N) δ: 37.4 (C-1),30.0 (C-2),78.7 (C-3),34.6 (C-4),40.2 (C-5),30.0 (C-6),117.9 (C-7),139.6 (C-8),49.6 (C-9),34.6 (C-10),21.1 (C-11),39.7 (C-12),43.5 (C-13),55.2 (C-14),23.3 (C-15),28.7 (C-16),55.3 (C-17),12.0 (C-18),12.3 (C-19),40.2 (C-20),21.1 (C-21),138.6 (C-22),129.7 (C-23),51.4 (C-24),32.1 (C-25),21.8 (C-26),19.2 (C-27),25.7 (C-28),12.3 (C-29),102.3 (C-1′),75.4 (C-2′),78.4′ (C-3′),77.2 (C-4′),71.9 (C-5′),62.9 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致^[15]，故鉴定化合物8为α-菠菜甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9：无色针状结晶（醋酸乙酯），EI-MS m/z: 155 [M＋H]⁺,154 [M]⁺,137 [M－OH]⁺,109 [M－COOH]⁺，分子式为C₇H₆O₄。¹H-NMR (500 MHz,CD₃OD) δ: 6.79 (1H,d,J = 8.1 Hz,H-5),7.40 (2H,dd,J = 8.4,2.0 Hz,H-2,6)；¹³C-NMR (100 MHz,CD₃OD) δ: 123.7 (C-1),117.6 (C-2),145.9 (C-3),151.3 (C-4),115.6 (C-5),123.4 (C-6),170.5 (C-7)。以上数据与文献报道基本一致^[16]，故鉴定化合物9为3,4-二羟基苯甲酸。

化合物10：黄色针状结晶（甲醇），盐酸-镁粉、Molish反应均呈阳性，提示为黄酮苷类化合物。经酸水解用纸色谱检出含有葡萄糖和鼠李糖。ZrOCl₂反应显示亮黄色，加入枸橼酸后有明显褪色，提示该化合物含有5-OH，无3-OH。氨性氯化锶反应呈阴性，提示分子中无邻二酚羟基。EI-MS m/z: 316 [苷元的M⁺] (100),315,287,273,245,150。结合¹³C-NMR数据可知相对分子质量为624，分子式为C₂₈H₃₂O₁₆，不饱和度为13。¹H-NMR (500 MHz,DMSO-d₆) δ: 6.65 (1H,d,J = 1.6 Hz),6.34 (1H,d,J = 1.4 Hz) 提示A环为5,7-二取代；7.56 (1H,s),7.54 (1H,m),6.83 (1H,d,J = 8.7 Hz) 提示B环为1,3,4-三取代。结合δ 3.84 (3H,s,-OCH₃) 和质谱150 [B₂⁺]，可知B环为3′-OCH₃，4′-OH取代。¹³C-NMR (125 MHz,DMSO-d₆) δ: 28个碳信号，其中δ 177.4 (C=O),56.0 (-OCH₃),104.9,101.7为葡萄糖和鼠李糖端基碳，δ 17.6应为鼠李糖甲基峰信号。以上数据与文献报道基本一致^[17]，故鉴定化合物10为异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷。具体核磁数据见表 2。

表 2(Table 1)

表 2化合物10的1H-NMR (400 MHz,CD3OD) 和13C-NMR (100 MHz,CD3OD) 数据 Table 21H-NMR (400 MHz,CD3OD) and 13C-NMR (100 MHz,CD3OD) data of compound 10 碳位 δc δH 3′-OCH3 56.0 3.84 (3H,s) 2 156.3 3 133.5 4 177.4 5 160.9 6 97.8 6.34 (1H,d,J = 1.4 Hz) 7 165.0 8 92.1 6.65 (1H,d,J = 1.6 Hz) 9 156.9 10 104.9 1′ 121.0 2′ 115.1 7.56 (1H,s) 3′ 144.7 4′ 148.6 5′ 115.1 6.83 (1H,d,J = 8.7 Hz) 6′ 121.6 7.54 (1H,m) 1″ 101.1 5.10 (1H,br) 2″ 74.0 3″ 76.4 4″ 70.0 5″ 76.4 6″ 67.0 1′′′ 100.7 5.35 (1H,d,J = 6.9 Hz) 2′′′ 70.3 3′′′ 70.5 4′′′ 71.8 5′′′ 68.1 6′′′ 17.6 0.96 (3H,d,J = 6.1 Hz)

表 2化合物10的1H-NMR (400 MHz,CD3OD) 和13C-NMR (100 MHz,CD3OD) 数据 Table 21H-NMR (400 MHz,CD3OD) and 13C-NMR (100 MHz,CD3OD) data of compound 10

化合物11：白色粉末（甲醇），EI-MS m/z: 165 [M＋H]⁺,163 [M－H]⁺，分子式C₆H₁₂O₅。¹H-NMR (500 MHz,CD₃OD) δ: 1.23 (3H,d,J = 6.2 Hz,-CH₃),5.00 (1H,d,J = 5.5 Hz,H-1),3.77 (1H,m,H-2),3.70 (1H,dd,J = 5.4,5.6 Hz,H-3),3.30 (1H,m,H-4),3.81 (1H,m,H-5)；¹³C-NMR (125 MHz,CD₃OD) δ: 96.8 (C-1),73.0 (C-2),72.0 (C-3),74.2 (C-4),69.2 (C-5),18.1 (C-6)。以上数据与文献报道数据基本一致^[18]，故鉴定化合物11为鼠李糖。

化合物12：无色片状结晶（甲醇），mp 135～140 ℃，与丙二酸对照品共薄层，在3种不同的溶剂系统中Rf值相同，与对照品混合后熔点不下降，鉴定化合物12为丙二酸。

化合物13：无色透明液体，EI-MS m/z: 355 [M＋H]⁺,353 [M－H]⁺，分子式C₁₄H₂₆O₁₀。¹H-NMR (500 MHz,CD₃OD) δ: 1.23 (3H,t,J = 7.2 Hz,-CH₃),1.25 (3H,d,J = 6.2 Hz,Rha-CH₃),3.94～3.16 (14H,m),4.26 (1H,d,J = 7.8 Hz,H-1),4.75 (1H,d,J = 1.2 Hz,H-1′)；¹³C-NMR (125 MHz,CD₃OD) δ: 104.9 (C-1),74.9 (C-2),77.9 (C-3),71.5 (C-4),76.7 (C-5),68.1 (C-6),102.2 (C-1′),72.0 (C-2′),72.3 (C-3′),73.9 (C-4′),69.7 (C-5′),17.9 (C-6′),15.5 (C-2″),66.2 (C-1″)。以上数据与文献报道基本一致^[19]，故鉴定化合物13为β-乙氧基芸香糖苷。

化合物14：黄色粉末（甲醇），盐酸-镁粉反应呈紫红色，Molish反应呈紫红色环，与芦丁对照品共薄层，二者Rf值及显色行为一致，故鉴定化合物14为芦丁。

化合物15：淡黄色粉末（甲醇），EI-MS m/z: 330 [M－Glu－Rha]⁺,315,301,287,251,175,155，分子式C₂₉H₃₄O₁₆。¹H-NMR (500 MHz,DMSO-d₆) δ: 6.68 (1H,s,H-8),6.36 (1H,d,J = 1.4 Hz,H-6),7.73 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-6′),7.52 (1H,s,H-2′),7.04 (1H,d,J = 8.6 Hz,H-5′),12.51 (1H,s,5-OH),3.85 (6H,s,4′,7′-OCH₃),5.30 (1H,d,J = 3.0 Hz,H-1″),4.40 (1H,m,1′′′),5.13 (2H,m),3.06～3.39 (11H,m,sugar-H),0.96 (3H,d,J = 6.1 Hz,Rha-CH₃)；¹³C-NMR (125 MHz,DMSO-d₆) δ: 55.6 (4′-OCH₃),56.0 (7′-OCH₃),156.6 (C-2),133.8 (C-3),177.5 (C-4),160.8 (C-5),97.9 (C-6),165.1 (C-7),92.2 (C-8),156.3 (C-9),104.9 (C-10),121.4 (C-1′),115.7 (C-2′),145.8 (C-3′),148.8 (C-4′),111.3 (C-5′),122.4 (C-6′),101.1 (C-1″),74.0 (C-2″),76.3 (C-3″),70.3 (C-4″),75.8 (C-5″),66.8 (C-6″),101.1 (C-1′′′),70.5 (C-2′′′),69.8 (C-3′′′),71.7 (C-4′′′),68.1 (C-5′′′),17.6 (C-6′′′)。以上数据与文献报道基本一致^[20]，故鉴定化合物15为商陆苷。

化合物16：白色粉末（甲醇），mp 197～198 ℃，Liebermann-Burchard反应阳性，经酸水解后用纸色谱检出含有葡萄糖，与人参皂苷Rb₁对照品共薄层色谱，二者Rf值及显色行为一致，故鉴定化合物16为人参皂苷Rb₁。

化合物17：白色粉末（乙醇），mp 290～292 ℃，Liebermann-Burchard反应阳性，经酸水解后用PC检出含有葡萄糖，与β-胡萝卜苷对照品共薄层色谱，二者Rf值及显色行为一致，故鉴定化合物17为β-胡萝卜苷。