巴戟天Morinda officinalis How. 为茜草科（Rubiaceae）巴戟天属Morinda L. 植物。味甘、辛，性微温。具有补肝肾、强筋骨、祛风湿的功效。用于治疗阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨痿软^[1]，是著名的补肾阳药物。《中国药典》2010年版载有巴戟天、巴戟肉、盐巴戟、制巴戟4种炮制品。传统认为生品味辛而温，以补肝肾、祛风湿力强，适用于肾虚兼有风湿之证；盐制巴戟天功专入肾，温而不燥，增强了补肾助阳的作用，多用于阳痿，宫冷不孕等证；制巴戟天甘味更浓，增强补益作用，能补肾助阳、益气养血，多用于脾肾亏损之证^[2]。炮制品功效各异，其根源是炮制前后化学成分的组成和含量比发生了变化。巴戟天主要含有蒽醌类、环烯醚萜类、多糖、寡糖等多种化学成分。蒽醌类化合物具有抗菌、降压、调脂、抗癌、抗病毒、凝血等生物活性^[3]，是巴戟天中种类最多、量最多的化合物。因此研究不同产地巴戟天不同炮制品蒽醌类化合物的HPLC指纹图谱，为不同炮制品质量评价提供依据，并为揭示巴戟天炮制原理奠定科学基础。

Waters2695型高效液相色谱仪，Waters2998检测PDA器；KQ—250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；十万分之一电子分析天平（上海精密仪器科学有限公司）；磷酸（色谱级），甲醇（色谱级），纯净水，其他试剂均为分析纯。

甘草素对照品（购自成都曼思特生物科技有限公司，批号MUST-13050901，质量分数≥98%）；甲基异茜草素、甲基异茜草素-1-甲醚、1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、1,3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、1-甲氧基-2-羟基蒽醌均由本炮制研究室分离纯化得到，质量分数≥98%。从各药材产地先后收集10批巴戟天药材，经辽宁中医药大学药学院翟延君教授鉴定，均为茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How. 的干燥肉质根，见表 1。10批药材按照《全国中药炮制规范》1988版^[4]炮制方法，制得巴戟天、巴戟肉、盐巴戟、制巴戟，10批样品编号为S1～S10。

表 1(Table 1)

表 1 巴戟天药材产地及来源 Table 1 Origins and sources of Morindae Officinalis Radix 编号 产地 购买时间 编号 产地 购买时间 S1 广东普宁 2012.06 S6 广东梅州 2012.07 S2 广西南宁 2012.06 S7 福建漳州 2012.07 S3 福建永定 2012.06 S8 广西百色 2012.07 S4 广东韶关 2012.06 S9 广西梧州 2012.07 S5 广东肇庆 2012.07 S10 福建南靖 2012.07

表 1 巴戟天药材产地及来源 Table 1 Origins and sources of Morindae Officinalis Radix

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱为Ecosil ODS C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱：0.01～5 min，50%甲醇；5～13 min，50%～58%甲醇；13～20 min，58%～58.7%甲醇；20～30 min，58.7%甲醇；30～53 min，58.7%～60%甲醇；53～70 min，60%～68%甲醇；70～73 min，68%～70%甲醇；73～100 min，70%～85%甲醇；体积流量为0.8 mL/min；柱温为28 ℃；进样量为20 μL；检测波长为277 nm。

分别精密称取甘草素、甲基异茜草素、甲基异茜草素-1-甲醚、1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、1,3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、1-甲氧基-2-羟基蒽醌，加甲醇分别制成1 mg/mL对照品储备液，各取50 μL混合，0.45 μm滤膜滤过，即得混合对照品溶液。

精密称取各批次巴戟天炮制品粉末（过60目筛）2 g，置圆底烧瓶内，加氯仿100 mL回流提取2次，每次2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定容至5 mL，0.45 μm微孔滤膜滤过，摇匀，即得。

取同一份供试品溶液，按“2.1”项色谱条件连续测定6次，记录指纹图谱，测得各主要色谱峰的保留时间和峰面积的RSD均小于3%，表明本方法精密度良好。

取同一批药材样品6份，按“2.3”项方法平行制备，按“2.1”项色谱条件测定，记录指纹图谱，测得各主要色谱峰的保留时间和峰面积的RSD均小于3%，表明本方法重复性良好。

取同一份供试品溶液，置室温条件下，按“2.1”项中色谱条件，分别0、2、4、8、12、24、48 h进样测定，记录指纹图谱，测得各主要色谱峰的保留时间和峰面积的RSD均小于3%，表明样品溶液于48 h内保持稳定。

将10批巴戟天药材分别按“2.3”项方法制备，按“2.1”项色谱条件测定并建立HPLC指纹图谱。将所得指纹图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）”，计算各样品指纹图谱与生成的对照图谱的相似性系数。从各批巴戟天的HPLC图谱与相似性系数都可以看出：以蒽醌类成分评价药材质量，S1、S2、S6、S8 4个产地相似度均在0.900以上，成分差异不明显；而S3、S4、S5、S10相似度均低于0.800，成分差异显著。不同产地的同一药材各成分量是有差异的，说明巴戟天具有明显的地域性，优质品种、生态环境、物种资源和栽培条件均可能影响药材品质。还是主要产地的药材为优。结果见表 2、图 1。

表 2(Table 2)

表 2 10批巴戟天药材相似度结果 Table 2 Similarities of 10 batches of Morindae Officinalis Radix 样品 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 R S1 1.000 0.798 0.677 0.549 0.917 0.921 0.947 0.906 0.928 0.461 0.957 S2 － 1.000 0.780 0.891 0.552 0.874 0.653 0.939 0.686 0.826 0.932 S3 － － 1.000 0.695 0.530 0.723 0.561 0.720 0.664 0.579 0.765 S4 － － － 1.000 0.245 0.706 0.354 0.785 0.403 0.908 0.743 S5 － － － － 1.000 0.729 0.981 0.699 0.882 0.116 0.791 S6 － － － － － 1.000 0.780 0.940 0.870 0.674 0.961 S7 － － － － － － 1.000 0.783 0.898 0.229 0.857 S8 － － － － － － － 1.000 0.824 0.701 0.979 S9 － － － － － － － － 1.000 0.249 0.877 S10 － － － － － － － － － 1.000 0.660 R － － － － － － － － － － 1.000

表 2 10批巴戟天药材相似度结果 Table 2 Similarities of 10 batches of Morindae Officinalis Radix

图 1 10批巴戟天HPLC指纹图谱(A) 和共有模式(B)Fig. 1 Fingerprint (A)and common patterns (B) of 10 batches of Morindae Officinalis Radix

本实验建立的具有17个共有峰的不同产地巴戟天蒽醌类成分HPLC共有模式，可确定为巴戟天蒽醌类成分指纹图谱共有模式。将10批巴戟天指纹图谱中的主要共有峰与“2.2”项混合对照品储备液的色谱峰进行对照，鉴别出5个共有成分：1-甲氧基-2-羟基蒽醌、1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、甲基异茜草素-1-甲醚、1,3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、甲基异茜草素。

将10批巴戟肉、盐巴戟、制巴戟分别按“2.3”项方法制备，按“2.1”项色谱条件测定并建立HPLC指纹图谱。实验建立了巴戟肉、盐巴戟、制巴戟的共有模式并指认出巴戟肉、盐巴戟各5个共有成分（分别为1-甲氧基-2-羟基蒽醌、1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、甲基异茜草素-1-甲醚、1,3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、甲基异茜草素），制巴戟6个共有成分（分别为甘草素、1-甲氧基-2-羟基蒽醌、1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、甲基异茜草素-1-甲醚、1,3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、甲基异茜草素）。巴戟天经甘草水炙后，HPLC图谱上新增1个保留时间为13 min的峰面积较大的18号峰，经混合对照品验证，与甘草素的保留时间一致，初步认定该新增成分为甘草素。10批巴戟肉、盐巴戟、制巴戟共有模式及混合对照品指纹图谱，见图 2、3。

图 2 10批巴戟肉(A)、盐巴戟(B) 和制巴戟 (C) 共有模式Fig. 2 Common patterns of 10 batches of morinda pulp (A),salt-steamed M. officinalis (B),and licorice-processed M. officinalis (C)

图 3 混合对照品色谱图Fig. 3 Chromatogram of hybrid reference substances

将各个批次的巴戟天、巴戟肉、盐巴戟、制巴戟所得指纹图谱分别导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）”，计算各个批次炮制品指纹图谱与各自生成的对照图谱的相似性系数。结合指纹图谱，巴戟天不同炮制品间蒽醌类成分差异不大，但其量有变化。制巴戟与其他炮制品相似度差异较大，是由于在炮制过程中使用了辅料甘草和水，新增了成分甘草素。见图 4、表 3。

图 4 巴戟天不同炮制品HPLC指纹图谱Fig. 4 HPLC fingerprintsof different processed M. officinalis

表 3(Table 3)

表 3 各个批次4种炮制品相似度值与其各自对照图谱相比(中位数法) Table 3 Similarities of four different processed M. officinalis in each batch compared with each reference chromatogram (median method) 饮片名称 相似度 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 生巴戟 0.998 0.834 0.973 0.972 0.999 0.985 0.988 0.939 0.978 0.992 巴戟肉 0.999 0.965 0.959 0.928 0.999 0.951 0.978 0.997 0.956 0.990 盐巴戟 0.962 0.995 0.974 0.974 0.996 0.982 0.988 0.994 0.979 0.978 制巴戟 0.621 0.930 0.671 0.595 0.882 0.918 0.933 0.955 0.804 0.865

表 3 各个批次4种炮制品相似度值与其各自对照图谱相比(中位数法) Table 3 Similarities of four different processed M. officinalis in each batch compared with each reference chromatogram (median method)

3 讨论

在所建立的色谱条件下，色谱峰分离比较理想。巴戟天不同炮制品HPLC指纹图谱方法的精密度、稳定性和重复性实验结果表明此法稳定、可靠、重复性好，可以满足指纹图谱分析测试的要求。并通过10批次各炮制品的测定分析，建立了巴戟天4种炮制品的标准指纹图谱，并对不同炮制品间相似度进行了比较分析，且指认了6个指标成分：甘草素、1-甲氧基-2-羟基蒽醌、1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、甲基异茜草素-1-甲醚、1,3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、甲基异茜草素。相对于已有的图谱^[5,6,7,8,9]更加全面地阐述了不同炮制品之间的差异，为不同炮制品质量评价提供依据，并为揭示巴戟天炮制原理奠定科学基础。

本实验从各药材产地先后收集的10批巴戟天药材，通过测试，不同产地巴戟天质量差异显著。巴戟天具有明显的地域性，优质品种、生态环境、物种资源和栽培条件均可能影响药材品质。亟待优化物种资源，并建立简便、可靠的鉴别方法。巴戟天不同炮制品间蒽醌类成分差异不大，但其量有变化，制巴戟由于在炮制过程中使用了辅料甘草和水，出现新增成分甘草素，差异较大。甘草素是甘草中重要的黄酮类物质之一，具有抑菌、抗真菌、抗肿瘤、抗诱变、抗病毒、抗氧化、保肝等广泛的药理作用。对于研究制巴戟的药理作用具有指导意义。

《中国药典》2010年版载有巴戟天、巴戟肉、盐巴戟、制巴戟四种炮制品种。“补汤宜用熟”，“盐制引药入肾经”，“去心者免烦”等传统中医药理论认为，炮制品功效各异。但现今临床使用区分不是很明显，亟需找到巴戟天炮制前后化学成分差异，再结合药理药效，进一步揭示其炮制原理，为临床规范用药提供科学依据。