赤芝中1个新的三萜类化合物

引用本文	doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.10.003

于璐, 姚铁, 王萌, 陈丽霞, 邱峰, 王东. 赤芝中1个新的三萜类化合物[J]. 中草药, 2014, 45(10): 1363-1366. 复制到剪切板

YU Lu, YAO Tie, WANG Meng, CHEN Li-xia, QIU Feng, WANG Dong. One new triterpenoid from fruiting body of Ganoderma lucidum[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2014, 45(10): 1363-1366. 复制到剪切板

赤芝中1个新的三萜类化合物

于璐^1,2, 姚铁², 王萌², 陈丽霞², 邱峰² , 王东¹

1. 辽宁中医药大学药学院, 辽宁大连 116600;
2. 沈阳药科大学中药学院, 辽宁沈阳 110016

收稿日期: 2013-12-31;

作者简介：于璐（1988—），女，中药学专业硕士研究生，研究方向为天然药物活性成分研究。E-mail: yulu_1988@sina.com

通讯作者：邱峰（1967- ），男，博士，教授，研究方向为天然药物活性成分研究。E-mail：fengqiu20070118@163.com
王东（1967- ），男，博士，教授，研究方向为中药质量标准研究。E-mail：wdtcm@163.com

摘要：目的研究赤芝Ganoderma lucidum子实体的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制备液相色谱等方法进行分离、纯化，根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构。结果从赤芝子实体80%乙醇提取物醋酸乙酯萃取部位分离得到6个化合物，分别鉴定为赤芝酸B甲酯（1）、赤芝酸K甲酯（2）、赤芝酸A甲酯（3）、赤芝酸F甲酯（4）、2，4，5-三羟基苯甲醛（5）、2，5-二羟基苯甲酸（6）。结论化合物1为新的三萜类化合物，化合物5为首次从灵芝属中分离得到，化合物6为首次从赤芝中分离得到。

关键词：赤芝三萜赤芝酸B甲酯赤芝酸K甲酯赤芝酸A甲酯赤芝酸F甲酯

One new triterpenoid from fruiting body of Ganoderma lucidum

YU Lu^1,2, YAO Tie², WANG Meng², CHEN Li-xia², QIU Feng², WANG Dong¹

1. School of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China;
2. School of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China

Abstract: Objective To study the chemical constituents in the dried fruiting body of Ganoderma lucidum. Methods The constituents were separated and purified by silica gel, Sephadex LH-20 column chromatography, and preparative HPLC. The structures were identified by physicochemical properties and spectral analyses. Results Six compounds were obtained from the ethyl acetate fraction of 80% ethanol extract of G. lucidum and identified as methyl lucidente B (1), methyl lucidente K (2), methyl lucidente A (3), methyl lucidente F (4), 2, 4, 5-trihydroxybenzaldehyde (5), and 2, 5-dihydroxybenzoic acid (6). Conclusion Compound 1 is a new compound, compound 6 is found from the fruiting body of G. lucidum for the first time, and compound 5 is first found from the genus Ganoderma Karst.

Key words: Ganoderma lucidum (Leyss. ex Fr.) Karst. triterpenoids methyl lucidente B methyl lucidente K methyl lucidente A methyl lucidente F

赤芝Ganoderma lucidum (Leyss. ex Fr.) Karst. 为多孔菌科真菌的干燥子实体^[1]，始载于《神农本草经》，列为上品，具有补中益气、扶正固本、延年益寿等功效。临床上主要用于治疗心神不宁、失眠心悸、肺虚咳喘、虚劳短气等疾病。目前，从赤芝中分离得到的化合物类型主要为三萜、甾体、多糖、黄酮等成分^[2]。本研究对赤芝子实体80%乙醇提取物醋酸乙酯萃取部位的化学成分进行了研究，从中得到了6个化合物，分别鉴定为赤芝酸B甲酯（methyl lucidente B，1）、赤芝酸K甲酯（methyl lucidente K，2）、赤芝酸A甲酯（methyl lucidente A，3）、赤芝酸F甲酯（methyl lucidente F，4）、2,4,5-三羟基苯甲醛（2,4,5-trihydroxybenzaldehyde，5）、2,5-二羟基苯甲酸（2,5-dihydroxybenzoic acid，6）。其中，化合物1为新的三萜类化合物，化合物5为首次从灵芝属中分离得到，化合物6为首次从赤芝中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker ARX—600型核磁共振谱仪（德国Bruker公司）；Aglient 6520 Q-TOF-MS高分辨质谱仪（美国Aglient公司）；Waters 600高效液相色谱仪（美国Waters公司）；YMC制备型色谱柱（250 mm×10 mm，5 μm）。柱色谱用硅胶（200～300、100～200目）及薄层色谱用硅胶GF₂₅₄（青岛海洋化工厂）；液相色谱用试剂为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

药材由辽宁省食品药品检验所提供，经辽宁省食品药品检验所中药室王维宁教授鉴定为赤芝Ganoderma lucidum (Leyss. ex Fr.) Karst的干燥子实体。

2 提取与分离

赤芝干燥子实体约9kg，切片后用10倍量80%乙醇回流提取2 h，滤过，减压浓缩至无醇味，得粗提物240 g。用适量蒸馏水混匀粗提物，依次用环己烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取，减压回收溶剂，得醋酸乙酯萃取物130 g。醋酸乙酯萃取物（130 g）经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脱。二氯甲烷-甲醇（50∶1）洗脱流分（30 g）经硅胶柱色谱分离，石油醚-醋酸乙酯（100∶0→0∶100）梯度洗脱。石油醚-醋酸乙酯（5∶1）洗脱部分经制备液相色谱（乙腈-水50∶50）分离得到化合物1（5 mg）、2（5 mg）、3（30 mg）、4（50 mg）。二氯甲烷-甲醇（40∶1）洗脱流分（25 g）经硅胶柱色谱分离，石油醚-醋酸乙酯（100∶0→0∶100）梯度洗脱，再经Sephadex LH-20、制备液相色谱（甲醇-水35∶65）分离得到化合物5（21 mg）、6（11 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末（二氯甲烷），[α]20D＋140.83°(c 0.08,CHCl₃)；(nm): 233 (2.34)；IR(cm^-1): 3 358,2 964,2 921,2 851,1 731,1 715,1 679。HR-ESI-MS m/z: 487.270 6 [M－H]^- (计算值487.270 1，C₂₈H₃₉O₇)。结合¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) 和¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃) 谱，推测其分子式为C₂₈H₄₀O₇。化合物1的NMR图谱与化合物赤芝酸B^[3]的相似，不同之处在于化合物1的¹H-NMR中多出δ_H3.65 (s) 甲氧基质子信号，在¹³C-NMR中多出δ_C 51.9甲氧基碳信号。提示赤芝酸B的24位的羧基可能发生甲酯化。在HMBC谱中这个推测得到了确证，δ_H3.65 (-OCH₃) 和δ_C174.3 (C-24) 有远程相关，证明甲氧基链接在24位。NOESY谱（图 1）中，可见δ_H 4.80 (1H,ddd,J = 8.6,8.6,4.1 Hz,H-7) 与δ_H 1.45 (1H,dd,J = 13.7,1.7 Hz,H-5) 相关，证明7-OH为β构型。同时可见δ_H 4.34 (1H,s,H-12) 与δ_H2.44 (1H,td,J = 9.8,5.5 Hz,H-17) 相关，证明12-OH为β构型。灵芝中的三萜类化合物多为羊毛脂烷型四环三萜，属于羊毛脂烷高度氧化的衍生物，其10、13、14位的甲基分别为β、β、α构型，C-20为R构型，A/B、B/C、C/D环均为反式。

图 1 化合物1 NOESY相关图 Fig. 1 Key NOESY correlations of compound 1

通过上述光谱学手段及羊毛脂烷四环三萜的生源特点，确定化合物1的结构为methyl 20 (R) 7β,12β-dihydroxy-4,4,14α-trimethyl-3,11,15-trioxo- 5α-chol-8-en-24-oate，命名为赤芝酸B甲酯，见图 2。化合物1的数据归属见表 1。

图 2 化合物1结构 Fig. 2 Structure of compound 1

表 1 化合物1～4和赤芝酸B的¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃)和¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃)数据 Table 1 ¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) and ¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃) data of compound 1—4 and lucidente B

碳位	1		δ_C
碳位	δ_C	δ_H	赤芝酸B	2	3	4
1	35.4	α-1.32 (1H,m)	35.1	37.5	35.9	34.8
1	35.4	β-2.77 (1H,ddd,J = 13.2,7.0,4.1 Hz)	35.1	37.5	35.9	34.8
2	34.5	α-2.38 (1H,ddd,J = 15.2,6.5,4.1 Hz)	34.3	34.2	34.5	34.0
2	34.5	β-2.61 (1H,ddd,J = 15.9,11.1,7.0 Hz)	34.3	34.2	34.5	34.0
3	219.5		215.7	215.0	216.9	215.6
4	47.2		46.9	47.1	47.0	47.2
5	49.7	1.45 (1H,dd,J = 13.7,1.7 Hz)	49.4	51.2	49.1	51.1
6	28.0	α-2.15 (1H,ddd,J = 13.4,8.2,1.6 Hz)	27.7	33.9	27.9	37.5
6	28.0	β-1.76 (1H,td,J = 13.6,9.1 Hz)	27.7	33.9	27.9	37.5
7	66.0	4.80 (1H,ddd,J = 8.6,8.6,4.1 Hz)	65.8	198.8	66.5	199.7
8	158.6		158.1	148.9	158.1	149.9
9	140.6		140.1	147.7	141.4	147.1
10	38.1		37.8	39.4	38.5	39.5
11	199.9		199.6	202.0	197.9	199.7
12	78.6	4.34 (1H,s)	78.3	78.0	50.4	49.1
13	51.8		51.6	49.5	45.1	44.0
14	60.4		60.2	58.1	59.5	57.3
15	217.5		217.1	206.7	218.2	207.6
16	37.8	α-2.65 (1H,dd,J = 19.4,8.6 Hz)	37.6	37.7	41.3	40.1
16	37.8	β-2.28 (1H,dd,J = 19.3,9.4 Hz)	37.6	37.7	41.3	40.1
17	46.8	2.44 (1H,td,J = 9.8,5.5 Hz)	46.6	45.9	46.5	45.3
18	12.3	0.81 (3H,s)	12.1	10.9	17.9	16.2
19	18.5	1.41 (3H,s)	18.3	18.8	18.4	18.8
20	31.8	1.92 (1H,m)	31.5	30.4	35.4	35.6
21	20.8	1.11 (3H,d,J = 6.7 Hz)	20.5	20.2	18.2	18.5
22	29.9	α-1.26 (1H,m)	29.5	32.0	30.9	30.9
22	29.9	β-1.83 (1H,m)	29.5	32.0	30.9	30.9
23	32.2	α-2.29 (1H,m)	31.8	32.8	31.1	31.2
23	32.2	β-2.39 (1H,m)	31.8	32.8	31.1	31.2
24	174.3		178.7	174.3	174.1	174.1
25	26.5	1.10 (3H,s)	26.3	27.7	27.2	27.8
26	21.4	1.10 (3H,s)	21.2	20.7	21.0	20.5
27	23.5	1.42 (3H,s)	23.3	20.1	24.9	21.1
OCH₃	51.9	3.65 (3H,s)		51.8	51.9	51.9

化合物2：白色粉末（二氯甲烷），ESI-MS m/z: 485 [M－H]^-。¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) δ: 0.66 (3H,s,H-18),1.36 (3H,s,H-19),1.10 (3H,d,J = 7.1 Hz,H-21),1.11 (3H,s,H-25),1.12 (3H,s,H-26),1.73 (3H,s,H-27),3.64 (3H,s,24-OCH₃)；¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃) 数据见表 1。以上数据与文献报道一致^[4]，故鉴定化合物2为赤芝酸K甲酯。

化合物3：白色粉末（二氯甲烷），ESI-MS m/z: 471 [M－H]^-。¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) δ: 0.98 (3H,s,H-18),1.24 (3H,s,H-19),0.95 (3H,d,J = 6.5 Hz,H-21),1.10 (3H,s,H-25),1.08 (3H,s,H-26),1.32 (3H,s,H-27),3.66 (3H,s,24-OCH₃)；¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃) 数据见表 1。以上数据与文献报道一致^[5]，故鉴定化合物3为赤芝酸A甲酯。

化合物4：黄色晶体（甲醇），ESI-MS m/z: 469[M－H]^-。¹H-NMR (600 MHz,CDCl₃) δ: 0.83 (3H,s,H-18),1.25 (3H,s,H-19),0.93 (3H,d,J = 6.5 Hz,H-21),1.09 (3H,s,H-25),1.11 (3H,s,H-26),1.62 (3H,s,H-27),3.65 (3H,s,24-OCH₃)；¹³C-NMR (150 MHz,CDCl₃) 数据见表 1。以上数据与文献报道一致^[5]，故鉴定化合物4为赤芝酸F甲酯。

化合物5：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 153 [M－H]^-。¹H-NMR (600 MHz,DMSO-d₆) δ: 10.33 (1H,s，H-2),6.35 (1H,s,H-3),8.86 (1H,s,H-4),10.26 (1H,s,H-5),6.97 (1H,s,H-6),9.88 (1H,s,-CHO)；¹³C-NMR (150 MHz,DMSO-d₆) δ: 114.0 (C-1),139.1 (C-2),103.3 (C-3),156.9 (C-4),154.6 (C-5),114.2 (C-6),190.1 (-CHO)。以上数据与文献报道一致^[6]，确定化合物5为2,4,5-三羟基苯甲醛。

化合物6：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 153 [M－H]^-。¹H-NMR (600 MHz,DMSO-d₆) δ: 6.76 (1H,d,J = 8.8 Hz,H-3),6.94 (1H,dd,J = 8.8,3.0 Hz,H-4),7.15 (1H,d,J = 3.0 Hz,H-6)；¹³C-NMR (150 MHz,DMSO-d₆) δ: 113.0 (C-1),149.3 (C-2),114.6 (C-3),123.4 (C-4),154.1 (C-5),117.6 (C-6),171.7 (-COOH)。以上数据与文献报道一致^[7]，故鉴定化合物6为2,5-二羟基苯甲酸。

4 讨论

三萜类成分是灵芝中主要有效成分之一，目前从灵芝中分离得到的三萜类化合物有灵芝酸、灵芝醛、灵芝酮及甲酯化的灵芝酸类化合物等，例如methyl ganoderate I、methyl 8β,9α-dihydroganoderate J^[8]、灵芝酸B甲酯、赤芝酸C甲酯、赤芝酸A甲酯^[9]等。而对于甲酯化的灵芝酸类化合物，对其是否是人工产物少有探讨。

本实验采用二氯甲烷为提取溶剂，采用超声提取的方法对原药材进行了提取，在与化合物1同样色谱条件下对其进行了HPLC分析，但分析结果尚不理想，考虑可能是化合物1（5 mg）在原药材（9 kg）中的量较低，其信号太弱未被检测到。

但是有文献报道^[10]在对不同产地赤芝的HPLC指纹图谱评价研究中，采用三氯甲烷为提取溶剂，在得到的HPLC图谱中，25 min前为灵芝酸类，25 min后为甲基化的灵芝酸类物质；Fatmawati等^[11]亦在赤芝的三氯甲烷提取物中分离得到methyl ganoderate A和methyl ganoderenate A，证明这些甲基化的灵芝酸类物质是赤芝中的天然产物。

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中草药 2014, Vol. 45 Issue (10): 1363-1366	0	PDF