宁泌泰胶囊是治疗泌尿生殖系感染的经典专利苗药，具有清热解毒、利湿通淋的功效，用于湿热蕴结所致淋证，症见小便不利、淋漓涩痛、尿血以及下尿路感染、慢性前列腺炎见上述证候者。本研究通过对宁泌泰胶囊在体外抗炎作用机制进行探索，为宁泌泰胶囊在临床上用于慢性前列腺炎的治疗提供理论依据。

雄性昆明种小鼠，体质量20～22 g，购自中国医学科学院实验动物研究所动物繁育中心，合格证号SCXK（京）2012-0001。

角叉菜胶（批号CAS9000-07-1）、吲哚美辛（批号CAS53-86-1）购自Sigma-Aldrich。MH培养基购自BD公司。RAW264.7细胞购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心。FBS血清、PRIM1640培养基购自Gibco公司。CCK8试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司。巴豆油、LPS、PDTC、pGL3-NFκB质粒、pGL3-CMV质粒来自于中国医学科学院药物研究所馈赠。宁泌泰胶囊购自贵阳新天药业股份有限公司，规格0.38 g/粒，批号为140802。

昆明种小鼠适应性饲养1周后，随机分为模型组、吲哚美辛（5 mg/kg）组以及宁泌泰胶囊（0.5、1.5、4.5 g/kg，相当于临床等效剂量的1、3、9倍）组，每组8只，ig给药，1次/d，给药容积10 mL/kg。模型组给予0.9%生理盐水。连续给药3 d。末次给药后1 h于小鼠右后肢足趾注射1%角叉菜胶致炎，0.05 mL/只。造模5 h后脱颈椎处死小鼠，于踝关节处剪下左右后肢，称定质量，计算肿胀率、抑制率。

肿胀率＝（右后足质量－左后足质量）/左后足质量

抑制率＝（模型组平均肿胀率－给药组平均肿胀率）/模型组平均肿胀率

昆明种小鼠适应性饲养1周后，随机分组，每组8只，分别为模型组、吲哚美辛（5 mg/kg）组以及宁泌泰胶囊（0.5、1.5、4.5 g/kg，相当于临床等效剂量的1、3、9倍）组，ig给药，1次/d，给药容积10 mL/kg。模型组给予0.9%的生理盐水。连续给药3 d。末次给药1 h后，于小鼠右耳两面涂抹2%巴豆油丙酮溶液20 µL致炎，左耳不涂为正常耳。4 h后处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用打孔器在同一部位取下耳片，称定质量，以左右耳片质量差值表示炎性肿胀程度，计算肿胀率和抑制率。

肿胀率＝（右耳质量－左耳质量）/左耳质量

抑制率＝（模型组平均肿胀率－给药组平均肿胀率）/模型组平均肿胀率

RAW264.7细胞在PRIM1640＋10% FBS培养基中培养至对数生长期，然后接种于96孔板，细胞数为1×10³/孔，加入25、50、100 µg/mL宁泌泰胶囊内容物、DMSO对照的新鲜培养基，培养48、72 h。每组设3个平行孔，37 ℃培养结束后，每孔加CCK8试剂10 μL，继续培养4 h，酶标仪检测定450 nm波长处吸光度（A）值，以DMSO处理的细胞为对照组，计算药物对细胞的相对增殖率。

相对增殖率＝给药组平均A值/对照组平均A值

待RAW264.7细胞长至对数生长期，胰酶消化至48孔板中。第2天用将pGL3-NFκB质粒、pGL3- CMV质粒通过lipO2000试剂转染。转染3 h后，按照不同组别加入相应培基和含不同质量浓度宁泌泰胶囊内容物或PDTC的培养基。对照组和模型组加入含10% FBS的培养基。PDTC组加入含1 µmol/L PDTC的培养基。待测化合物组分别加入含100、50、25 µg/mL宁泌泰胶囊内容物的培养基。24 h后加入LPS 1 mg/mL继续培养24 h。实验结束时，按照双荧光素酶报告基因检测试剂盒进行检测。

采用SPSS 18.0软件进行统计分析。数据经过方差齐性检验，用x ± s表示，总体间用单因素资料方差分析，两组间比较采用t检验。

与模型组比较，吲哚美辛（5 mg/kg）对角叉菜胶致小鼠足肿胀具有非常明显的抑制作用（P＜0.01），宁泌泰胶囊（4.5 g/kg）对小鼠足肿胀具有明显的抑制作用（P＜0.05）。见表 1。

表 1 (Table 1)

表 1 宁泌泰胶囊对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响（x ± s，n = 8） Table 1 Effects of Ningmitai Capsules on carrageenan-induced paw edema of mice (x ± s,n = 8 ) 组别 剂量/(g·kg−1) 肿胀率/% 抑制率/% 模型 — 44.24±4.35 — 吲哚美辛 0.005 23.08±5.85** 47.83 宁泌泰胶囊 0.5 39.83±4.89 9.96 1.5 36.52±3.50 17.44 4.5 31.63±7.83 28.49  与模型组比较：P＜0.05 **P＜0.01   P <0.05 **P <0.01 vs model group

表 1 宁泌泰胶囊对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响（x ± s，n = 8） Table 1 Effects of Ningmitai Capsules on carrageenan-induced paw edema of mice (x ± s,n = 8 )

与模型组比较，吲哚美辛（5 mg/kg）对巴豆油致小鼠耳肿胀具有非常明显的抑制作用（P＜0.01），宁泌泰胶囊（4.5 g/kg）对小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用（P＜0.05）。见表 2。

表 2 (Table 2)

表 2 宁泌泰胶囊对巴豆油致小鼠耳部急性肿胀的影响（x ± s，n = 8） Table 2 Effects of Ningmitai Capsules on oleum crotonis- induced ear edema of mice (x ± s,n = 8 ) 组别 剂量/(g·kg−1) 肿胀率/% 抑制率/% 模型 — 10.70±0.88 — 吲哚美辛 0.005 7.89±0.74** 26.29 宁泌泰胶囊 0.5 10.71±0.94 0 1.5 10.14±0.61 5.26 4.5 8.79±1.19 17.86  与模型组比较：P＜0.05 **P＜0.01   P <0.05 **P <0.01 vs model group

表 2 宁泌泰胶囊对巴豆油致小鼠耳部急性肿胀的影响（x ± s，n = 8） Table 2 Effects of Ningmitai Capsules on oleum crotonis- induced ear edema of mice (x ± s,n = 8 )

25、50、100 µg/mL宁泌泰胶囊内容物加入RAW264.7细胞，作用48、72 h后对RAW264.7细胞没有毒性。见表 3。

表 3 (Table 3)

表 3 宁泌泰胶囊对RAW264.7细胞的细胞毒作用（x ± s，n = 3） Table 3 Effects of Ningmitai Capsules on cytotoxicity of RAW264.7 cell (x ± s,n = 3 ) 组别 剂量/ (µg·mL−1) A值 相对增殖率/% 48 h 72 h 48 h 72 h 对照 — 3.19±0.07 3.28±0.04 100.00 100.00 宁泌泰胶囊 25 3.17±0.03 3.36±0.05 100.25 102.70 50 3.16±0.02 3.27±0.07 100.29 102.84 100 3.15±0.02 3.18±0.05 98.77 96.83

表 3 宁泌泰胶囊对RAW264.7细胞的细胞毒作用（x ± s，n = 3） Table 3 Effects of Ningmitai Capsules on cytotoxicity of RAW264.7 cell (x ± s,n = 3 )

双荧光素酶报告基因检测结果显示：50、100 µg/mL宁泌泰胶囊内容物对NF-κB的转录激活具有明显的抑制作用（P＜0.01）。见表 4。

表 4 (Table 4)

表 4 宁泌泰胶囊对NF-κB的影响（x ± s，n = 3） Table 4 Effects of Ningmitai Capsules on NF-κB (x ± s,n = 3) 组别 剂量/(µg·mL−1) 荧光值 对照 — 23.67±0.03 模型 1 mg·mL−1 45.67±0.07** PDTC 1 µmol·L−1 23.33±0.04△△ 宁泌泰胶囊 25 40.62±0.05 50 26.22±0.02△△ 100 22.58±0.01△△  与对照组比较：**P＜0.01；与模型组比较：△△P＜0.01  **P <0.01 vs control group; △△P <0.01 vs model group

表 4 宁泌泰胶囊对NF-κB的影响（x ± s，n = 3） Table 4 Effects of Ningmitai Capsules on NF-κB (x ± s,n = 3)

宁泌泰胶囊由四季红、白茅根、大风藤、三颗针、仙鹤草、芙蓉叶、连翘经粉碎或水煎煮后浓缩并经混匀、干燥、粉碎后所得的复方胶囊，并不包含其他辅料，具有清热解毒、利湿通淋的功效，用于下尿路感染、慢性前列腺炎等疾病的治疗^[3]。

角叉菜胶致小鼠足肿胀模型是一个评价药物抗炎作用的经典炎症模型^[4]。巴豆油致小鼠耳肿胀实验也是常用的急性炎症模型，其中巴豆油的主要成分佛波酯也是一种强的致炎物质，常被用来制造各种炎症模型^[5]。本研究采用角叉菜胶致小鼠足肿胀模型和巴豆油致小鼠耳肿胀模型评价了宁泌泰胶囊的抗炎作用。结果表明宁泌泰胶囊（4.5 g/kg）组对小鼠足肿胀和耳肿胀均具有明显的抑制作用（P＜0.05），说明4.5 g/kg宁泌泰胶囊具有明显抗炎作用。

核转录因子-κB（NF-κB）是目前发现的与炎症有关的重要转录因子之一，广泛存在于真核细胞内，被公认为是参与炎症过程的重要信号传导通路之一^{[6, 7]}。NF-κB是一个多功能核转录因子，具有广泛的生物学活性，激活后可促进细胞因子、黏附分子、趋化因子等基因转录，在炎症反应中起重要作用^[8]。本研究采用的双荧光素酶报告基因实验结果表明宁泌泰胶囊可以明显抑制NF-κB基因的转录激活，表明宁泌泰胶囊可以通过NF-κB通路来抑制炎症过程，但其具体作用机制尚需进一步研究。

综上所述，本研究证实了宁泌泰胶囊具有明显的抗炎作用，为其临床应用提供了理论依据，但其抗炎作用机制有待进一步深入研究。