摘要:
目的 探究理气活血滴丸对大鼠心肌细胞H9C2缺氧/复氧( H/R)损伤的保护作用及相关信号通路机制。方法 理气活血滴丸175 mg·kg-1 ig给予大鼠制备含药血清,ig给予大鼠去离子水制备空白血清。将生长状态良好的H9C2细胞分为9组:对照[10%胎牛血清( FBS)]组、单给空白血清( 10%空白血清)组、模型( 10% FBS+H/R模型)组、空白血清( 10%空白血清预处理12 h+H/R模型)组、含药血清( 10%含药血清预处理12 h+H/R模型)组、shNC+空白血清( NC-shRNA感染+10%空白血清预处理12 h+H/R模型)组、shHIF-1α+空白血清( HIF-1α-shRNA感染+10%空白血清预处理12 h+H/R模型)组、shNC+含药血清( NC-shRNA感染+10%含药血清预处理12 h+H/R模型)组、shHIF-1α+含药血清( HIF-1α-shRNA感染+10%含药血清预处理12 h+H/R模型)组。重组shRNA腺病毒感染H9C2细胞24 h后,更换相应培养基预处理12 h,随后进行H/R处理。酶联免疫吸附测定法( ELISA)检测心肌酶[乳酸脱氢酶( LDH)、肌酸激酶同工酶MB( CKMB)、心肌肌钙蛋白I( cTnI)]漏出情况,CCK-8法检测细胞活性,Annexin V-APC/7-AAD染色流式细胞术分析细胞凋亡情况,Western blotting检测B细胞淋巴瘤/白血病-2( Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白( Bax)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3( cleaved Casepase-3)、缺氧诱导因子-1α( HIF-1α)、血红素加氧酶1( HO-1)蛋白表达情况,免疫荧光观察HIF-1α亚细胞定位并行平均光密度( AOD)分析。结果 与单给空白血清组比较,H/R后空白血清组H9C2心肌细胞的培养液中LDH、CKMB和cTnI含量显著升高( P<0.01),细胞活力显著下降( P<0.05)、凋亡率显著增加( P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著降低( P<0.05),Bax、cleaved Casepase-3、HIF-1α、HO-1蛋白表达显著升高( P<0.05),HIF-1α阳性表达定位于细胞质和细胞核,HIF-1α AOD显著升高( P<0.05)。与空白血清组比较,理气活血滴丸含药血清预处理可使H/R后心肌细胞的心肌酶LDH、CK-MB、cTnI漏出显著减少( P<0.05),细胞活力显著升高( P<0.05)、凋亡率显著降低( P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著升高( P<0.05),Bax、cleaved Casepase-3、HIF-1α、HO-1蛋白表达显著降低( P<0.05),HIF-1α在细胞质和细胞核都有表达,但主要定位于细胞核,HIF-1α AOD显著降低( P<0.05)。重组腺病毒介导的HIF-1α-shRNA可削弱理气活血滴丸含药血清上述作用( P<0.05)。结论 理气活血滴丸通过调节HIF-1α信号通路减轻H/R诱导的心肌细胞凋亡。