中草药  2014, Vol. 45 Issue (18): 2588-2592
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引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.18.002
李敏, 王宇, 李畅, 戴毅, 姚新生. 酸枣仁中1个新的黄酮碳苷成分[J]. 中草药, 2014, 45(18): 2588-2592.
LI Min, WANG Yu, LI Chang, DAI Yi, YAO Xin-sheng. A new flavone C-glycoside from Ziziphi Spinosae Semen[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2014, 45(18): 2588-2592.
酸枣仁中1个新的黄酮碳苷成分
李敏1, 王宇2,3, 李畅2, 戴毅1, 姚新生1,2     
1. 暨南大学中药及天然药物研究所, 广东 广州 510632;
2. 沈阳药科大学中药学院, 辽宁 沈阳 110016;
3. 华北制药集团先泰药业有限公司 质量保证中心, 河北 石家庄 052165
收稿日期: 2014-7-8;
作者简介：李敏（1989- ），女，海南海口人，暨南大学2012级硕士研究生，研究方向为中药及天然药物活性成分研究。Tel：13719461664E-mail：limin98_980lun@163.com
通讯作者：戴毅Tel：（020）85220785E-mail：daiyi1004@163.com
摘要：目的 研究酸枣仁Ziziphi Spinosae Semen的化学成分。方法 采用D-101大孔吸附树脂、硅胶、ODS、Sephadex LH-20和Toyopearl HW-40等色谱分离手段进行分离纯化，根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果 从酸枣仁70%乙醇提取物中分离得到了5个化合物，分别鉴定为6"，6'''-二阿魏酰异斯皮诺素（1）、山柰酚-3-O-β-D-吡喃木糖基-（1→2）- [α-L-吡喃鼠李糖基-（1→6）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、斯皮诺素（3）、异斯皮诺素（4）、6'''-阿魏酰斯皮诺素（5）。结论 化合物1为1个新的黄酮碳苷类化合物，命名为6"，6'''-二阿魏酰异斯皮诺素。化合物2为首次从该属植物中分离得到。
关键词： 酸枣     酸枣仁     黄酮碳苷     6", 6'''-二阿魏酰异斯皮诺素     山柰酚-3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷     斯皮诺素    
A new flavone C-glycoside from Ziziphi Spinosae Semen
LI Min1, WANG Yu2,3, LI Chang2, DAI Yi1, YAO Xin-sheng1,2    
1. Institute of Traditional Chinese Medicine and Natural Products, Jinan University, Guangzhou 510632, China;
2. College of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China;
3. Quality Assurance Center, North China Pharmaceutical Group Semisyntech Co., Ltd., Shijiazhuang 052165, China
Abstract: Objective To study the chemical constituents from 70% ethanol extract of Ziziphi Spinosae Semen. Methods Five compounds were isolated and purified by macroporous resin D101, silica gel, Sephadex LH-20, Toyopearl HW-40, and ODS column chromatographies. Results Five compounds (1—5) were isolated from 70% ethanol extract of Ziziphi Spinosae Semen. Their structures were identified by spectroscopic methods, as 6", 6'''-diferuloylisospinosin (1), kaempferol-3-O-β-D-xylopyranosyl-(1→2)- [α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranoside (2), spinosin (3), isospinosin (4), and 6'''-feruloylspinosin (5). Conclusion Compound 1 is a new flavone C-glycoside named 6", 6'''-diferuloylisospinosin. Compound 2 is reported from the genus Ziziphus Mill. for the first time.
Key words: Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chou     Ziziphi Spinosae Semen     flavone C-glycoside     6", 6'''-diferuloyl- isospinosin     kaempferol-3-O-β-D-xylopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranoside     spinosin    

酸枣仁为鼠李科枣属植物酸枣Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chou的干燥成熟种子。其药用始载于《神农本草经》，列为上品，《本草纲目》列为本部类，是养心安神首选药品[1]。其性平，味甘、酸，归肝、胆、心经，用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴等症。目前，关于酸枣仁的化学成分报道主要为皂苷类、三萜酸类、黄酮类及生物碱类[2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11]。本实验对酸枣仁的70%乙醇提取物进行化学成分研究，分离得到5个黄酮碳苷类化合物，分别鉴定为6″,6′′′-二阿魏酰异斯皮诺素（6″,6′′′-diferuloylisospinosin，1），山柰酚-3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-

吡喃葡萄糖苷（kaempferol-3-O-β-D-xylopyranosyl- (1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyrano-side，2），斯皮诺素（spinosin，3），异斯皮诺素（isospinosin，4），6′′′-阿魏酰斯皮诺素（6′′′- feruloylspinosin，5）。化合物1为1个新的黄酮碳苷化合物，命名为6″,6′′′-二阿魏酰异斯皮诺素。化合物2为首次从该属植物中分离得到。

1 仪器与材料

LCQ Advantage MAX质谱仪（美国Finnigan公司），Synapt G2质谱仪（美国Waters公司），Avance—300/400超导核磁共振仪（瑞士Bruker公司），SHIMADZU LC—6AD系列制备型高效液相色谱。制备高效液相色谱柱为C18柱（250 mm×20 mm，5 μm，Cosmosil）。薄层色谱硅胶GF254和柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂），D-101大孔树脂（天津），ODS（日本YMC公司），Sephadex LH-20填料（GE公司），Toyopearl HW-40填料（Toyo Soda MFG公司），色谱纯甲醇（山东禹王有限公司），色谱纯乙腈（迪马公司），分析纯化学试剂（天津富宇精细化工有限公司）。

药材由石家庄以岭药业提供，并由河北以岭医药研究院中药标本室田青存药师鉴定为酸枣Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chou的成熟干燥种子，标本（2011ZX09201-201-28）保存于暨南大学药学院中药及天然药物研究所。

2 提取与分离

酸枣仁14.5 kg 粗碎后，以80 L 70%乙醇提取4次，每次2 h。提取液浓缩后得到浸膏1.78 kg，以10倍量水混悬、离心、滤过后进行D-101大孔树脂柱色谱分离，分别用3倍体积的水及30%、50%、70%、95%乙醇进行洗脱，得到的馏份减压浓缩后，得到5个馏份Fr. A～E。取酸枣仁70%乙醇洗脱部位（SZR-D）69 g通过硅胶柱色谱氯仿-甲醇洗脱得到12个馏份Fr. D1～D12，再取氯仿-甲醇（85∶15）的D9馏份进行ODS柱色谱分离，50%甲醇水洗脱再经HW-40柱色谱及制备型HPLC分离得到化合物5（25.4 mg）。70%甲醇水洗脱得到D9馏份再过HW-40柱色谱，得到的60%甲醇水洗脱下的馏份经HPLC制备得到化合物1（16.5 mg）。取氯仿-甲醇（8∶2）的D10馏份进行ODS柱色谱、HW-40柱色谱和制备型HPLC得到化合物4（4.5 mg）。取氯仿-甲醇（7∶3）的D11馏份进行ODS柱色谱和制备型HPLC得到化合物3（7.7 mg）。取酸枣仁50%乙醇洗脱部位（SZR-C）106.4 g 通过硅胶柱色谱氯仿-甲醇（8∶2）洗脱馏份经过ODS柱色谱和制备型HPLC分别得到化合物2（21.2 mg）。

化合物1的水解及衍生化反应：取化合物1（1.5 mg），加入2 mol/L HCl（2 mL），置于90 ℃水浴中反应2 h。将混合物蒸干，加入1 mL水混悬，再加入等体积的水饱和的氯仿萃取。移除氯仿层，水层蒸干。样品继续进行衍生化实验：加入左旋半胱氨酸甲酯盐酸盐（2.5 mg）于吡啶（1 mL）中溶解，置于60 ℃水浴下反应1 h。再加入邻甲苯基异硫代异氰酸酯（5 μL），继续在60 ℃下反应1 h。反应完成后，直接作为供试品，以进行HPLC分析。单糖对照品（D-葡萄糖、L-葡萄糖各2.0 mg）采用相同的方法进行衍生化反应，反应后直接作为HPLC供试品[12]。

HPLC分析条件：色谱柱：Ultimate TM，XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，Welch Materials Inc.）。流动相为25%乙腈-水（含0.1%乙酸）；体积流量0.8 mL/min；柱温35 ℃；检测波长250 nm。HPLC分析结果显示化合物1中含有D-葡萄糖（tR＝23.02 min）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色固体。+7.0° (c 0.1,MeOH)。(nm): 213 (4.79),327 (4.79)，为黄酮类化合物的紫外特征吸收。ESI-MS给出准分子离子峰m/z: 961 [M＋H]+,959 [M－H]-，提示相对分子质量为960。HR-ESI-TOF-MS正离子模式显示m/z: 961.277 3 [M＋H]+（C48H49NO21，计算值961.276 6），确定分子式为C48H48O21，不饱和度为25。通过与异斯皮诺素（化合物4）的13C-NMR的数据进行比对（表 1），发现有28个碳信号符合异斯皮诺素的谱学特征。对化合物1进行了酸水解及衍生化，确定化合物1含有D-葡萄糖。而根据糖端基质子的耦合常数δH4.90 (d,J = 10.2 Hz),δH 4.07 (d,J = 7.8 Hz) 确定葡萄糖为β构型。通过1H-1H COSY、HSQC及HMBC谱，对糖基片段的碳氢信号进行了归属。在HMBC谱中（图 1），糖的端基氢信号H-1″与C-7/C-8/C-9存在远程相关，可确定糖基以碳碳单键连在黄酮苷元的C-8位上。H-1′′′和C-2″存在远程相关，提示第2个糖片段连接于上述糖的2″位上。同时，2个糖基的6位H-6″ (δH 4.53,4.16),H-6′′′ (δH 3.89,3.69) 分别和羰基碳信号C-9′′′′′ (δC 166.8) C-9′′′′ (δC 166.5) 相关，提示2个糖基的6位均发生酯化。

表 1 化合物1的1H-NMR和13C-NMR (600/150 MHz,DMSO-d6) 数据 Table 1 1H-NMR and 13C-NMR (600/150 MHz,DMSO-d6) data of compound 1

图 1 化合物1主要HMBC相关Fig. 1 Key HMBC correlations of compound 1

1H-NMR谱中，除异斯皮诺素片段之外，芳香氢信号δH7.31 (1H,d,J = 1.8 Hz),7.09 (1H,dd,J = 8.4,1.8 Hz),6.82 (1H,d,J = 8.4 Hz)；7.13 (1H,d,J = 1.8 Hz),6.93 (1H,dd,J = 8.4,1.8 Hz),6.73 (1H,d,J = 8.4 Hz) 相互耦合，提示可能存在2个1,3,4-三取代的苯环；氢信号δH7.48 (1H,d,J = 15.6 Hz),6.28 (1H,d,J = 15.6 Hz)；7.47 (1H,d,J = 15.6 Hz),6.31 (1H,d,J = 15.6 Hz) 相互耦合，提示可能存在2对反式双键；高场区还显示氢信号δH3.85 (3H,s),3.72 (3H,s) 提示含有2个甲氧基。13C-NMR谱中，共显示48个碳信号。除异斯皮诺素部分外，还有8个季碳，10个叔碳，2个甲氧基碳共20个信号。通过HSQC将碳氢直接相关归属。在HMBC谱中，H-2′′′′与季碳信号δC 149.4，双键碳信号δC 144.8有相关，可以确定两个碳分别为C-4′′′′和C-7′′′′；H-5′′′′与2个季碳信号δC 147.9和125.6相关，确定两个碳分别为C-3′′′′和C-1′′′′。甲氧基氢信号δC 3.85和C-3′′′′相关，确定甲氧基连接在C-3′′′′上。H-7′′′′与羰基碳信号δC166.5相关，确定双键与C-9′′′′直接相连，由此得到阿魏酰基基团结构。同理可得到另外1个阿魏酰基基团。二者分别连在异斯皮诺素片段的外侧和内侧糖基的6位上。综合上述分析，经文献检索，确定化合物1为1个新的黄酮碳苷化合物，命名为6″,6′′′-二阿魏酰异斯皮诺素。

化合物2：黄色固体。ESI-MS m/z: 749 [M＋Na]+,725 [M－H]-。1H-NMR (600 MHz,DMSO-d6) δ: 6.38 (1H,d,J = 1.8 Hz,H-6),6.17 (1H,d,J = 1.8 Hz,H-8),8.02 (1H,d,J = 9.0 Hz,H-2′ 6′),6.88 (1H,d,J = 9.0 Hz,H-3′ 5′),5.57 (1H,d,J = 7.2 Hz,H-1″),5.57 (1H,d,J = 7.2 Hz,H-1″),4.58 (1H,d,J = 7.2 Hz,H-1′′′),4.34 (1H,brs,H-1′′′′)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ: 155.8 (C-2),132.8 (C-3),177.3 (C-4),161.2 (C-5),98.8 (C-6),164.5 (C-7),93.7 (C-8),156.4 (C-9),103.7 (C-10),120.9 (C-1′),130.9 (C-2′ 6′),115.2 (C-3′ 5′),159.9 (C-4′),98.2 (C-1″),81.6 (C-2″),76.7 (C-3″),69.5 (C-4″),75.7 (C-5″),66.1 (C-6″),104.4 (C-1′′′),73.7 (C-2′′′),76.0 (C-3′′′),69.4 (C-4′′′),65.6 (C-5′′′),100.4 (C-1′′′′),70.3 (C-2′′′′),70.6 (C-3′′′′),71.8 (C-4′′′′),68.2 (C-5′′′′),17.6 (C-6′′′′)。以上数据与文献报道一致[13]，故鉴定化合物2为山柰酚-3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物3：黄色固体。ESI-MS m/z: 631 [M＋Na]+,607 [M－H]-。1H-NMR (300 MHz,DMSO-d6) δ: 6.84/6.81 (1H,s,H-3),6.81/6.77 (1H,s,H-8),7.95 (2H,d,J = 8.7 Hz,H-2′,6′),6.89 (2H,d,J = 8.7 Hz,H-3′,5′),3.90 (3H,s,-OCH3),4.68/4.67 (1H,d,J = 9.9 Hz,H-1′′),4.16 (1H,t,J = 7.5 Hz,H-1′′′)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 163.7 (C-2),102.7/102.6 (C-3),182.2/181.9 (C-4),159.7 (C-5),108.6/108.5 (C-6),165.0 (C-7),90.7/90.2 (C-8),157.0/156.9 (C-9),104.4/104.1 (C-10),120.2/120.1 (C-1′),128.5 (C-2′,6′),116.2 (C-3′,5′),160.5 (C-4′ ),56.5/56.1 (-OCH3),71.0/70.7 (C-1′′),81.2/80.7 (C-2′′),78.7/78.3 (C-3′′),70.4 (C-4′′),81.9/81.6 (C-5′′),61.5 (C-6′′),105.4/ 105.2 (C-1′′′),74.7/74.5 (C-2′′′),76.6/76.4 (C-3′′′),69.5/69.2 (C-4′′′),76.4/76.3 (C-5′′′),60.6/60.1 (C-6′′′)。以上数据与文献报道一致[3]，故鉴定化合物3为斯皮诺素。

化合物4：淡黄色粉末。ESI-MS m/z: 631 [M＋Na]+，643 [M＋Cl]-。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 6.47 (1H,s,H-3),6.78 (1H,s,H-6),8.02 (2H,d,J = 8.7 Hz,H-2′,6′),6.89 (2H,d,J = 8.7 Hz,H-3′,5′),3.87 (3H,s,-OCH3),4.83 (1H,d,J = 9.9 Hz,H-1″),4.05 (1H,t,J = 9.3 Hz,H-1′′′)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 163.4 (C-2),102.5 (C-3),182.2 (C-4),161.5 (C-5),95.1 (C-6),164.2 (C-7),104.7 (C-8),155.3 (C-9),104.2 (C-10),121.3 (C-1′),129.0 (C-2′,6′),115.9 (C-3′,5′),161.6 (C-4′),56.6 (-OCH3),71.4 (C-1″),80.9 (C-2″),78.2 (C-3″),70.1 (C-4″),81.8 (C-5″),60.9 (C-6″),104.9 (C-1′′′),74.5 (C-2′′′),76.1 (C-3′′′),69.4 (C-4′′′),76.1 (C-5′′′),60.2 (C-6′′′)。以上数据与文献报道一致[3]，故鉴定化合物4为异斯皮诺素。

化合物5：黄色粉末。ESI-MS m/z: 807 [M＋Na]+,783 [M－H]-。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 6.71/6.69 (1H,s,H-3),6.67/6.53 (1H,s,H-8),7.81 (2H,d,J = 8.8 Hz,H-2′,6′),6.90/6.85 (2H,d,J = 8.8 Hz,H-3′,5′),4.70/4.68 (1H,d,J = 10.0 Hz,H-1′′),4.25 (1H,t,J = 9.2 Hz,H-1′′′),7.18/7.05 (1H,d,J = 1.2 Hz,H-2′′′′),6.78/6.74 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′′′′),6.93/6.79 (1H,dd,J = 8.0,1.2 Hz,H-6′′′′),7.22/7.09 (1H,d,J = 15.6 Hz,H-7′′′′),6.24/6.16 (1H,d,J = 15.6 Hz,H-8′′′′)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 163.9/ 163.6 (C-2),103.1/102.9 (C-3),182.3/181.8 (C-4),160.8/159.5 (C-5),108.7 (C-6),165.2/164.2 (C-7),90.6/89.9 (C-8),157.0/156.9 (C-9),104.5/104.0 (C-10),121.2/121.1 (C-1′),128.6/128.5 (C-2′,6′),115.9/115.8 (C-3′,5′),161.3 (C-4′ ),56.4/56.1 (-OCH3),71.0/70.7 (C-1′′),81.7/80.2 (C-2′′),78.8/78.6 (C-3′′),70.4/70.3 (C-4′′),82.0 (C-5′′),61.5 (C-6′′),105.7/105.2 (C-1′′′),74.5/74.4 (C-2′′′),76.3 (C-3′′′),68.9/68.7 (C-4′′′),73.4/73.2 (C-5′′′),62.4/62.1 (C-6′′′),125.5/125.3 (C-1′′′′),110.9/110.8 (C-2′′′′),147.9 (C-3′′′′),149.3 (C-4′′′′),115.4 (C-5′′′′),123.2/123.0 (C-6′′′′),144.8/ 144.7 (C-7′′′′),114.1/113.6 (C-8′′′′),166.3/166.2 (C-9′′′′),55.7/55.6 (-OCH3)。以上数据与文献报道一致[3]，故鉴定化合物5为6′′′-阿魏酰斯皮诺素。

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