泮托拉唑钠属于典型的质子泵抑制剂，临床上主要用于十二指肠溃疡、Zollinger-Ellison综合征以及其他与高胃酸相关的疾病。其结构中含有一个手性中心硫原子，存在一对对映异构体^[1-2]。文献报道泮多拉唑的代谢动力学存在显著的立体选择性，且存在种属差异，目前临床使用的为消旋体^[3-4]。在大鼠体内右旋优先代谢，导致服用消旋体后，右旋体泮托拉唑钠的血药浓度和AUC低于左旋体泮托拉唑钠。在人体中，参与右旋体的代谢可能主要是CYP2C9，表现在快代谢人群中（＋）-右旋体的Cmax和AUC均小于（－）-左旋体，相反在慢代谢人群中右旋体的Cmax和AUC均显著高于左旋体。近来研究显示左旋泮托拉唑钠为泮托拉唑钠的消旋单体，为优映体，具有比泮托拉唑钠更高的疗效^[5]。为开发泮托拉唑钠单一对映体，有必要了解对映体在体内的构型转化。本文建立了手性固定相HPLC-UV法测定大鼠血浆中两种泮托拉唑钠对映体，并探讨大鼠体内静脉注射消旋体泮托拉唑钠后2种泮托拉唑钠对映体在大鼠体内药动学规律，为研究手性药物泮托拉唑钠提供参考依据。

Shimadzu高效液相色谱仪，包括LC-20AD送液泵（双泵）、DGU-20A3在线脱气机、SIL-20A自动进样器、CTO-20A柱温箱、SPD-20A紫外检测器、CBM-20A系统控制器和Shimadzu Labsolutions色谱工作站；Milli-Q Gradient A10超纯水器（Millipore 公司）；Thermo Sorvall Stratos台式高速冷冻离心机（Thermo公司）；Vortex-2旋涡混合器（Scientific Industries 公司）。

甲醇（色谱纯）和乙腈（色谱纯）均为Merck公司产品，水为超纯水，其余试剂均为市售分析纯。

SD大鼠6只，雌雄各半，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，动物生产许可证号SCXK（沪）2013-0016。

泮托拉唑钠对照品，规格100 mg/支，HPLC法测定质量分数为95.8%，中国食品药品检定研究院提供，批号100575-201505；左旋泮托拉唑钠、右旋泮托拉唑钠对照品，HPLC法测定质量分数分别为98.4%、97.8%，均由济南康和医药科技有限公司提供；非那西丁对照品，批号100095-201505，中国食品药品检定研究院提供。

精密称取左旋泮托拉唑钠、右旋泮托拉唑钠和消旋泮托拉唑钠对照品各20.0 mg，用甲醇溶解，并定容至25 mL，均配制成0.8 mg/mL贮备液。临用时用甲醇稀释到相应的质量浓度。

精密称取非那西丁对照品10.0 mg，用甲醇溶解，并定容至10 mL，配制成1.0 mg/mL贮备液。临用时用甲醇稀释到50 μg/mL。

Chiralcel OJ-RH色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm），流动相为20 mmol/L磷酸二氢钠（含0.01%磷酸）-乙腈（78∶22），紫外检测波长为288 nm，体积流量为1.0 mL/min，柱温40 ℃。

取血浆样品100 μL，加50 μg/mL非那西丁内标10 μL，混均后，加1 mL醋酸乙酯，振荡10 min,8 000 r/min离心5 min，分取上层有机层800 μL，45 ℃真空浓缩挥干，100 μL甲醇复溶，振荡10 min，14 000 r/min离心10 min，即得。

在试验条件下，泮托拉唑钠对映体之间有较好的分离度，血浆和组织中的杂质不干扰样品峰，基线噪音小，内标、左旋泮托拉唑钠和右旋泮托拉唑钠的保留时间分别约为6.7、7.9、9.8 min，方法专属性较高，见图 1。

图 1 泮托拉唑钠血浆测定的HPLC色谱图 Fig. 1 HPLC chromatograms of pantoprazole sodium A-空白血浆 B-空白血浆加入消旋泮托拉唑钠和内标非那西丁 C-iv消旋泮托拉唑钠1 h后的血浆样品 1-内标非那西丁 2-左旋泮托拉唑钠 3-右旋泮托拉唑钠 A-blank plasma B-blank plasma added racemic pantoprazole sodium and phenacetin C-plasma samples of intravenous racemic pantoprazole sodium after 1 h 1-phenacetin 2-L-pantoprazole sodium 3-D-pantoprazole sodium

取空白大鼠血浆90 μL，加10 μL不同质量浓度对照品溶液，使血浆中单一对映体质量浓度分别为0、0.156、0.312、0.625、1.25、2.50、5.00、10.000、20.00、40 μg/mL，按血浆样品处理项下操作，记录样品和内标峰面积，利用样品质量浓度对样品与内标峰面积比进行线性回归，得左旋泮托拉唑钠回归方程为Y＝0.777 X＋0.023（r＝0.999 3），线性范围为0.156～40.000 μg/mL。右旋泮托拉唑钠回归方程为Y＝0.772 X＋0.026（r＝0.999 0），线性范围为0.156～40.000 μg/mL。以信噪比大于10确定本方法的定量限为0.156 μg/mL。

取洁净的Eppendoff管，加100 μL空白血浆和对映体对照品使相应质量浓度分别为0.312、2.50、20.00 μg/mL，分别考察血浆样品室温放置6 h、进样器放置24 h、−20 ℃冷冻14 d、反复冻融3次的稳定性，结果表明样品在储存及测定过程中均稳定，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 稳定性试验结果（x±s，n =5） Table 1 Results of stability test (x±s,n =5) 加入质量浓度/ (μg∙mL−1) 室温放置6 h 进样器放置24 h −20 ℃冷冻14 d 反复冻融3次 测得质量浓度/(μg∙mL−1) RSD% 测得质量浓度/(μg∙mL−1) RSD% 测得质量浓度/(μg∙mL−1) RSD% 测得质量浓度/(μg∙mL−1) RSD% 左旋泮托拉唑钠 0.312 0.291±0.005 2.082 0.283±0.006 3.204 0.284±0.007 2.619 0.272±0.018 7.36 2.5 2.369±0.045 2.075 2.344±0.039 1.999 2.363±0.039 2.028 0.292±0.047 2.145 20 19.112±0.509 3.183 20.590±0.186 1.924 19.622±0.279 1.497 19.437±0.628 3.231 右旋泮托拉唑钠 0.312 0.272±0.003 1.082 0.294±0.002 0.784 0.278±0.007 2.637 0.271±0.013 4.831 2.5 2.369±0.041 1.904 2.356±0.044 1.886 2.361±0.051 2.169 2.289±0.045 1.971 20 19.197±0.615 3.203 20.610±0.400 1.94 19.668±0.297 1.508 18.772±0.579 3.085

表 1 稳定性试验结果（x±s，n =5） Table 1 Results of stability test (x±s,n =5)

用空白大鼠血浆配制0.312、2.500、20.000 μg/mL样品各5份，连续测定3 d，用随行标准曲线计算相应的药物浓度，结果表明，批内和批间RSD值均小于10%，准确度为90.07%～98.96%，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 精密度与准确度试验结果（x±s，n =5） Table 2 Results of precision and accuracy (x±s,n =5) 加入质量浓度/(μg∙mL−1) 日内精密度 日间精密度 测得质量浓度/(μg∙mL−1) RSD/% RE/% 测得质量浓度/(μg/mL) RSD/% RE/% 左旋泮托拉唑钠 0.312 0.283±0.006 2.774 90.38 0.283±0.010 3.444 90.07 2.5 2.330±0.074 3.016 94 2.362±0.046 1.94 94.48 20 19.730±0.792 4.996 98.51 19.793±0.285 1.439 98.96 右旋泮托拉唑钠 0.312 0.284±0.006 2.634 91.02 0.294±0.004 1.487 94.23 2.5 2.327±0.075 3.297 93.72 2.364±0.042 1.78 94.56 20 19.790±0.680 4.969 98.63 19.789±0.308 1.554 98.94

表 2 精密度与准确度试验结果（x±s，n =5） Table 2 Results of precision and accuracy (x±s,n =5)

EP管加入90 μL空白血浆，加入10 μL对照品溶液，使单一对映体质量浓度分别为0.312、2.500、20.000 μg/mL，按血浆样品处理项下的方法操作，记录样品和内标峰面积（A1）；另取EP管加入10 μL 6.250、50.000、400.000 μg/mL消旋泮托拉唑钠对照品溶液，再加入内标10 μL，挥干后甲醇100 μL复溶，离心，取上清进样，记录样品和内标峰面积（A2）。以峰面积的比值A1/A2计算得血浆中左旋泮托拉唑钠、右旋泮托拉唑钠和内标的回收率，结果见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 回收率试验结果（x±s，n =5） Table 3 Results of recovery test (x±s,n =5) 质量浓度/(μg∙mL−1) A1 A2 A1/A2/% 左旋泮托拉唑钠 0.312 10 721±345 14 263±191 75.18 2.5 83 250±2 942 118 917±1 063 70.01 20 713 860±38 145 977 412±32 670 73.04 右旋泮托拉唑钠 0.312 10 270±500 14 200±209 72.32 2.5 82 461±2 959 118 830±1 142 69.39 20 711 018±37 936 977 441±32 680 72.74 内标 4 45 347±2 307 72 569±1 699 62.49

表 3 回收率试验结果（x±s，n =5） Table 3 Results of recovery test (x±s,n =5)

取大鼠6只，雌雄各半，体质量（229±39）g，禁食但可自由饮水12 h后，尾iv消旋体，给药剂量为16 mg/kg。于给药后2、5、10、20、40、60、90、120、180、240 min眼底静脉丛取血，于肝素处理的试管中，离心后取相应体积的血浆于−20 ℃冰箱保存。HPLC法测定血浆中左旋泮托拉唑钠、右旋泮托拉唑钠的浓度，结果见图 2。

图 2 大鼠血浆中泮托拉唑钠左旋体和右旋体的平均浓度-时间曲线（x±s，n = 6） Fig. 2 Plasma concentration-time curves of pantoprazole sodium L-isomer and D-isomer (x±s,n = 6 )

利用药动学数据处理软件Data Analysis System 2.0版本（DAS2.0，中国药理学会定量药理学专业委员会）按统计矩法和一房室模型法计算主要的药动学参数，见表 4。

表 4(Table 4)

表 4 泮托拉唑钠钠左旋体与右旋体的主要药动学参数（x±s，n = 6） Table 4 Major pharmacokinetic parameters of pantoprazole sodium L-isomer and D-isomer (x±s,n =6) 参数 单位 左旋泮托拉唑钠 右旋泮托拉唑钠 AUC0-t min•μg•mL−1 1 688.45±302.38 1 399.88±376.44 AUC0-∞ min•μg•mL−1 1 710.61±309.40 1 417.29±383.21 K10 min−1 0.023±0.006 0.037±0.019 V mL•kg−1 211.30±18.21 198.37±1986 CL mL•min−1•kg−1 4.82±0.98 6.23±2.58 Cmax μg•mL−1 38.13±3.33 40.52±3.69 t1/2 min 30.92±6.41 22.37±7.59 MRT min 44.57±9.12 32.27±10.88

表 4 泮托拉唑钠钠左旋体与右旋体的主要药动学参数（x±s，n = 6） Table 4 Major pharmacokinetic parameters of pantoprazole sodium L-isomer and D-isomer (x±s,n =6)

在建立本分析方法的过程中，对色谱柱以及提取条件等进行了优化。文献报道显示泮托拉唑钠消旋体的测定多采用HPLC法^[6-7]。若采用手性柱HPLC法测定生物样品中泮托拉唑钠对映体时，手性柱的立体选择性强。对色谱柱进行选择时，比较了Chiralcel OJ-RH、Welch Ultimate Cellu-J手性色谱柱，结果表明在Chiralcel OJ-RH手性色谱柱上可以获得峰形较好的色谱峰。在试验中发现甲醇为流动相的色谱图中杂质峰不能与泮托拉唑钠对映体很好地分离，柱效也没有乙腈体系高，所以实验中采用了磷酸二氢钠水溶液-乙腈体系，流动相中加入0.01%的H3PO4，可以显著改善峰形。本实验比较醋酸乙酯、氯仿、正丁醇和正己烷等有机溶剂从血浆样品提取泮托拉唑对映体的回收率以及纯净度，结果发现醋酸乙酯的提取效率最高达到70%以上，并且提取得到的样本杂质干扰最少。

有文献研究了泮托拉唑钠对映体在大鼠体内的药动学，结果发现灌胃消旋体泮托拉唑5 mg/kg后左旋体在血中的清除速度较右旋体慢，二者的t1/2、Ke差异具有显著性（P<0.05）^[8]。但也有文献报道采用高液相色谱串联质谱方法测定犬体内泮托拉唑钠对映体，结果表明泮托拉唑钠中左旋体与右旋体AUC_{0-6 h}的比值是0.94，未发现左旋体与右旋体之间存在明显的相互转化^[9]。此外，还也有文献报道右旋泮托拉唑钠在健康人体不发生构型转化^[8]。本研究发现，静脉注射泮托拉唑钠消旋体后左旋和右旋对映体在大鼠体内的AUC_0-t相差不大，无统计学差异，并且主要的药动力学参数平均驻留时间、半衰期、清除率和表观分布容积在两种泮托拉唑钠对映体中无显著性差异，提示左旋和右旋泮托拉唑在大鼠体内未发生相互转化。

本文建立了手性固定相HPLC-UV法同时测定大鼠血浆中两种泮托拉唑钠对映体，并探讨大鼠体内静脉注射消旋体泮托拉唑钠后两种泮托拉唑钠对映体在大鼠体内药动学规律，为研究手性药物泮托拉唑钠提供参考依据。