参苓健体粉是由茯苓、白术（漂）、莲子（去心）、明党参、薏苡仁（炒）、白扁豆（炒）、山药（炒）、广藿香、砂仁、甘草10味中药加工而成的散剂，具有补气健脾、和胃渗湿的功效，主要用于消化不良、食欲不振、面黄肌瘦，精神疲乏，慢性腹泻等疾病的治疗。该制剂收载于《卫生部颁药品标准》中药成方制剂第8册，但是标准仅规定了制法、性状和理化鉴别，没有其他检测项目^[1]。方中茯苓利水渗湿、健脾、宁心，主要成分有去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸^[2]；方中白术健脾益气、燥湿利水，主要成分有白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ^[2]。由于该制剂由10味中药组成，多指标控制能更好地反映其质量，因此本实验采用梯度洗脱联合波长切换HPLC法对参苓健体粉中指标性成分去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ同时进行了测定，为有效控制参苓健体粉的质量提供了依据。

Agilent 1100系列四元梯度泵高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；XS205DU电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

去氢土莫酸（批号6754-16-1，质量分数98.0%，2～8 ℃避光保存）、去氢茯苓酸（批号77012-31-8，质量分数98%）、茯苓酸（批号29070-92-6，质量分数98%）对照品均购于成都克洛玛生物科技有限公司；白术内酯Ⅲ（批号111978-201501，质量分数99.9%，冷冻保存）、白术内酯Ⅰ（批号111975-201501，质量分数92.6%，冷冻保存，使用前无需处理）对照品均购于中国食品药品检定研究院；参苓健体粉购于湖南富兴飞鸽药业有限公司，规格15 g/袋，批号分别为1511163、1512093、1512223；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。

采用Venusil MP C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B），梯度洗脱^[3-5]，0～7 min，52.0%A，7～19 min，52.0%→60.0%A，19～28 min，60.0%→75.0%A，28～35 min，75.0%→52.0%A；检测波长：210 nm^[6]（0～19 min，检测去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸）、220 nm^[7-9]（19～35 min，检测白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ）；体积流量：0.8 mL/min；柱温：30 ℃；进样量为10 μL。

分别精密称取去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ对照品适量，用甲醇溶解，分别制成含去氢土莫酸0.462 mg/mL、去氢茯苓酸0.380 mg/mL、茯苓酸0.576 mg/mL、白术内酯Ⅲ0.395 mg/mL、白术内酯Ⅰ0.505 mg/mL的单一对照品储备溶液。再分别依次量取各对照品储备液2.5、1.5、2.5、2.0、1.0 mL，置同一50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

取参苓健体粉约9.0 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入甲醇45 mL，超声提取40 min，放冷，用甲醇加至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

按参苓健体粉的处方，分别制备缺茯苓和白术的阴性样品，按供试品溶液的制备项下的方法制成相应的阴性样品溶液。

分别精密吸取对照品储备液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，置于同一10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列混合对照品溶液。按照上述方法进样测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 线性关系考察 Table 1 Linear relationship test 成分 回归方程 r 线性范围/(μg·mL-1) 去氢土莫酸 Y＝1.763 2×106X－117.9 0.999 7 4.62～92.40 去氢茯苓酸 Y＝3.571 6×105X＋385.2 0.999 9 3.80～76.00 茯苓酸 Y＝2.131 9×106X＋299.0 0.999 9  5.76～115.20 白术内酯Ⅲ Y＝1.602 7×106X－248.2 0.999 8 3.95～79.00 白术内酯Ⅰ Y＝4.243 1×105X＋402.3 0.999 6  5.05～101.00

表 1 线性关系考察 Table 1 Linear relationship test

精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各适量，进样测定。结果显示，各阴性样品溶液的色谱图中，在所测去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ对应的位置无干扰，色谱图见图 1。

图 1 参苓健体粉（A）、混合对照品（B）、缺茯苓阴性样品（C）、缺白术阴性（D）色谱图 Fig. 1 HPLC Chromatograms of Shenling Jianti Powder (A), mixed reference substances (B), negative sample without Poria (C), and negative sample without Atractylodis Macrocephalae Rhizoma (D) 1-去氢土莫酸2.-去氢茯苓酸3-茯苓酸4-白术内酯Ⅲ 5-白术内酯Ⅰ 1-dehydrotumulosic acid 2-dehydropachymic acid 3-pachymic acid 4-atracylenolide Ⅲ 5-atracylenolideⅠ

取混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，结果去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ峰面积的RSD值分别为0.92%、1.05%、0.99%、1.07%、1.13%。

取批号1511163参苓健体粉样品6份，制备供试品溶液，进样测定峰面积，分别计算去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的质量分数，结果其RSD值分别为1.62%、1.24%、1.56%、1.69%、1.74%。

取批号1511163参苓健体粉样品，制备供试品溶液，在室温下放置0、2、4、6、8、12 h，进样测定去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的峰面积值，计算得其RSD值分别为0.98%、1.04%、0.96%、1.06%、1.17%。结果显示供试品溶液在室温下12 h内很稳定。

取批号1511163参苓健体粉样品6份，每份约4.5 g，精密称定，分别精密加入混合对照品溶液25 mL，制备供试品溶液，进样，测定5个成分的峰面积值，计算平均回收率，结果去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的平均回收率分别为99.24%、97.75%、98.66%、98.49%、99.10%，RSD值分别为1.23%、1.79%、1.66%、0.80%、1.25%。

取3批参苓健体粉样品，制备供试品溶液，进样测定，采用外标法计算去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的质量分数，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的测定结果（n=3） Table 2 Determination of dehydrotumulosic acid, dehydropachymic acid, pachymic acid, atracylenolide Ⅲ, and atracylenolide Ⅰ in Shenling Jianti Powder (n=3) 批号 质量分数/（mg·g-1） 去氢土莫酸 去氢茯苓酸 茯苓酸 白术内酯Ⅲ 白术内酯Ⅰ 1511163 0.122 0.061 0.168 0.087 0.059 1512093 0.139 0.073 0.181 0.069 0.062 1512223 0.105 0.057 0.152 0.093 0.067

表 2 参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的测定结果（n=3） Table 2 Determination of dehydrotumulosic acid, dehydropachymic acid, pachymic acid, atracylenolide Ⅲ, and atracylenolide Ⅰ in Shenling Jianti Powder (n=3)

实验中分别对样品的提取方式加热回流、超声处理、索氏提取进行了对比考察，结果表明不同提取方式时所测各组分质量分数差异不大。考虑到操作的便捷性，选取超声提取方式对样品进行处理；又对提取溶剂（甲醇、70%甲醇）和超声提取时间（30、40、50 min）进行了考察，最终确定提取方法为甲醇超声提取40 min。

实验同时考察了多个流动相体系（乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.5%磷酸溶液、乙腈-0.05%磷酸、甲醇-0.1%甲酸溶液），最终优选出乙腈-0.05%磷酸溶液洗脱程序。

实验建立了波长切换HPLC梯度洗脱法同时测定参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ 5个成分，操作简便、结果可靠，可用于参苓健体粉的质量控制。