蓬子菜Galium verum L.为茜草科（Rubiaceae）拉拉藤属（Galium L.）药用植物蓬子菜的干燥全草，来源广泛^[1]。蓬子菜具有行血散瘀、消肿祛瘀等功效，因其含有大量黄酮类成分，故临床上常用于治疗心脑血管疾病及周围血管病，且疗效显著^[2]。研究表明，香叶木苷是蓬子菜治疗静脉系统疾病的主要活性成分，可全面作用于3大血管回输系统，能有效改善静脉通透性，增加静脉张力，治疗静脉炎症^[3]。本实验以香叶木苷药理作用为基础，制备大鼠急性血瘀模型，观察香叶木苷对大鼠血液流变学的影响；同时，通过考察血液中相关炎症因子的水平变化，初步探讨其治疗急性血瘀的作用机制，为蓬子菜的临床使用提供药效学和安全性依据。

SPF级Wistar雄性大鼠，体质量（200±20）g，购于黑龙江中医药大学实验动物中心，合格证号SCXK（黑）2012-005。

香叶木苷，本实验室自制，经高效液相色谱法测定，质量分数≥90%。所用药材购于黑龙江省玉泉镇，经黑龙江中医药大学王振月教授鉴定为茜草科拉拉藤属植物蓬子菜Galium verum L.，入药部位为其干燥全草。阿司匹林泡腾片（阿斯利康制药有限公司，批号H32026199）；盐酸肾上腺素注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批号H12020526）；水合氯醛（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20130325）；大鼠C反应蛋白（CRP）ELISA试剂盒（上海森雄科技实业有限公司）；大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）ELISA试剂盒（北京欣博盛生物技术有限公司）。

Z30-全自动血液流变测试仪（南京志伦科技有限公司）；Roller20-全自动血沉仪（北京现代威士达医疗器械有限公司）；KDC-160HR-离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；SpectraMax Plus384-连续光谱扫描式酶标仪（美国Molecular Devices公司）。

Wistar雄性大鼠随机分成6组：对照组，模型组，香叶木苷低、中、高剂量（45、90、180 mg/kg）组，阿司匹林（阳性药，25 mg/kg）组，每组10只。ig给药，每天给药1次，连续给药14 d，对照组和模型组给予等量生理盐水。

于第13天给药后，除对照组外，各组动物sc 0.8 mg/kg盐酸肾上腺素2次，2次之间间隔4 h，第2次注射之前，将大鼠置于0～2 ℃冰水中浸泡5 min，造成大鼠急性血瘀模型。禁食12 h后，于第14天取血前30 min ig给药1次。

以10%的水合氯醛3 mL/kg ip麻醉大鼠，仰卧位固定，于下腔静脉处，用肝素钠真空采血管进行快速采血，并轻轻颠倒混匀，并于4 h内检测血液流变学指标。将采血管于室温下静置30 min，2 500 r/min离心20 min，取上清血浆分装于无菌EP管中（每管115～215 μL），置于−80 ℃冰箱储存备用，用于各炎症因子的检测。

将处理后的样本放入血液流变测试仪、全自动血沉仪检测全血黏度、血浆黏度、血沉、红细胞比容及红细胞聚集指数。

采用ELISA法，检测血浆样本中CRP、TNF-α和IL-1β水平，所有操作严格按说明书进行。

数据均用x±s表示，采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。单因素方差分析进行组间比较，方差齐时采用LSD检验，方差不齐时采用Dunnett’s T3检验。

与对照组比较，模型组血流变参数均发生显著变化（P＜0.01），证明大鼠急性血瘀模型制备成功。而香叶木苷各组均能不同程度降低全血黏度、血浆黏度、红细胞比容、血沉及红细胞聚集指数，能有效改善血瘀模型大鼠血液流变学，抑制血细胞聚集。结果见表 1、2。

表 1(Table 1)

表 1 香叶木苷对全血黏度及血浆黏度的影响 Table 1 Effect of diosmin on whole blood viscosity and plasma viscosity (x±s,n = 10) 组别 剂量/(mg∙kg −1) 全血黏度/(mPa∙s) 血浆黏度/(mPa∙s) 高切 (200 s −1) 中切 (30 s −1) 低切 (3 s −1) 对照 - 4.35±0.20 5.11±0.21 9.58±1.11 1.28±0.04 模型 - 6.39±0.59 ## 7.90±0.78 ## 14.65±1.82 ## 1.60±0.09 ## 香叶木苷 45 4.66±0.17 5.67±0.22 ** 11.62±0.69 ** 1.56±0.05 90 4.52±0.47 ** 5.59±1.09 ** 13.03±1.93 1.54±0.09 180 5.24±0.29 5.98±0.09 ** 13.72±0.69 1.57±0.04 阿司匹林 25 4.72±0.62 5.51±0.11 ** 11.96±1.56 1.55±0.05 与对照组比较：##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 ##P < 0.01 vs control group; **P < 0.01 *P < 0.05 vs model group

表 1 香叶木苷对全血黏度及血浆黏度的影响 Table 1 Effect of diosmin on whole blood viscosity and plasma viscosity

表 2(Table 2)

表 2 香叶木苷对红细胞比容、血沉及红细胞聚集指数的影响 Table 2 Effect of diosmin on hematocrit,erythrocyte sedimentation rate,and erythrocyte aggregation index (x±s, n = 10) 组别 剂量/(mg∙kg −1) 红细胞比容 血沉/(mm∙h −1) 红细胞聚集指数 对照 - 0.50±0.01 1.36±0.50 7.32±0.91 模型 - 0.53±0.01 ## 2.96±0.50 ## 10.46±0.71 ## 香叶木苷 45 0.51±0.01 ** 1.30±0.48 ** 8.08±0.52 ** 90 0.50±0.01 ** 1.50±0.84 ** 8.00±0.98 ** 180 0.52±0.01 2.18±0.75 8.34±0.41 ** 阿司匹林 25 0.51±0.01 ** 1.56±0.78 ** 7.17±0.62 ** 与对照组比较：##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 ##P < 0.01 vs control group; **P < 0.01 *P < 0.05 vs model group

表 2 香叶木苷对红细胞比容、血沉及红细胞聚集指数的影响 Table 2 Effect of diosmin on hematocrit,erythrocyte sedimentation rate,and erythrocyte aggregation index

与对照组比较，模型组所释放的CRP、TNF-α和IL-1β水平显著升高（P＜0.05、0.01），表明在制备血瘀模型的过程中，血管内皮损伤，发生急性炎症，CRP水平升高，激发分泌细胞因子TNF-α，并引起IL-1β的释放，从而影响血管内皮活性，加速血瘀过程的发展。给药后，香叶木苷各剂量组均能显著降低CRP及TNF-α水平，中、高剂量组降低IL-1β水平（P＜0.05、0.01），保护血管内皮，抑制促炎因子表达，从而发挥抗炎作用。结果见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 香叶木苷对大鼠血管炎症的影响 Table 3 Effect of diosmin on inflammation of vein (x±s, n = 10) 组别 剂量/(mg∙kg −1) CRP/(µg∙mL −1) TNF-α/(pg/mL −1) IL-1β/(ng/mL −1) 对照 - 2.14±1.46 34.05±22.20 0.19±0.04 模型 - 4.35±2.38 # 55.21±14.78 ## 0.29±0.09 # 香叶木苷 45 2.14±1.11 45.01±17.39 0.21±0.08 90 1.77±0.97 ** 39.58±23.12 0.17±0.05 180 1.65±0.99 ** 39.48±15.20 ** 0.15±0.06 ** 阿司匹林 25 2.25±1.51 48.24±13.72 0.16±0.07 与对照组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 #P < 0.05 ##P < 0.01 vs control group; **P < 0.01 *P < 0.05 vs model group

表 3 香叶木苷对大鼠血管炎症的影响 Table 3 Effect of diosmin on inflammation of vein

依据中医理论中急性血瘀证的病因“暴怒”和“寒邪”，选择本实验所需的动物模型，采用sc大剂量盐酸肾上腺素模拟暴怒时的机体状态，并结合冰水浴模拟寒邪侵袭。肾上腺素为α、β受体兴奋剂，加之冷刺激，可强烈收缩外周血管，增大心脏负荷，降低心功能，从而使血液运行发生障碍^[4]。这种血瘀造模方法，导致急性的应激状态。

蓬子菜可有效治疗静脉系统疾病，本实验初步探讨蓬子菜中的香叶木苷抗急性血瘀，以及治疗静脉炎症的作用，因此取血部位为下腔静脉，并以带有负压的肝素钠真空采血管进行快速采血，保障采血速度，避免发生溶血及凝血。

损伤的血管内皮细胞，在多因素刺激下，可释放多种前炎症因子，并造成微循环血管功能异常，从而导致血液流变性异常。同时，血瘀与炎症能够相互影响，在血瘀过程中生成的物质能引发炎症，而炎症又能促进血液高凝^[5]。

血液流变学是判断血瘀证的公认指标，也是开发治疗心血管疾病、抗血栓及改善微循环药物的重要参考指标。实验结果证明，蓬子菜活性成分香叶木苷能有效改善血瘀模型动物的各血流变参数，有效治疗血瘀证。

在急性血瘀发生及发展过程中，会激发许多炎症因子的表达，且与血瘀-炎症相关的信号通路多而复杂，本实验选取其中标志性指标进行检测。CRP异常是出现血瘀证的一个重要信号，CRP水平升高，能激发细胞因子TNF-α分泌，并引起IL-1β的释放^[6]，从而进一步参与炎症并影响血管内皮活性，参与血瘀过程的发展。香叶木苷能降低血瘀大鼠血液中CRP、TNF-α、IL-1β的水平，抑制炎症发生和血瘀发展，治疗静脉炎症，改善微循环。本实验对蓬子菜中的香叶木苷抗急性血瘀作用及机制进行了初步探讨，在后续的实验中还将多通路、多层次对该机制进行深入研究。