山楝中1个新的链状二萜

引用本文	doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.13.002

吴海峰, 张婷婷, 吴佳妮, 马国需, 张小坡, 杨峻山, 许旭东. 山楝中1个新的链状二萜[J]. 中草药, 2014, 45(13): 1816-1819. 复制到剪切板

WUHai-feng, ZHANG Ting-ting, WU Jia-ni, MA Guo-xu, ZHANG Xiao-po, YANG Jun-shan, XU Xu-dong. A new linear diterpene from stem barks of Aphanamixis polystachya[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2014, 45(13): 1816-1819. 复制到剪切板

山楝中1个新的链状二萜

吴海峰¹, 张婷婷^1,2, 吴佳妮^1,2, 马国需¹, 张小坡^1,3, 杨峻山¹, 许旭东¹

1. 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所, 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室, 北京 100193;
2. 哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心, 黑龙江哈尔滨 150076;
3. 海南医学院药学院, 海南海口 571101

收稿日期: 2014-5-21;

基金项目： “重大新药创制”科技重大专项“十二五”计划（综合性新药研究开发技术大平台）（2012ZX09301-002-001-026）；中国博士后科学基金（2012M510361）

作者简介：吴海峰（1979- ），男，博士后，助理研究员，研究方向为天然药物化学。

通讯作者：许旭东，男，博士，研究员，博士生导师，主要从事天然药物化学研究与新药研发。Tel：（010）57833296E-mail：xdxu@implad.ac.cn

摘要：目的研究山楝Aphanamixis polystachya茎皮的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、ODS柱色谱及高效液相制备色谱等方法进行分离纯化，根据理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构。结果从山楝茎皮95%乙醇提取物中分离得到3个链状二萜，分别鉴定为（2Z，6E，10E）-12，14，15-三羟基-3，7，11，15-四甲基十六碳三烯酸甲酯（1）、melidianolic acid A（2）、陵水暗罗素H（3）。结论化合物1为新化合物，命名为山楝定；化合物2为首次从山楝属植物中分离得到，化合物3为首次从该植物中分离得到。

关键词：山楝链状二萜山楝定 melidianolic acid A 陵水暗罗素H

A new linear diterpene from stem barks of Aphanamixis polystachya

WUHai-feng¹, ZHANG Ting-ting^1,2, WU Jia-ni^1,2, MA Guo-xu¹, ZHANG Xiao-po^1,3, YANG Jun-shan¹, XU Xu-dong¹

1. Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education, Institute of Medicinal Plant Development, Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100193, China;
2. Research Center on Life Sciences and Environmental Sciences, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China;
3. School of Pharmaceutical Science, Hainan Medical University, Haikou 571101, China

Abstract: Objective To study the chemical constituents from the stem barks of Aphanamixis polystachya. Methods The constituents were isolated and purified by silica gel, Sephadex LH-20, ODS column chromatography, and preparative HPLC, and their structures were elucidated on the basis of their physicochemical properties and spectral data. Results Three diterpenes were obtained from the ethanol extract of the stem bark of A. polystachya and identified as (2Z, 6E, 10E)-methyl 12, 14, 15-trihydroxy-3, 7, 11, 15- tetramethylhexadeca-2, 6, 10-trienoate (1), melidianolic acid A (2), and nemoralisin H (3), respectively. Conclusion Compound 1 is a new linear diterpene named nemoralisin K, compound 2 is isolated from the plants of Aphanamixis Bl., and compound 3 is obtained from the species for the first time, respectively.

Key words: Aphanamixis polystachya (Wall.) R. N. Parker linear diterpenes aphanamidin melidianolic acid A nemoralisin H

山楝Aphanamixis polystachya (Wall.) R. N. Parker为楝科（Meliaceae）山楝属Aphanamixis Bl.的乔木，生长在低海拔地区的杂木林中，主要分布于广西、广东、海南等省^[1]，具有显著的抗肿瘤和抗菌活性^[2]。国内外学者从山楝中分离得到一些具有昆虫拒食活性的柠檬苦素^{[3,4,5,6,7,8]}和倍半萜类化合物^[9]，以及其他的一些次生代谢产物^{[10,11,12,13,14,15]}。本课题组从山楝茎皮的95%乙醇提取物中分离得到一些新的二萜类化合物^[16,17]，进一步分离又得到3个链状二萜，分别鉴定为 (2Z,6E,10E)-12,14,15-三羟基-3,7,11,15-四甲基十六碳三烯酸甲酯 [(2Z,6E,10E)- methyl 12,14,15-trihydroxy-3,7,11,15-tetramethyl-

hexadeca-2,6,10-trienoate，1）、melidianolic acid A（2）、陵水暗罗素H（nemoralisin H，3）。化合物1为未见文献报道的新化合物，命名为山楝定（aphanamidin）；化合物2为首次从该属植物中分离得到，化合物3为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker AVШ 600型核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）；LTQ-Obitrap XL质谱仪（美国Thermo Fisher公司）；Perkin-Elmer 341旋光仪（美国Perkin-Elmer公司）；Shimadzu UV2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；JASCO J—815圆二色光谱仪（日本JASCO公司）；FTIR—8400S红外光谱仪（日本岛津公司）；LUMTECH半制备型高效液相色谱仪（德国KNAUER公司）；ZORAX SB-phenyl半制备色谱柱（250 mm×10 mm，5 μm）（美国Agilent公司)；薄层色谱用硅胶GF₂₅₄和柱色谱用硅胶（青岛海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20凝胶为Pharmacia公司产品；常规试剂均为分析纯。

山楝于2013年8月采于海南屯昌县，由海南医学院药学院田建平教授鉴定为楝科山楝属植物山楝Aphanamixis polystachya (Wall.) R. N. Parker。

2 提取与分离

山楝茎皮3.0 kg，粉碎，用10倍量的95%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，提取液减压回收溶剂后得浸膏80.3 g，分散于水中，依次用石油醚（2 L）和氯仿（2 L）分别萃取3次，回收溶剂后得到氯仿萃取物35.7 g。氯仿萃取物经硅胶（100～200目）柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（100∶0→0∶100）梯度洗脱，合并相同组分，得到为6个流分（Fr. A～F）。流分Fr. D（1.7 g）经硅胶柱色谱，石油醚-丙酮（50∶1→0∶100）梯度洗脱，再经半制备型高效液相色谱分离纯化得到化合物1（2.3 mg）；流分Fr. E（2.1 g）经Sephadex LH-20柱色谱，氯仿-甲醇（1∶1）洗脱，得到3个流分（Fr. E1～E3）。Fr. E2（175 mg）经半制备型高效液相色谱分离纯化得到化合物2（3.2 mg）。流分Fr. F （1.9 g）经过反相中压色谱，甲醇- 水（50∶50→0∶100）梯度洗脱，得到4个流分Fr. F1～F4。Fr. F3（180 mg）经半制备型高效液相色谱分离纯化，得到化合物3（4.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：无色油状物，10%硫酸-乙醇溶液显紫红色。[α]25D -26.0° (c 0.1,MeOH)。IR光谱给出羟基（3 407 cm^-1）和酯羰基（1 707 cm^-1）特征吸收峰。HR-ESI-MS m/z: 391.245 5 [M＋Na]⁺（C₂₁H₃₆O₅Na，计算值391.246 0），从而确定分子式为C₂₁H₃₆O₅。¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD) 谱（表 1）低场区给出3个烯氢信号δ_H5.68 (1H,s),5.43 (1H,t,J = 6.6 Hz) 和5.19 (1H,t,J = 6.6 Hz)，2个连氧次甲基质子信号δ_H 4.21 (1H,t,J = 6.6 Hz) 和3.29 (1H,dd,J = 10.8,1.2 Hz)，1个甲氧基信号δ 3.65 (3H,s)；高场区给出5个甲基单峰信号δ_H 1.12 (3H,s),1.15 (3H,s),1.61 (3H,s),1.64 (3H,s) 和1.90 (3H,s)。¹³C-NMR (150 MHz,CD₃OD) 谱中给出21个碳信号，高场区给出5个甲基信号δ_C 11.2,16.3,25.2,25.6和25.9，5个亚甲基信号δ_C 27.5,27.9,34.5,37.1和40.6，2个连氧亚甲基信号δ_C 78.2和78.3，1个连氧季碳信号δ_C73.6，1个甲氧基信号δ_C 51.4。低场区给出3组烯碳信号δ_C162.4,137.9,136.9,128.2,125.0和116.9，1个羰基信号δ_C 168.6。根据以上数据，推测化合物1为无环链状二萜类化合物，并与melidianolic acid A（2）具有相同的骨架。将1和2的NMR数据比较发现，化合物1除了比2多1个甲氧基外，在碳谱中，C-10～13及C-18数据相差较大，C-12的化学位移由2中的δ_C 36.6向低场位移到1中的δ_C78.2；而在氢谱中，C-12位的亚甲基质子由2中的δ_H 2.06 (1H,t,J = 6.6 Hz) 和δ_H 2.25 (1H,m) 变为1中的次甲基质子δ_H 4.21 (1H,t,J = 6.6 Hz)，化学位移和耦合常数的变化均提示化合物1结构中C-12位连有羟基。在HMBC谱（图 1）中，甲氧基质子信号δ_H3.65和C-1 (δ_C 168.6) 存在远程相关，而C-12上的质子信号与C-10 (δ_C 128.2),C-11 (δ_C 137.9),C-13 (δ_C 37.1),C-14 (δ_C 78.3) 和C-18 (δ_C 11.2) 存在远程相关，从而确证了化合物1中的甲氧基连在羰基上，羟基位于C-12。化合物1的双键构型是通过与2比较和NOESY相关确定的。在NOESY图谱（图 1）中，H-2与20-CH₃，H-6与H-8以及H-10与H-12存在NOE效应，从而可以确定6位和10位的双键为反式以及2位的双键为顺式。C-12和C-14的绝对构型未能确定。结合HSQC、HMBC、NOESY谱图，并参考文献报道^[18,19,20]确定化合物1为 (2Z,6E,10E)-12,14,15-三羟基-3,7,11,15-四甲基十六碳三烯酸甲酯，为新化合物，命名为山楝定，其NMR信号归属见表 1。

图 1 化合物1的结构及¹H-¹H COSY (━)、HMBC (→) 和NOESY (

) 相关 Fig.1 Structures and ¹H-¹H COSY (━),HMBC (→) and NOESY (

) correlations of compound 1

表 1 化合物1的¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD)、¹³C-NMR(150 MHz,CD₃OD) 数据和HMBC相关 Table 1 ¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD),¹³C-NMR (150 MHz,CD₃OD) dataand HMBC correlations of compound 1

碳位	δ_H	δ_C	HMBC (H→C)
1		168.6
2	5.68 (1H,s)	116.9	C-1,3,20
3		162.4
4	2.66 (2H,t,J = 7.8 Hz)	34.5	C-2,3,6
5	2.18 (2H,m)	27.5	C-3,4,6,7
6	5.19 (1H,t,J = 6.6 Hz)	125.0	C-4,5,7,8,19
7		137.0
8	2.03 (1H,m),2.13 (1H,m)	40.6	C-6,7,9,10,19
9	2.03 (1H,m),2.13 (1H,m)	27.9	C-7,8,10 ,11,18
10	5.43 (1H,t,J = 6.6 Hz)	128.2	C-8,9,11 ,12,18
11		137.9
12	4.21 (1H,t,J = 6.6 Hz)	78.2	C-10,11,13 ,14,18
13	1.54 (1H,m),1.79 (1H,m)	37.1	C-11,12,14 ,15
14	3.29 (1H,dd,J = 10.8,1.2 Hz)	78.3	C-12,13,15 ,16,17
15		73.6
16	1.12 (3H,s)	25.2	C-14,15,17
17	1.15 (3H,s)	25.6	C-14,15,16
18	1.61 (3H,s)	11.2	C-10,11,12
19	1.64 (3H,s)	16.3	C-6,7,8
20	1.91 (3H,s)	25.9	C-2,3,4
OCH₃	3.65 (3H,s)	51.4	C-1

化合物2：无色油状物。¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD) 和¹³C-NMR (150 MHz,CD₃OD) 数据见表 2。

表 2 化合物2和3的¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD)和¹³C-NMR数据 (150 MHz,CD₃OD) Table 2 ¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD) and ¹³C-NMR (150 MHz,CD₃OD)dataof compounds 2 and 3

碳位	2		3
碳位	δ_C	δ_H	δ_C	δ_H
1	170.3		168.2
2	116.0	5.67 (1H,s)	116.7	5.79 (1H,s)
3	162.5		161.0 td>
4	33.2	2.65 (2H,t,J = 7.8 Hz)	36.0	2.35 (1H,dd,J = 18.0,4.8 Hz) 2.43 (1H,dd,J = 18.0,12.0 Hz)
5	26.3	2.18 (2H,m)	76.2	5.21 (1H,ddd,J = 12.0,8.4,4.8 Hz)
6	123.6	5.17 (1H,t,J = 6.6 Hz)	123.8	5.39 (1H,brd,J = 8.4 Hz)
7	135.2		144.0
8	39.3	2.00 (1H,m),2.09 (1H,m)	36.8	2.28 (1H,ddd,J = 14.4,11.4,4.8 Hz) 2.13 (1H,ddd,J = 14.4,9.6,6.0 Hz)
9	25.8	2.00 (1H,m),2.09 (1H,m)	33.6	1.56 (1H,m),1.68 (1H,m)
10	124.8	5.17 (1H,t,J = 6.6 Hz)	73.6	3.74 (1H,m)
11	134.6		43.8	2.78 (1H,q,J = 7.2 Hz)
12	36.6	2.08 (1H,m)	197.1
13	29.7	2.19 (1H,m),1.35 (1H,m),1.71 (1H,m)	102.4	5.49 (1H,s)
14	78.1	3.23 (1H,brd,J = 12.0 Hz)	210.4
15	73.4		90.0
16	26.3	1.16 (3H,s)	23.3	1.36 (3H,s)
17	23.2	1.12 (3H,s)	23.2	1.36 (3H,s)
18	15.9	1.62 (3H,s)	14.5	1.24 (3H,d,J = 7.2 Hz)
19	15.9	1.62 (3H,s)	17.0	1.76 (3H,d,J = 1.2 Hz)
20	25.3	1.90 (3H,s)	23.2	2.02 (3H,s)

表 2 化合物2和3的¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD)和¹³C-NMR数据 (150 MHz,CD₃OD) Table 2 ¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD) and ¹³C-NMR (150 MHz,CD₃OD)dataof compounds 2 and 3

以上数据与文献报道基本一致^[20]，故鉴定化合物2为melidianolic acid A。

化合物3：无色油状物。¹H-NMR (600 MHz,CD₃OD) 和¹³C-NMR (150 MHz,CD₃OD) 数据见表 2。以上数据与文献报道基本一致^[21]，故鉴定化合物3为陵水暗罗素H。

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中草药 2014, Vol. 45 Issue (13): 1816-1819	0	PDF