银翘解毒系列制剂具有疏风解表，清热解毒的功效^[1]。临床上用于风热感冒，症见发热头痛、咳嗽口干、咽喉疼痛。由9味药组成，其中连翘、金银花重用为君，薄荷、牛蒡子、荆芥穗、淡豆豉辛散透表为臣，淡竹叶、桔梗为佐，甘草属佐使之品^[4]。其剂型有丸剂（大蜜丸、浓缩蜜丸、浓缩水丸）、颗粒剂（蔗糖型、乳糖型、蛋白糖型）、胶囊剂（硬胶囊、软胶囊）、合剂（银翘解毒合剂、银翘解毒液）、片剂（薄膜衣片、素片）共5个剂型9个品种，其制备工艺中薄荷和荆芥先提取挥发油最后喷加到制成的颗粒上。银翘解毒系列制剂剂型全，品种多，临床用药范围广，但质量标准中对薄荷和荆芥的控制项目较杂乱。在现行标准中，软胶囊采用气相色谱法鉴别薄荷脑，薄层法鉴别荆芥；银翘解毒液采用化学反应法鉴别薄荷和荆芥；浓缩水丸对薄荷没有控制；其他品种均采用薄层色谱法鉴别薄荷脑和荆芥^[1,2,3]。此外，薄层色谱法检测灵敏度较低，会出现挥发性成分量较低时致检不出斑点而产生误判的结果。故其质量控制标准存在方法及指标不统一以及检测结果不准确的问题。因此，有必要研究建立适用于银翘解毒所有剂型和品种的合理有效的定性和定量检测方法，统一并完善现行标准中薄荷和荆芥检测项目并使之通用。

Agilent 6890N气相色谱仪，FID检测器，配GC solution 色谱工作站；CPA224S万分之一电子天平（德国Sartorious公司）；MX5十万分之一电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；JL—720DT超声波清洗器（上海杰理超声仪器有限公司）；振荡仪（ZHWY—110X30）。

对照品薄荷酮（批号111706-201205）、薄荷脑（批号110728-200506）、胡薄荷酮（批号1076-201205）均购自中国食品药品检定研究院，质量分数均为99.8%。处方中投料用各饮片均由北京同仁堂科技发展股份有限公司提供。其余溶剂均为分析纯。样品信息见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 样品信息 Table 1 Information of samples 样品 剂型 生产企业 样品批号 样品 剂型 生产企业 样品批号 A1 素片 昆明中药 121159 B1 颗粒 中山市恒生药业 20121006 A2 素片 云南腾药制药 110202 B2 颗粒 广东益和堂制药 MK002 A3 素片 河南省宛西制药 120101 B3 颗粒 西安天一 121104 A4 素片 湖北广仁药业 121006 B4 颗粒 国药药材冷水江制药 20121104 A5 薄膜衣片 吉泰安(四川)药业 1108001 B5 颗粒 四川同人泰药业 121107 A6 薄膜衣片 北京同仁堂 12120752 B6 颗粒 四川泰华堂制药 120601 A7 薄膜衣片 江西九连山药业 20121008 B7 颗粒 陕西必康制药 12101501 A8 薄膜衣片 合肥华润神鹿药业 1206318 B8 颗粒 广东在田药业 121101 C1 大蜜丸 天津中新药业 4220023 D1 合剂 北京同仁堂 12260484 C2 大蜜丸 九芝堂 201011003 D2 合剂 江西南昌济生制药 120928 C3 大蜜丸 山西华康药业 20121001 D3 合剂 宝鸡必康嘉隆制药 20121126 C4 大蜜丸 西安正大制药 121111-1 D4 合剂 北京长城制药 12040101 C5 大蜜丸 甘肃天水岐黄药业 101214 D5 口服液 广东华南药业 121008 C6 大蜜丸 广东百科制药 120803 D6 口服液 吉林省康福药业 20120601 C7 大蜜丸 山西万辉制药 121108 D7 口服液 太极集团四川天诚制药 12040001 C8 大蜜丸 佛山冯了性药业 120034 D8 口服液 河南省新四方制药 121104 C9 浓缩蜜丸 九芝堂 20110803 F1 软胶囊 江苏康缘药业 20120303 C10 水蜜丸 北京同仁堂 12030720 F2 软胶囊 江苏康缘药业 20120901 E 硬胶囊 东莞广发制药 20120603 F3 软胶囊 江苏康缘药业 20120307

表 1 样品信息 Table 1 Information of samples

Agilent HP-5 毛细管柱（30 m ×0.32 mm，0.25 μm）；FID检测器；进样口温度为200 ℃；检测器温度为250 ℃；柱温：初始温度为50 ℃，保持1 min；以15 ℃/min的速率升温至100 ℃，保持10 min；以8 ℃/min的速率升温至150 ℃，保持2 min；以10 ℃/min的速率升温至240 ℃，保持10 min。进样量为1 μL；载气为氮气；体积流量1.5 mL/min；分流进样，分流比为3∶1。

精密称取片剂、硬胶囊剂各2 g、软胶囊剂1 g、颗粒剂4.8 g，加醋酸乙酯10 mL分别超声30 min、振荡30 min、水蒸汽蒸馏法提取3 h，测定。结果片剂和软胶囊剂超声法提取较好；颗粒剂、硬胶囊剂水蒸汽蒸馏法提取较好。

精密称取片剂、软胶囊适量，分别加醋酸乙酯和正己烷各10 mL，超声30 min，结果醋酸乙酯提取效率较高。

精密称取片剂、软胶囊适量，加醋酸乙酯10 mL，分别超声15、30、45 min，结果超声30 min可提取完全。

精密称取片剂、软胶囊适量，分别加醋酸乙酯10、20 mL，超声30 min，结果醋酸乙酯10 mL可提取完全。

精密称取丸剂18 g、颗粒剂12 g、硬胶囊剂5 g，分别挥发油提取2、3、4 h，并定容至25 mL，结果3 h可提取完全。

精密量取合剂液10 mL，分别用醋酸乙酯萃取3次（每次20 mL）、水蒸气蒸馏法提取3 h，并定容至25 mL，结果醋酸乙酯萃取即可提取完全。

精密量取合剂10 mL，分别加醋酸乙酯萃取1、2、3、4、5次，每次20 L，合并醋酸乙酯层，加10 mL氨试液洗涤，弃去氨试液，分取醋酸乙酯层，过无水硫酸钠，定容至25 mL，结果醋酸乙酯萃取3次即可。

取薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮对照品适量，精密称定，加醋酸乙酯制成各含1 mg/mL的混合对照品储备液。

取薄荷、荆芥对照药材1 g，分别按丸剂供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

参照银翘解毒片现行标准中制法制成缺薄荷和荆芥的双阴性样品，按丸剂供试品溶液制备方法制备成阴性样品溶液。

分别取片剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、硬胶囊剂、合剂适量，精密称定或量取，按照供试品溶液制备方法项下最优方法进行提取制备。

取阴性样品溶液进样，依法测定，结果见图 1，阴性样品色谱图中未出现3个指标成分，表明阴性无干扰。

1-薄荷酮；2-薄荷脑；3-胡薄荷酮 1-menthone; 2-menthol; 3-pulegone图 1 混合对照品、阴性样品、薄荷对照药材、荆芥对照药材及6个不同剂型样品的气相色谱图Fig.1 GC of mixed standards,negative sample,Menthae Haplocalycis Herba,Schizonepetae Herba,and samples of six different preparations

分别精密吸取混合对照品储备液适量，加醋酸乙酯配成质量浓度分别为0.002～0.2 mg/mL的梯度混合对照品溶液。以质量浓度（mg∙mL⁻¹）为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程、相关系数及线性范围；以各化合物的信噪比约等于10和3时的相应浓度确定定量限（LOQ）和检测限（LOD）。结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮的标准曲线、定量限与检测限 Table 2 Calibration,LOQs,and LODs of menthone,menthol,and pulegone 化合物 回归方程 r 线性范围/(μg∙mL−1) LOQ/(μg∙mL−1) LOD/(μg∙mL−1) 薄荷酮 A＝5 747.2C－1.821 6 0.999 9 2.036～203.6 0.500 0.187 薄荷脑 A＝5 530.2C－1.812 8 0.999 9 1.962～196.2 0.625 0.187 胡薄荷酮 A＝4 057.4C－4.196 5 0.999 9 2.094～209.4 1.250 0.313

表 2 薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮的标准曲线、定量限与检测限 Table 2 Calibration,LOQs,and LODs of menthone,menthol,and pulegone

精密吸取质量浓度为0.05 mg/mL的混合对照品溶液，重复进样6次。结果薄荷酮、薄荷脑和胡薄荷酮峰面积的RSD值分别为0.50%、0.62%、0.57%，表明仪器精密度良好。

精密吸取各剂型的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样6次。结果各剂型薄荷酮、薄荷脑和胡薄荷酮峰面积的RSD值为0.95%～1.68%、0.73%～1.71%、0.82%～1.89%，表明各剂型的供试品溶液在24 h内均稳定。

按各剂型供试品溶液制备法，取各剂型样品规定量，精密称定或量取，每种剂型平均取样5份，依法制备，进样，计算得薄荷酮、薄荷脑及胡薄荷酮的RSD值：在片剂中为0.99%、1.28%、1.47%，在软胶囊剂中为0.87%、0.41%、1.62%，在颗粒剂中为1.61%、1.36%、1.59%，在丸剂中为1.95%、1.72%、1.74%，在硬胶囊剂中为0.72%、0.69%、0.52%，在合剂中为1.89%、1.24%、1.28%，表明方法在各剂型中的重复性良好。

按各剂型供试品溶液制备法，取各剂型样品规定量的一半，精密称定或量取，分别精密加入不同浓度的混合对照品溶液5 mL，依法制备，测定结果见表 3。各剂型回收率为95.36%～103.5%，RSD值为1.1%～2.3%（n＝6）。见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 6种剂型中薄荷、荆芥所含薄荷酮、薄荷脑和胡薄荷酮含量的加样回收率 (n = 6) Table 3 Recoveries of menthone,menthol,and pulegone in Yinqiao Jiedu serial products (n = 6) 剂型 化合物 样品含量/ mg 加入量/ mg 测得量/ mg 平均回 收率/% RSD /% 片剂 薄荷酮 0.090 3 0.083 2 0.174 7 101.44 1.10 薄荷脑 1.028 5 1.259 0 2.256 6 97.55 2.33 胡薄荷酮 0.026 6 0.051 5 0.076 5 96.89 1.79 软胶囊 薄荷酮 0.154 1 0.144 7 0.302 9 102.83 1.36 薄荷脑 0.401 1 0.324 8 0.719 2 97.94 1.15 胡薄荷酮 0.080 0 0.071 1 0.147 8 95.36 1.14 颗粒剂 薄荷酮 0.069 7 0.084 9 0.156 5 102.24 1.77 薄荷脑 0.721 5 0.677 0 1.392 0 99.04 1.93 胡薄荷酮 0.034 8 0.059 8 0.096 7 103.51 1.44 丸剂 薄荷酮 0.098 1 0.090 1 0.186 0 97.56 1.72 薄荷脑 0.431 6 0.390 8 0.815 0 98.11 1.62 胡薄荷酮 0.200 0 0.244 2 0.434 5 96.03 1.42 硬胶囊 薄荷酮 0.103 5 0.109 7 0.209 1 96.29 2.14 薄荷脑 0.128 3 0.098 7 0.225 4 98.38 2.20 胡薄荷酮 0.069 2 0.063 1 0.132 4 100.16 1.90 合剂 薄荷酮 0.212 4 0.208 0 0.419 2 99.42 2.15 薄荷脑 0.770 3 0.708 0 1.478 0 99.96 2.31 胡薄荷酮 0.116 2 0.157 9 0.274 4 100.19 2.21

表 3 6种剂型中薄荷、荆芥所含薄荷酮、薄荷脑和胡薄荷酮含量的加样回收率 (n = 6) Table 3 Recoveries of menthone,menthol,and pulegone in Yinqiao Jiedu serial products (n = 6)

取33个企业的5个剂型9个品种共38批银翘解毒系列制剂的样品，依法制备供试品溶液并测定，不同剂型银翘解毒制剂样品中薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮结果见表 4。

表 4(Table 4)

表 4 各企业各批次样品中的薄荷酮、薄荷脑和胡薄荷酮 Table 4 Determination of menthone,menthol,and pulegone of different batches and enterprises 样品 剂型 薄荷酮 薄荷脑 胡薄荷酮 样品 剂型 薄荷酮 薄荷脑 胡薄荷酮 A1 素片 0.09 － 0.12 B1 颗粒 0.05 0.52 0.02 A2 素片 ND ND ND B2 颗粒 0.04 0.42 0.03 A3 素片 － － 0.03 B3 颗粒 0.03 0.18 0.03 A4 素片 － 0.99 － B4 颗粒 6.23 26.12 3.77 A5 薄膜衣片 0.03 0.02 0.10 B5 颗粒 0.01 1.23 0.03 A6 薄膜衣片 0.04 0.39 0.11 B6 颗粒 0.02 0.10 0.06 A7 薄膜衣片 0.42 6.10 0.18 B7 颗粒 0.02 0.05 0.02 A8 薄膜衣片 0.34 4.89 0.15 B8 颗粒 0.03 1.41 0.03 平均值 片剂 0.17 2.23 0.11 平均值 颗粒剂 0.80 3.75 0.50 C1 大蜜丸 0.04 － 0.28 D1 合剂 0.13 0.07 0.07 C2 大蜜丸 0.08 0.06 0.55 D2 合剂 0.01 0.30 ND C3 大蜜丸 0.08 0.35 0.10 D3 合剂 0.14 0.62 0.06 C4 大蜜丸 0.04 0.18 0.08 D4 合剂 0.06 0.02 0.08 C5 大蜜丸 0.13 0.03 0.24 D5 口服液 0.03 0.13 0.03 C6 大蜜丸 0.13 0.10 0.22 D6 口服液 － － － C7 大蜜丸 0.12 0.46 0.30 D7 口服液 0.15 0.63 0.06 C8 大蜜丸 0.14 15.52 0.38 D8 口服液 0.38 1.29 0.29 C9 浓缩蜜丸 0.06 0.16 0.21 平均值 液体制剂 0.13 0.44 0.10 C10 水蜜丸 0.02 0.15 0.05 F1 软胶囊 0.11 0.14 0.11 平均值 丸剂 0.08 1.87 0.24 F2 软胶囊 0.83 1.53 0.23 E 硬胶囊 0.01 0.01 0.01 F3 软胶囊 0.36 0.73 0.19 平均值 硬胶囊剂 0.01 0.01 0.01 平均值 软胶囊剂 0.44 0.80 0.18 “－”表示S/N＜10，“ND”表示未检测到 “－”- S/N < 10,“ND”-not detected

表 4 各企业各批次样品中的薄荷酮、薄荷脑和胡薄荷酮 Table 4 Determination of menthone,menthol,and pulegone of different batches and enterprises

本品系列制剂共有9个品种，由于制法、辅料、物理形态的不同，提取方法无法统一，本研究针对这些特点制订了合理的提取方法，为银翘解毒所有剂型统一薄荷和荆芥的定量方法奠定了基础。颗粒剂与硬胶囊的制法和辅料与片剂类似，从理论上应该与片剂的提取方法相同，但两个剂型超声法的提取效率却较低，分析原因是所用辅料在超声时导致结块，使挥发性成分难以溶出，因此颗粒剂和硬胶囊改用水蒸气蒸馏提取。合剂提取后其色谱图在薄荷脑峰处出现杂质峰干扰，曾尝试改用30～60 ℃石油醚、正己烷，结果两种提取液均出现严重的乳化现象且很难破乳；后仍采用醋酸乙酯萃取，但增加采用碱性较弱的氨试液洗涤，结果能有效去除干扰峰，且对3个所测成分含量基本没有影响。因此合剂选择采用醋酸乙酯萃取后用氨试液洗涤。

通过检测33个企业的38批样品，发现丸剂中3种成分的含量最高，其次是软胶囊，片剂、颗粒剂及合剂之间的含量差异不大，硬胶囊的含量最低。另外发现片剂中不同企业间含量差异较大，37.5%的企业未能检测出薄荷酮和薄荷脑，25%的企业未能检测出胡薄荷酮，其中一个企业3种成分均未检出，但包衣片中每个成分的含量均高于素片。由此可以看出，不同企业及同一企业不同批次的产品中挥发油质量存在很大差异。分析可能存在4点原因：一是药材质量差，挥发油提取得率低，或者未提取挥发油进行投料；二是挥发油喷加工艺不均匀；三是灭菌工艺有高温环节导致挥发油损失；四是包装材料存在问题导致贮存期间挥发油损失。

据文献，薄荷中主要的挥发性成分为薄荷脑^[7]；荆芥中主要成分为薄荷酮、胡薄荷酮^[6]，荆芥及荆芥穗中所含的薄荷酮和胡薄荷酮的含量差别很大^[8]。受产地及采收季节等各种因素影响，3种成分在药材中的含量不同^[9,10]。通过对薄荷叶、茎和荆芥茎、穗中3种成分的测定发现，薄荷中薄荷脑含量较高，而荆芥中薄荷脑只有微量或检测不出，因此薄荷脑可以作为薄荷的专属性成分；薄荷和荆芥中均含有一定量的薄荷酮和胡薄荷酮，但胡薄荷酮与薄荷脑的比值在薄荷中远低于在荆芥中，这个比值在荆芥茎中又低于在荆芥穗中。所以确定银翘解毒制剂中是否投料薄荷，可采用薄荷脑为指标；是否投料荆芥，仅以薄荷酮、胡薄荷酮为指标还不具专属性，需要规定胡薄荷酮与薄荷脑的比值，而对于投料荆芥穗还是荆芥茎，也可通过这个比值来区分，比值的探索研究正在进行中。

本文的研究以薄荷脑、薄荷酮、胡薄荷酮为指标，对银翘解毒系列制剂的不同剂型制订了不同的提取方法，建立了通用的色谱分析方法，统一了全部剂型对挥发性成分的控制标准，为银翘解毒系列制剂的药典通用标准制定奠定了基础并能准确的评价银翘解毒系列制剂的质量。