复方前列舒丸为辽阳市中心医院生产的医院制剂，由淫羊藿、车前草、虎杖、何首乌、猪苓、土鳖虫、枳壳、甘草8味中药制成，具有补肾益气、通淋利水的功效。本实验参考《中国药典》2015年版一部车前草、枳壳、淫羊藿中有关成分的测定方法^[1]，采用HPLC梯度洗脱结合变换检测波长法同时测定处方中组方中药车前草中大车前苷^{[2, 3]}，枳壳中柚皮苷、橙皮苷^[4]、新橙皮苷^{[5, 6]}，淫羊藿中朝藿定C、淫羊藿苷^{[7, 8]}6个特征性成分。结果表明该方法简便、高效，为全面控制复方前列舒丸的质量提供了科学依据。

Agilent1260高效液相色谱仪；G1314B可变波长检测器（VWD），SartoriusR200D型电子天平，Phenomen HU10260B型超声波清洗器。

大车前苷（批号111575-200502）、柚皮苷（批号110722-201312）、橙皮苷（批号110721-201316）、新橙皮苷（批号111857-201102）、朝藿定C（批号111780-201302）、淫羊藿苷（批号110737-200415）对照品均购自中国食品药品检定研究院。复方前列舒丸样品为辽阳市中心医院提供，大蜜丸，规格为0.3 g/粒，批号为150301、150302、150303spanstyle='font-family:宋体;color:black'>。甲醇、乙腈均为色谱纯，水为二次重蒸水，其他试剂均为分析纯。

安捷伦Zorbax C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱：0～5 min，10% A；5～30 min，10% A→30% A；30～50min，30% A；检测波长为330 nm（0～20min，测定大车前苷）、283 nm（20～40min，测定柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷）、270 nm（40～50min，测定朝藿定C、淫羊藿苷）；柱温为35 ℃；体积流量为1.0 mL/min；进样量为5 µL。理论塔板数按大车前苷计算应不低于3 000，各峰的分离度均大于1.5。在上述色谱条件下，样品中其他成分对上述6种成分的测定无干扰。色谱图见图 1。

1-大车前苷 2-柚皮苷3-橙皮苷 4-新橙皮苷 5-朝藿定C 6-淫羊藿苷 1-plantamajoside 2-naringin 3-hesperidin4-neohesperidin 5-epimedinC 6-icariin 图 1 混合对照品（A）、复方前列舒丸（B）、缺车前草阴性样品（C）、缺淫羊藿阴性样品（D）和缺枳壳阴性样品（E）的色谱图Fig.1 HPLC Chromatograms of mixed reference substances (A), Compound Qianlieshu Pills (B),negative sample without Plantaginis Herba (C) and negative sample withoutEpimedii Folium (D), and negative sample withoutAurantii Fructus (E)

取大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量，加甲醇溶液制成质量浓度分别10.11、49.62、15.46、44.62、18.39、52.18µg/mL的混合对照品溶液。

取质量差异项下的复方前列舒丸，剪碎，取约1 g，精密称定，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理（功率300 W，频率50 kHz）处理30 min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，即得。

按处方工艺及处方量，分别制备缺车前草、枳壳、淫羊藿的样品，并按“供试品溶液的制备”项下方法操作，制备阴性样品溶液，即得。

取混合对照品溶液，分别进样1、2、5、10、15、20µL，记录色谱图，测定峰面积值。分别对各成分以峰面积为纵坐标，进样质量为横坐标，进行线性回归，结果见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 6个成分的线性关系 Table 1 Linear relation of six active ingredients 成分 回归方程 r 线性范围/ng 大车前苷 Y＝1 254.3 X＋20.196 0.999 7 10.11～202.20 柚皮苷 Y＝1 543.9 X＋39.105 0.999 7 49.62～992.40 橙皮苷 Y＝1 515.2 X＋19.332 0.999 8 15.46～309.20 新橙皮苷 Y＝1 715.5 X＋35.458 0.999 9 44.62～892.40 朝藿定C Y＝1 018.9 X－1.696 0.999 5 18.39～367.80 淫羊藿苷 Y＝1 067.2 X－15.391 0.999 8 52.18～1 043.60

表 1 6个成分的线性关系 Table 1Linear relation of six active ingredients

取批号150301复方前列舒丸样品，制备供试品溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C和淫羊藿苷峰面积的RSD值分别为0.3%、0.2%、0.4%、0.2%、0.4%、0.6%。

取批号150301复方前列舒丸样品，制备供试品溶液，分别于配制后0、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积，结果大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷峰面积的RSD值分别为0.4%、0.2%、0.4%、0.2%、0.5%、0.7%。表明供试品溶液中6个成分在室温放置12 h稳定。

分别取批号150301复方前列舒丸样品约1 g，精密称定，共取6份，制备供试品溶液，进样，测定峰面积，计算质量分数，结果样品中大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷质量分数的RSD值分别为1.2%、0.7%、1.1%、1.5%、0.9%、1.1%。

精密称取批号150301复方前列舒丸样品6份，各0.5 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入0.330 9mg/mL大车前苷、0.350 0 mg/mL橙皮苷对照品混合溶液2 mL，0.412 4 mg/mL柚皮苷、0.360 8 mg/mL新橙皮苷、0.152 1 mg/mL朝藿定C、0.407 4 mg/mL淫羊藿苷对照品混合溶液5 mL，水浴蒸干，再精密加入甲醇25 mL，制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，结果大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷的平均回收率分别为97.4%、98.8%、99.5%、98.9%、97.2%、95.6%，RSD值分别为0.83%、1.2%、1.4%、1.5%、1.5%、1.0%。

取复方前列舒丸适量，制备供试品溶液，每批样品平行操作2份，以外标法分别测定3批复方前列舒丸样品中大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷的质量分数，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 复方前列舒丸中6个活性成分的测定结果 Table 2 Determinationof six active ingredients in Compound Qianlieshu Pills (n = 2 ) 批号 质量分数/(mg·g−1) 大车前苷 柚皮苷 橙皮苷 新橙皮苷 朝藿定C 淫羊藿苷 150301 1.322 4.052 1.413 3.490 1.494 4.041 150302 1.280 3.888 1.450 3.619 1.612 3.895 150303 1.352 4.152 1.501 3.444 1.623 3.957

表 2 复方前列舒丸中6个活性成分的测定结果 Table 2Determinationof six active ingredients in Compound Qianlieshu Pills

分别考察超声提取、加热回流等方法对6个成分的提取效率，结果表明超声提取法效率更高；提取溶剂考察了甲醇、50%甲醇水溶液、水，结果表明，甲醇对6个成分综合提取率最高；同时对甲醇用量15、25、50、100 mL以及超声提取时间15、30、45min进行考察，最终确定采用甲醇25 mL超声处理30 min作为提取条件。

分别考察了乙腈-0.1%磷酸水溶液、乙腈-1%冰醋酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液、甲醇-0.1%磷酸水溶液，结果发现采用乙腈-0.1%磷酸水溶液时峰型较好，基线平稳，分离效果理想，故最终选择乙腈-0.1%磷酸水溶液。参照相关文献，确定梯度洗脱条件，采用HPLC程序波长法在50 min内完成对大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷6个活性成分的同时分析测定，缩短了分析时间，提高了检测效率。

复方前列舒丸处方中车前草具有利尿、清热之功效，为方中君药；枳壳可破气，辅以淫羊藿、何首乌能补肾强筋骨、祛风湿，皆为方中臣药。本实验同时测定复方前列舒丸中大车前苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、朝藿定C、淫羊藿苷6个特征性成分，为全面控制复方前列舒丸的质量提供了参考。