青江藤Celastrus hindsii Benth. 是卫矛科（Celastracea）南蛇藤属Celastrus L. 植物，又名夜茶藤、黄果藤。青江藤的根可作为通经药和利尿药使用^[1]。前期研究中，国内外的研究者已从该植物中分离得到了三萜^[2,3]、倍半萜^[4,5]、生物碱^[6]等成分，因β-二氢沉香呋喃型倍半萜类成分具有杀虫活性，相关研究主要集中于此。为寻找更多的活性成分，丰富化合物的类型，本实验对产自云南的青江藤茎枝的80%乙醇提取物进行系统化学成分研究，从中分离得到4个黄烷类化合物，分别鉴定为(2S)-7,3′-二甲氧基-6,4′-二羟基黄烷[(2S)-7,3′-dimethoxy-6,4′-dihydroxyflavan，1]、6,7,3′-三甲氧基-4′-羟基黄烷（6,7,3′-trimethoxy-4′- hydroxyflavan，2）、6,7-二甲氧基-3′,4′-二羟基黄烷（6,7-dimethoxy-3′,4′-dihydroxyflavan，3)、(2S)-7,3′-二甲氧基-4′-羟基黄烷 [(2S)-7,3′-dimethoxy-4′-hydroxyflavan，4]，化合物1～3为新的黄烷类化合物，并首次获得X-ray数据，分别命名为青江藤烷A、青江藤烷B、青江藤烷C。其中化合物2和3分别为一对对映异构体，对映异构体在天然产物中十分少见，这也是首次从该植物中分离得到黄烷类的对映异构体，化合物4为首次从该种植物中分离得到。结构见图 1。

图 1

Fig. 1

图 1 化合物1～4的结构 Fig. 1 Structures of compounds 1—4

柱色谱硅胶（200～300目）和薄层色谱硅胶GF254（烟台江友硅胶开发有限公司）；Sephadex LH-20（40～70 μm）填料（美国GE公司），ODS填料（日本YMC公司）；薄层色谱制备板（烟台江友硅胶开发有限公司）；AVANCE—400、500 MHz核磁共振波谱仪（瑞士Bruker公司）；Agilent LC/MSD和Agilent Q-TOF高分辨质谱仪（美国Agilent公司）；Bruker FTIR Vector 22红外光谱仪（瑞士Bruker公司）；Shimadzu UV—2550分光光度计（日本Shimadzu公司）；Perkin-Elmer 341数字旋光仪（美国Perkin-Elmer公司）；Buchi Sepacore C—615中压制备色谱系统（瑞士Buchi公司）。

实验用青江藤药材于2010年12月采自云南昆明，由第二军医大学张汉明教授鉴定为南蛇藤属植物青江藤Celastrus hindsii Benth. 的茎枝，标本（2010120822）保存于第二军医大学药学院天然药化教研室。

青江藤药材茎枝5.0 kg经80%乙醇热回流提取4次，每次3 h，滤过，合并提取液，减压浓缩，得浸膏300 g，以适量水混悬后分别用三氯甲烷和醋酸乙酯萃取，减压回收溶剂，得三氯甲烷萃取物80 g。将三氯甲烷萃取物经常压硅胶柱色谱分离，石油醚-醋酸乙酯（50∶1、30∶1、10∶1、5∶1、1∶1）梯度洗脱，得到8个部分Fr. 1～8。将Fr. 4（8.8 g）再次经过硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（10∶1）洗脱，得到4个部分Fr. 4-1～4-4。其中Fr. 4-2（200 mg）依次经过Sephadex LH-20（甲醇）及薄层色谱制备板（石油醚-醋酸乙酯10∶1）分离，得到化合物1（20 mg）、4（6 mg）；Fr. 6（7.8 g）经过反相中压制备色谱，40%～100%甲醇水溶液梯度洗脱，得到3个部分Fr. 6-1～6-3。将Fr. 6-2（30 mg）经过Sephadex LH-20（甲醇）分离纯化，得到化合物2（6 mg）；将Fr. 6-3（100 mg）依次经过Sephadex LH-20（甲醇）及薄层色谱制备板（石油醚-醋酸乙酯8∶1）分离纯化，得到化合物3（30 mg）。

化合物1：无色晶体（甲醇）。[α]25D -1.83°（c 0.30，甲醇）；(nm): 286 (3.49)；IR(cm^-1): 3 396,2 916,1 633,1 512,1 452,1 269,1 122,1 034,827。HR-ESI-MS给出分子离子峰m/z: 325.107 6 [M＋Na]⁺（计算值C₁₇H₁₈NaO₅ 325.104 6），确定相对分子质量为302，分子式为C₁₇H₁₈O₅，不饱和度为9。红外光谱中3 396 cm^-1处有强吸收，表明其结构中存在羟基。根据¹H-NMR、¹³C-NMR（表 1）和DEPT谱，可以判断该化合物结构中含有2个甲氧基、2个亚甲基、6个次甲基和7个季碳，结合分子式推测结构中还有2个羟基取代。综合分析并结合¹H-¹H COSY和HSQC谱，可确定该化合物含有2个苯环，从¹H-NMR谱可以判断，其中1个是四取代的，有2个处于对位的苯环质子δ_H6.39 (1H,s)和6.48 (1H,s)；另1个是三取代的，形成ABX耦合系统 [δ_H 6.96 (1H,d,J = 1.7 Hz),6.75 (1H,d,J = 8.2 Hz),6.81 (1H,dd,J = 8.2,1.7 Hz)]，综合以上信息且¹H-NMR谱中δ_H 4.81 (1H,dd,J = 10.0,2.2 Hz)，推测该化合物是1个黄烷结构。在¹H-¹H COSY谱中（图 2），有H-2/H₂-3/H₂-4，H-5′/H-6′的相关信号，得到2个片段。在HMBC谱中（图 2），可以看到H-5 (δ_H 6.48) 分别与C-7 (δ_C 146.6) 和C-9 (δ_C 147.4) 相关，H-8 (δ_H 6.66) 分别与C-6 (δ_C 140.0) 和C-10 (δ_C 112.6) 相关，甲氧基质子 (δ_H 3.68) 与C-7 (δ_C 146.6) 相关，至此，A环的结构已确定；同样地，根据图 2中标出的2′，3′及6′位质子的HMBC相关信号确定B环的结构，甲氧基质子 (δ_H 3.77) 与C-3′ (δ_C 147.5) 相关，表明该甲氧基取代于3′位，至此确定了B环的结构；另外，HMBC谱中H₂-4 (δ_H 2.80) 分别与C-5 (δ_C 115.4),C-9 (δ_C 147.4) 和C-2 (δ_C 76.9) 相关；H-2 (δ_H 4.81) 分别与C-2′ (δ_C 110.5)和C-6′ (δ_C 118.8) 相关；H₂-3 (δ_H 4.81) 与C-1′ (δ_C 132.8) 相关；由此确定了该黄烷的平面结构。化合物的立体构型通过X-ray单晶衍射（图 3）确定，即化合物1鉴定为(2S)-7,3′-二甲氧基-6,4′-二羟基黄烷，是一新化合物，命名为青江藤烷A。单晶数据已提交至CCDC数据库，CCDC号为933083。

表 1(Table 1)

表 1 化合物1～3的1H-NMR和13C-NMR谱数据 Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compounds 1—3 碳位 1 a 2 b 3 c δH δC δH δC δH δC 2 4.81 (1H,dd,J = 10.0,2.2 Hz) 76.9 4.89 (1H,dd,J = 10.2,2.4 Hz) 77.8 4.80 (1H,dd,J = 10.1,2.3 Hz) 79.1 3 2.00 (2H,m) 29.5 2.11 (2H,m) 30.1 1.96～2.07 (2H,m) 31.3 4 2.58～2.80 (2H,m) 24.2 2.73～2.94 (2H,m) 24.9 2.64～2.84 (2H,m) 25.7 5 6.48 (1H,s) 115.4 6.59 (1H,s) 112.1 6.63 (1H,s) 114.7 6 140.0 143.0 144.5 7 146.6 148.2 149.9 8 6.39 (1H,s) 101.1 6.50 (1H,s) 101.0 6.42 (1H,s) 102.5 9 147.4 148.9 150.8 10 112.6 112.1 114.4 1′ 132.8 133.6 135.1 2′ 6.96 (1H,d,J = 1.7 Hz) 110.5 6.96 (1H,d,J = 1.0 Hz) 108.6 6.85 (1H,d,J = 2.0 Hz) 114.5 3′ 147.5 146.5 146.4 4′ 146.1 145.3 146.1 5′ 6.75 (1H,d,J = 8.2 Hz) 115.1 6.90 (1H,d,J = 8.0 Hz) 114.2 6.76 (1H,d,J = 8.0 Hz) 116.3 6′ 6.81 (1H,dd,J = 8.2,1.7 Hz) 118.8 6.92 (1H,dd,J = 8.0,1.0 Hz) 119.2 6.72 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz) 118.9 6-OCH3 3.83 (3H,s) 56.4 3.74 (3H,s) 57.4 7-OCH3 3.68 (3H,s) 55.6 3.81 (3H,s) 55.8 3.75 (3H,s) 56.5 3′-OCH3 3.77 (3H,s) 55.6 3.90 (3H,s) 55.8 a1H-NMR谱400 MHz，13C-NMR谱100 MHz，溶剂DMSO-d6；b1H-NMR谱500 MHz，13C-NMR谱125 MHz，溶剂CDCl3；c1H-NMR谱500 MHz，13C-NMR谱125 MHz，溶剂CD3OD a 400 and 100 MHz for 1H- and 13C-NMR in DMSO-d6; b 500 and 125 MHz for 1H- and 13C-NMR in CDCl3; c 500 and 125 MHz for1H- and 13C-NMR in CD3OD

表 1 化合物1～3的1H-NMR和13C-NMR谱数据 Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compounds 1—3

图 2

Fig. 2

图 2 化合物1～3关键的1H-1H COSY () 和HMBC () 相关信号 Fig. 2 Key 1H-1H COSY () and HMBC () correlations of compounds 1—3

图 3

Fig. 3

图 3 化合物1～3的X-ray单晶衍射图 Fig. 3 Single X-ray diffraction of compounds 1—3

化合物2：无色晶体（甲醇）。(nm): 240 (3.75)；IR(cm^-1): 3 437,2 962,1 614,1 512,1 463,1 271,1 120,1 014,854。HR-ESI-MS给出分子离子峰m/z: 317.138 9 [M＋H]⁺（计算值C₁₈H₂₁O₅ 317.138 4），确定相对分子质量为316，分子式为C₁₈H₂₀O₅，不饱和度为9。IR中3 437 cm^-1处也有羟基特征强吸收。根据¹H-NMR、¹³C-NMR（表 1）和DEPT谱中的信息，可以判断该化合物结构中含有3个甲氧基、2个亚甲基、6个次甲基和7个季碳。与化合物1的核磁数据相比较，两者非常相似，综合分析¹H-¹H COSY和HMBC谱，根据部分关键的相关信息（图 2），确定该化合物基本骨架与化合物1相同。在HMBC谱中，可以看到3个甲氧基质子(δ_H 3.83,3.81,3.90) 分别与C-6 (δ_C 143.0),C-7 (δ_C 148.2) 和C-3′ (δ_C 146.5) 相关，确定3个甲氧基分别取代于6位、7位和3′位。至此，化合物2的平面结构已确定，与1的区别在6位上的取代基不同。该化合物的立体构型通过X-ray单晶衍射分析（图 3）可知，其本身是1对对映异构体，2位上存在2种构型，经检索，其平面结构为新化合物，确定为6,7,3′-三甲氧基-4′-羟基黄烷，命名为青江藤烷B。单晶数据已提交至CCDC数据库，CCDC号为933307。

化合物3：无色晶体（甲醇）。(nm): 278 (3.58)；IR(cm^-1): 3 418,2 948,1 629,1 514,1 458,1 273,1 124,1 028,838。HR-ESI-MS给出分子离子峰m/z: 325.103 8 [M＋Na]⁺（计算值C₁₇H₁₈NaO₅ 325.104 6），确定相对分子质量为302，分子式为C₁₇H₁₈O₅，计算出不饱和度为9。根据¹H-NMR、¹³C-NMR（表 1）和DEPT谱，判断该化合物结构中含有2个甲氧基、2个亚甲基、6个次甲基和7个季碳。与化合物1的核磁数据相比较可以确定两者结构的骨架相同，综合分析¹H-¹H COSY和HMBC谱中的相关信号（图 2），确定该化合物也是1个黄烷类的结构。在HMBC谱中，2个甲氧基质子(δ_H 3.74,3.75) 分别与C-6 (δ_C 144.5) 和C-7 (δ_C 149.9) 相关，确定2个甲氧基分别取代于6位和7位。至此，化合物3的平面结构已确定。化合物3的立体构型经X-单晶衍射分析（图 3），发现其也是1对对映异构体，情况与化合物2类似，2位上存在2种构型，经检索，其平面结构为新化合物，将其确定为6,7-二甲氧基-3′,4′-二羟基黄烷，命名为青江藤烷C。单晶数据已提交至CCDC数据库，CCDC号为978634。

化合物4：无色晶体（甲醇）。ESI-MS m/z: 309 [M＋Na]⁺，推测相对分子质量为286。¹H-NMR (400 MHz,CDCl₃) δ: 7.01 (1H,d,J = 8.2 Hz,H-5),6.98 (1H,d,J = 1.7 Hz,H-2′),6.95 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′),6.93 (1H,dd,J = 8.0,1.7 Hz,H-6′),6.52 (1H,dd,J = 8.2,1.8 Hz,H-6),6.50 (1H,d,J = 1.8 Hz,H-8),4.97 (1H,dd,J = 10.4,2.2 Hz,H-2),3.92 (3H,s,7-OCH₃),3.78 (3H,s,3′-OCH₃),2.77～2.94 (2H,m,H-4),2.13 (2H,m,H-3)；¹³C-NMR (100 MHz,CDCl₃) δ: 78.0 (C-2),30.1 (C-3),24.6 (C-4),129.9 (C-5),107.4 (C-6),159.0 (C-7),101.5 (C-8),155.8 (C-9),113.8 (C-10),133.5 (C-1′),108.6 (C-2′),146.6 (C-3′),145.3 (C-4′),114.2 (C-5′),119.2 (C-6′),55.2 (7-OCH₃),55.8 (3′-OCH₃)。以上数据与文献报道基本一致^[7]，故鉴定化合物4为 (2S)-7,3′-二甲氧基-4′-羟基黄烷。