五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果实，其味酸、性温，具有收敛固涩、益气生津、宁心安神等功效，临床用于治疗咳嗽虚喘、梦遗滑精、久泻不止、自汗盗汗、心悸失眠等症^[1]。常用的五味子为生品、醋制品和酒制品，现代药理学研究表明，五味子具有神经保护作用，能够抑制海马神经凋亡^[2-3]，另外对神经系统具有双向调节作用，不仅可以镇静催眠，还可以兴奋中枢神经^[4-5]。抑郁症的“慢性应激学说”表明，长期处于慢性应激的机体可导致下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进，海马萎缩和神经细胞凋亡，进而导致体内激素、神经递质分泌紊乱^[6]。目前临床常用的抗抑郁药虽然对抑郁症有一定的治疗效果，但作用范围狭窄，且副反应较多。近年来，从植物药中寻找抗抑郁药成为研究热点。本实验以五味子不同炮制品为研究对象，探讨其对慢性不可预知性应激诱导的抑郁小鼠的改善作用，为开发一种副作用小且作用稳定的抗抑郁药及扩大五味子的临床应用提供依据。

SPF级ICR小鼠60只，雌雄各半，体质量18~22 g，均购自中国食品药品检定研究院，动物使用许可证号SCXK（京）2014-0013。

RE52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；FA2104型分析天平（万分之一，上海精科天平厂）；ZH-YLS-18型悬尾测定仪（安徽正华生物仪器设备有限公司）；SHA-C型振荡仪（金坛市杰瑞尔电器有限公司）；DNM-9602型酶标分析仪（北京普朗新技术有限公司）；TD6M型湘立离心机（湖南湘立科学仪器有限公司）。

盐酸氟西汀分散片（礼来苏州制药有限公司分包装，规格20 mg/片，批号2012001）；五羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、肾上腺素皮质酮（CORT）ELISA试剂盒（Bio-Swamp公司，规格96T）；五味子购自河北省安国市，产地辽宁，批号20141110，由山西中医学院中药学院中药鉴定教研室裴香萍副教授鉴定为木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.的干燥成熟果实。

取五味子原药材，除去果梗和杂质，即得净五味子。用时捣碎，作为生五味子。

取净五味子100 g，加绍兴黄酒30 mL，拌匀后闷润30 min，隔水蒸2 h，60 ℃烘干12 h，用时捣碎，即得酒五味子。

取净五味子100 g，加东湖陈醋30 mL，拌匀后闷润30 min，隔水蒸2 h，60 ℃烘干12 h，用时捣碎，即得醋五味子。

分别取生五味子、酒五味子、醋五味子粉末（过3号筛）适量，用8倍量的90%乙醇回流提取3次，每次1 h，回收乙醇得浸膏，60 ℃烘干得干膏。分别取生五味子、酒五味子、醋五味子干膏适量，精密称定，用水分散至以生药量计质量浓度为0.1 g/mL。

ICR小鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组以及生五味子组、酒五味子组、醋五味子组，每组10只，适应性喂养1周。对照组和模型组ig蒸馏水，氟西汀组ig盐酸氟西汀分散片3.3 mg/kg，生五味子、酒五味子和醋五味子组均ig相应药物1.0 g/kg，体积为10 mL/kg，给药1 h后造模，持续28 d。

盐酸氟西汀分散片的给药剂量依据说明书的临床用量，五味子不同炮制品给药剂量依据《中国药典》2015年版中五味子最大给药剂量，并按小鼠体表面积折算所得。

对Katz^[7]的方法加以改进，并参照文献报道^[8]建立慢性不可预知性应激模型。10 ℃冷水中强迫游泳5 min、高速摇晃（2次/s）15 min、50 ℃热应激5 min、鼠笼倾斜60°、潮湿环境24 h、禁水24 h、禁食24 h、空笼饲养24 h、孤笼饲养48 h、昼夜颠倒10种刺激方法，1种/d，交替进行，持续28 d。

实验前禁食不禁水12 h，末次给药1 h后，进行行为学观察。

敞箱实验：敞箱由不透明材料构成，为底边长35 cm，高20 cm的正方体，敞箱底部中央画一12 cm×12 cm的正方形，8:00~12:00在安静房间内测试，将小鼠置于敞箱中央，观察其在5 min内的站立次数和中央格穿越次数。彻底清洁箱底后进行下一只小鼠测试。

悬尾实验：敞箱试验后，夹小鼠尾尖1/4处，将小鼠悬尾固定于头部距桌面5 cm处，观察其5 min内不动时间。

强迫游泳实验：悬尾实验后，将小鼠置于直径13 cm，高24 cm，注有22 ℃、10 cm深清水的透明玻璃装置中，观察其在6 min内、后4 min的不动时间。

行为学观察之后摘眼球取血，3 000 r/min离心20 min，分离血清，-80 ℃冷冻保存，采用酶联免疫法测定血清中5-HT、DA、CORT水平。

采用SPSS 13.0软件进行处理，结果均以x±s表示。多组间比较，方差齐时用单因素方差分析，多重比较采用LSD-t检验；方差不齐时采用Welch检验，多重比较采用Tambane’s T2检验。

与模型组比较，生五味子可以增加抑郁小鼠敞箱站立次数（P＜0.01）、敞箱中央格穿越次数（P＜0.05），降低悬尾不动时间、强迫游泳不动时间（P＜0.05）；酒五味子和醋五味子均对抑郁小鼠敞箱站立次数、敞箱中央格穿越次数无影响，但可显著降低悬尾不动时间、强迫游泳不动时间（P＜0.05），见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 五味子不同炮制品对抑郁小鼠行为学的影响 Table 1 Effect of Schisandrae Fructusprocessed products on behavior of depressive mice (x±s, n=10) 组别 剂量/(g·kg-1) 敞箱站立次数/次 敞箱中央格穿越次数/次 悬尾不动时间/s 强迫游泳不动时间/s 对照 - 23.00±3.024 10.00±3.817 95.75±4.590 122.88±9.403 模型 - 6.13±1.885## 4.63±3.159## 137.75±14.300# 168.88±15.009# 氟西汀 0.003 3 18.28±2.200** 8.13±2.900* 94.00±6.459* 108.50±6.525* 生五味子 1.0 13.88±1.553** 8.13±2.642* 88.75±6.018* 90.75±13.403* 酒五味子 1.0 6.50±1.927 4.75±2.121 101.00±7.521* 106.50±6.024* 醋五味子 1.0 6.75±5.036 5.88±1.808 100.13±10.656* 116.88±8.442* 与对照组比较：#P＜0.05 ##P < 0.01；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 #P < 0.05 ##P < 0.01 vs control group; *P < 0.05 **P < 0.01 vs model group

表 1 五味子不同炮制品对抑郁小鼠行为学的影响 Table 1 Effect of Schisandrae Fructusprocessed products on behavior of depressive mice

与模型组比较，生五味子可显著升高抑郁小鼠血清中5-HT、DA水平，降低CORT水平（P＜0.01）；酒五味子和醋五味子可显著升高抑郁小鼠血清中DA水平，降低CORT水平（P＜0.05、0.01），对血清中5-HT水平无影响，见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 五味子不同炮制品对抑郁小鼠血液指标影响 Table 2 Effect of Schisandrae Fructusprocessed products on blood indexes of depressive mice (x±s，n=10) 组别 剂量/(g·kg-1) 5-HT/(ng·mL-1) DA/(ng·mL-1) CORT/(ng·mL-1) 对照 - 17.86±0.703 65.21±3.155 18.22±1.299 模型 - 10.77±0.590## 51.15±2.225## 29.59±1.901## 氟西汀 0.003 3 16.74±1.849** 77.99±4.554** 16.37±2.990** 生五味子 1.0 14.35±1.593** 68.82±4.865** 16.64±1.175** 酒五味子 1.0 11.53±0.230 67.94±2.536** 11.68±1.158** 醋五味子 1.0 10.12±0.519 61.44±2.441** 22.10±1.490* 与对照组比较：#P＜0.05 ##P < 0.01；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 #P < 0.05 ##P < 0.01 vs control group; *P < 0.05 **P < 0.01 vs model group

表 2 五味子不同炮制品对抑郁小鼠血液指标影响 Table 2 Effect of Schisandrae Fructusprocessed products on blood indexes of depressive mice

参照文献报道对实验结果进行综合分析^[10]。设定行为学指标和血液指标的权重系数均为0.5。敞箱站立次数、敞箱中央格穿越次数、血清中5-HT和DA水平为正向指标，设定疗效率（V）=（Y-M）/ M×100%；悬尾不动时间、强迫游泳不动时间、血清中CORT水平若为负向指标，设定疗效率（V）=（M-Y）/M×100%（Y：给药组指标值，M：模型组指标值），见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 五味子不同炮制品对抑郁小鼠的疗效率 Table 3 Therapeutic efficiency of of Schisandrae Fructusprocessed products on depressive mice 组别 行为学指标 血液生化指标 敞箱站立次数 敞箱中央格穿越次数 悬尾不动时间 强迫游泳不动时间 5-HT DA CORT 生五味子 126.43 75.59 35.57 46.26 33.24 34.55 43.76 酒五味子 6.04 2.59 26.68 36.94 7.06 32.83 60.53 醋五味子 10.11 27.00 27.31 30.79 -6.04 20.12 25.31

表 3 五味子不同炮制品对抑郁小鼠的疗效率 Table 3 Therapeutic efficiency of of Schisandrae Fructusprocessed products on depressive mice

以疗效率设立评价等级和等级的权重系数，见表 4。每个给药组的综合权重评价分值为P，P=[∑（等级个数×等级权重系数）]×A指标权重+[∑（等级个数×等级权重系数）]×B指标权重，结果见表 5。

表 4(Table 4)

表 4 评价等级 Table 4 Levels of evaluation 疗效率 ＞70% 70%~40% 40%~10% ＜10% 评价等级 显著有效 有效 显效 无效 权重系数 0.4 0.3 0.2 0.1

表 4 评价等级 Table 4 Levels of evaluation

表 5(Table 5)

表 5 综合权重评价分值 Table 5 Comprehensive weight evaluation score 组别 行为学指标 血液指标 P值 敞箱站立次数 水平穿越次数 悬尾不动时间 强迫游泳不动时间 5-HT DA CORT 生五味子 显著有效 显著有效 显效 有效 显效 显效 有效 2.0 酒五味子 无效 无效 显效 显效 无效 显效 有效 1.2 醋五味子 显效 显效 显效 显效 无效 显效 显效 1.3

表 5 综合权重评价分值 Table 5 Comprehensive weight evaluation score

根据综合分值P的高低，对评价对象进行分析和评价，结果综合权重评价分值分别为＞1.19%、1.19%~0.84%、＜0.84%，等级分别为好、中等、一般。结果提示五味子不同炮制品均有一定的抗抑郁作用。

本实验对小鼠进行慢性不可预知性应激，结果显示与对照组比较，模型组小鼠敞箱站立次数、敞箱中央格穿越次数降低，悬尾、强迫游泳时间不动时间升高，表明小鼠对陌生环境探索兴趣降低，紧张程度升高，试图逃离困境和束缚的时间升高，表现出抑郁行为，且模型组小鼠血清中5-HT、DA水平升高，CORT水平下降，表明实验所用造模方法可以成功复制抑郁模型。

脑中单胺类神经递质及其受体能够调节机体的精神活动，单胺类神经递质分泌减少是抑郁症发病机制之一。另有研究表明，下丘脑-垂体-外周内分泌腺系统（HPA轴）功能亢进，可引起外周血糖皮质激素水平升高，从而引发抑郁症^[11]，临床常用的抗抑郁药可增加神经元细胞突触间神经递质的利用率或降低HPA轴兴奋性，从而治疗抑郁症。单胺类神经递质的释放与中枢神经有关，且有研究表明，海马神经元细胞增殖能力直接影响HPA轴亢奋或抑制^[12]。本实验结果显示，五味子不同炮制品可以增加脑内单胺类神经递质的分泌，降低HPA轴兴奋性，从而不同程度地改善小鼠的抑郁症状，且有文献报道称五味子对中枢神经系统的调节作用，对神经细胞的营养作用^[13]，因此本研究也为五味子不同炮制品抗抑郁作用机制研究提供了参考。