人参为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey. 的干燥根，红参是人参经过高温炮制后得到的加工品。人参具有抗氧化、抗衰老、提高机体免疫力及护心保肝等药理作用。乙醇在体内主要经肝脏代谢，其代谢物乙醛及代谢过程中产生的活性氧会对肝脏造成损害，长期饮酒和过量饮酒，会造成乙醇在体内堆积，对肝脏造成不同程度的损伤，损伤程度从轻到重表现为脂肪肝、肝纤维、肝硬化^[1]，引起机体内天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）等生化指标水平增高。人参皂苷是红参的主要活性成分，《中国药典》和国家标准均以人参皂苷为红参的考核指标。近年来，有研究发现红参具有保肝功能^{[2, 3]}，本文旨在研究人参皂苷提取物对小鼠酒精性肝损伤的防治作用，揭示作用机制，为红参的临床应用提供依据。

Infinite M200pro酶标仪（瑞士帝肯）；Lecia- DM2500微生物显微镜，德国Lecia公司。

鲜人参，为5年生，产自吉林省抚松县，由长春中医药大学王淑敏教授鉴定为五加科人参属人参Panax ginseng C. A. Meyer干燥根；联苯双酯滴丸（浙江万邦药业有限公司，批号A02130407）；56°北京红星二锅头酒（北京红星二锅头酒厂，批号20140224）；ALT试剂盒、AST试剂盒、MDA试剂盒、GSH试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20150112）；TG试剂盒（浙江东瓯生物工程有限公司，批号2015040104）。

清洁级ICR雄性小鼠，体质量20～22 g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK-（吉）2014-005。

称取鲜人参约300 g，用纱布包好，放入蒸参箱，在60 min升温到100 ℃后蒸制6 h，蒸制完毕后置于50 ℃烘干箱内烘干。将烘干后的红参研碎成粉，过80目筛。

称取红参粉末，加入8倍量80%乙醇，超声提取（500 W，100 Hz）30 min，抽滤，滤渣加入6倍量乙醇超声30 min，滤过，合并滤液，40 ℃水浴蒸干，加入适量水溶解，即得人参皂苷提取物（人参总皂苷含量为3.84%），4 ℃下保存待用。

取清洁级ICR雄性小鼠72只，正常喂养5 d后，将其按体重平均分为6组，分别为对照组、阳性组（联苯双酯）、模型组及GE高、中、低剂量组，每组12只。

给药剂量按照成人日均用药量与小鼠给药量进行剂量换算，除对照组每天ig等体积的蒸馏水外，其余各组ig给予56°白酒，给药剂量为0.2 mL/20 g，1次/d，造模5 d。给药组给予GE，低、中、高剂量组每日分别给予0.38、0.75、1.13 g/kg生药材浓度的GE，阳性对照组给予联苯双酯0.90 mg/kg，给药后1 h给予56°白酒，1次/d，连续30 d。小鼠给药期间每周进行称质量并记录，并观察小鼠的毛色、饮食、行为及死亡情况。

处理前禁食12 h，给药及白酒1 h后，小鼠摘眼球取血，常温静置后待其凝固，3 000 r/min离心15 min，取血清，−80 ℃保存待测。采血后，迅速剖取肝脏，用冷生理盐水洗净，滤纸吸湿后，称取肝脏湿重，计算肝脏系数（肝脏系数＝肝质量/体质量）。取肝右叶做HE染色，肝左叶制备10%肝匀浆，匀浆制备方法：用冷生理盐水冲洗肝脏至无血色，称质量，加入9倍量冷生理盐水机械匀浆，将匀浆液2 500 r/min离心20 min，4 ℃，取上清。

每组取同等样本量的小鼠血清及肝匀浆，严格按照试剂盒操作方法进行小鼠血清ALT、AST、TG、肝匀浆MDA、GSH含量测定。

取小鼠肝脏右叶置于10%中性福尔马林中进行固定，经一定梯度浓度的乙醇脱水、石蜡包埋、切片进行HE染色，用显微镜观察肝组织病理变化。

应用SPSS 19.0统计软件进行统计分析，采用单因素方差分析，组间比较采用最小显著差数法（LSD），数据均以表示。

试验期间，GE中剂量组及阳性组死亡小鼠4只，其余各组死亡小鼠2只。对照组小鼠精神状态正常，毛色正常，模型组小鼠毛色较差，造模期间，ig给予白酒后20 min左右，出现醉酒状态，不自主行为增多，爬行不稳，有些小鼠呈现昏睡状态，给药组小鼠给予白酒20 min后，醉酒状态较模型组稍好。

各组小鼠体质量无统计学差异，与对照组相比，模型组小鼠肝质量增大（P＜0.05），表明长期饮酒和乙醇的堆积造成小鼠肝脏受损肿大，质量增加可能与肝脏内脂肪堆积或其他物质生成有关。给药组小鼠肝脏系数相较模型组有明显降低（P＜0.05），GE高、中、低剂量组均有降低，但组间变化趋势不明显，GE对酒精引起的小鼠肝脏受损肿大有一定的缓解作用。见表 1。

表 1 (Table 1)

表 1 不同剂量GE对小鼠体质量、肝质量及肝脏系数影响 (x ± s) Table 1 Effect of different doses of GE on body ,liver weights,and liver index in mice with alcoholic- induced liver injury (x ± s) 组别 剂量/(g∙kg−1) n 体质量/g 肝质量/g 肝脏系数% 对照 — 10 34.50±4.62 1.37±0.21 3.96±0.13 模型 — 10 34.55±2.69 1.59±0.12 4.62±0.19** GE 0.38 10 35.28±4.02 1.59±0.29 4.41±0.43# 0.75 8 36.92±3.28 1.50±0.21 4.14±0.31## 1.13 10 33.90±4.20 1.41±0.12# 4.34±0.46# 联苯双酯 9×10−4 8 32.90±2.90 1.36±0.18# 4.12±0.34##

表 1 不同剂量GE对小鼠体质量、肝质量及肝脏系数影响 (x ± s) Table 1 Effect of different doses of GE on body ,liver weights,and liver index in mice with alcoholic- induced liver injury (x ± s)

与对照组相比，模型组小鼠血清ALT（P＜0.05）、AST（P＜0.05）、TG（P＜0.01）含量明显升高；与模型组相比，GE高、中剂量组ALT含量降低（P＜0.01），GE各剂量组均能降低AST和TG水平（P＜0.01），联苯双酯组可明显降低ALT、AST水平。但GE高、中、低剂量组组间呈现的量效关系不明显。长期白酒灌胃会造成小鼠血清ALT、AST、TG含量增高，GE可明显降低血清TG的含量，对ALT、AST含量降低有一定作用，说明GE对小鼠酒精性肝损伤有一定保护作用。见表 2。

表 2 (Table 2)

表 2 不同剂量GE对小鼠血清ALT、AST和TG水平影响 (x ± s) Table 2 Effect of different doses of GE on levels of ALT,AST,and TG in serum of mice with alcoholic- induced liver injury (x ± s) 组别 剂量/(g∙kg−1) n ALT/(U∙L−1) AST/(U∙L−1) TG/(mmol∙L−1) 对照 — 10 18.14±5.83 68.02±8.06 0.25±0.05 模型 — 10 37.65±5.54 82.06±13.9 0.37±0.05** GE 0.38 10 26.39±8.09##* 62.08±7.30##* 0.17±0.03## 0.75 8 24.69±1.81##* 78.00±7.74##* 0.22±0.03## 1.13 10 38.80±8.80 72.26±16.09##* 0.18±0.03## 联苯双酯 9×10−4 8 25.98±8.73# 54.15±21.14## 0.19±0.03## 与对照组比较：P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.05，##P＜0.01；下表同; P<0.05,**P<0.01 vs control group; #P<0.05,##P<0.01 vs model group; same as below

表 2 不同剂量GE对小鼠血清ALT、AST和TG水平影响 (x ± s) Table 2 Effect of different doses of GE on levels of ALT,AST,and TG in serum of mice with alcoholic- induced liver injury (x ± s)

小鼠肝匀浆MDA含量结果显示，模型组小鼠MDA含量高于对照组（P＜0.01），GE各剂量组MDA含量低于模型组（P＜0.01）。模型组GSH含量低于对照组（P＜0.01），GE各剂量组GSH含量高于模型组（P＜0.01），GE可降低MDA含量，增加GSH含量，说明其可在一定程度上抵御肝脏内的氧化作用，从而保护肝脏进一步损伤。见表 3。

表 3 (Table 3)

表 3 不同剂量GE对小鼠肝内MDA和GSH水平影响(x ± s) Table 3 Effect of different doses of GE on levels of MDA and GSH in liver tissue of mice with alcoholic- induced liver injury (x ± s) 组别 剂量/(g∙kg−1) n MDA/(μmol∙g−1) GSH/(μmol∙g−1) 对照 — 10 2.99±0.56 8.41±1.28 模型 — 10 4.40±0.65** 3.50±0.43** GE 0.38 10 2.96±0.92## 10.21±1.29## 0.75 8 3.14±0.74## 10.25±1.81## 1.13 10 3.68±0.77 10.63±1.89## 联苯双酯 9×10−4 8 2.76±0.46## 6.43±2.01##

表 3 不同剂量GE对小鼠肝内MDA和GSH水平影响(x ± s) Table 3 Effect of different doses of GE on levels of MDA and GSH in liver tissue of mice with alcoholic- induced liver injury (x ± s)

正常组肝细胞结构正常，肝细胞条索排列整齐；模型组肝细胞变性坏死，有炎性细胞浸润，脂泡小而密集；联苯双酯组炎性细胞浸润和坏死程度减轻，GE中、高组也可见一定的炎性细胞浸润，但程度较模型组轻，小而密集的脂泡明显减少，见图 1。

图 1

Fig. 1

图 1 各组小鼠肝脏病理学观察（HE染色） Fig. 1 Histopathological observation on hepatic tissue of mice in each group (HE staining)

本研究采用长期、固定剂量的酒精灌胃造模方法^{[4, 5]}来模拟长期饮酒的状态，形成慢性酒精性肝损伤模型。通过实验观察，长期灌胃白酒的小鼠，不自主行为增多，会出现嗜睡、四肢无力、食欲减退、呼吸衰竭等状态，模型组小鼠的生化指标也表明长期白酒灌胃引起的肝功能的损伤，长期、固定剂量的酒精灌胃引起小鼠慢性酒精性肝损伤是可行的。

ALT、AST是检验肝脏损伤的一个重要指标，正常血清里ALT、AST含量极少，只有在肝细胞死亡破裂后肝细胞内的ALT、AST才会释放入血，血清中ALT、AST含量增加说明肝脏出现炎症。乙醇经肝脏代谢过程中产生的活性氧会直接对肝细胞造成氧化损伤^[6]，形成过脂质氧化产物——MDA，其含量是细胞氧化损伤的一个重要检测指标。模型组小鼠肝组织MDA含量高于正常组，GSH含量低于正常组，肝脏长期的酒精代谢会造成肝脏内氧化物质的增多，还原物质减少，造成肝细胞氧化损伤。同时肝脏脂质过氧化会产生脂肪酸的氧化，影响肝脏微管功能，致使肝脏内TG代谢障碍，长期的乙醇摄入，不仅增大了小鼠的肝质量、肝脏系数，也致使模型组小鼠较正常组小鼠TG的量明显增多。

红参醇提液中的成分主要是人参皂苷，红参中含有20多种人参皂苷，如人参皂苷Re、Rb₁、Rh₁、Rh₂、Rd等，其人参皂苷Rg₃、Rg₂、Rh₁的含量高于白参^[7]。研究发现人参皂苷20 (S)-人参皂苷Rg₃可明显抑制肝损伤小鼠ALT、AST的酶活性^[8]，人参皂苷Rb₁可明显降低大鼠肝微粒体细胞色素P450酶与NADPH-P450的活性^[9]，人参皂苷Rh₂可抑制肝纤维DNA的合成^[10]等。通过本研究发现，GE可明显降低长期白酒灌胃小鼠血清中TG的含量，对降低其ALT、AST作用不明显，对抑制肝脏内MDA的含量，增加GSH含量有一定作用，对长期饮酒所造成的肝损伤有一定的预防和保护作用，从而阻止肝脏向纤维化进一步恶化。GE中、高剂量组与模型组的病理观察比较，GE可在一定程度上抑制肝细胞炎症发生，但抑制效果不明显，但可以显著减少小而密集的脂肪泡数量，GE中、高剂量组可明显抑制肝脏内的泡样损伤。GE可能主要通过抑制体内活性氧对肝脏脂质过氧化、减少肝脏脂肪堆积这一途径来避免肝脏受损。

综合以上结果，人参皂苷提取物对小鼠酒精性肝损伤有一定的保护作用，以中、高剂量效果最好，但红参保肝机制尚不明确，此研究为红参的保健开发和治疗酒精性肝损伤提供了一定的参考。