复方盐酸林可霉素滴鼻剂是我院新研发的医院制剂，处方中含有盐酸林可霉素和利巴韦林两种主要成分，具有抗菌、消炎、抗病毒的功效，临床主要用于治疗急慢性鼻炎等。制剂的原质量标准采用HPLC法分别对复方盐酸林可霉素滴鼻剂中盐酸林可霉素和利巴韦林进行定量检测，但方法繁琐、费时，无法满足医院制剂快速检验的要求。为了更加快速、准确地对制剂进行质量控制，本实验建立了HPLC梯度洗脱法对复方盐酸林可霉素滴鼻剂中盐酸林可霉素和利巴韦林同时定量的检测方法，并取得令人满意的结果。

LC-2010A高效液相色谱仪，紫外检测器，LC Solution工作站（日本岛津公司），FE20K酸度计（梅特勒-托利多公司），XS型分析天平（梅特勒-托利多公司）。

盐酸林可霉素对照品（中国食品药品检定研究院，批号130432-201109，质量分数85.4%），利巴韦林对照品（中国食品药品检定研究院，批号629-200202，质量分数100.0%），甲醇（天津市康科德科技有限公司，色谱纯），四硼酸钠（天津市劢特吉尔环保技术研究所，色谱纯），磷酸（天津市科密欧化学试剂开发中心，色谱纯）。复方盐酸林可霉素滴鼻剂由天津市儿童医院制剂室提供，规格10 mL/瓶；水为纯化水，天津市儿童医院制剂室自制。

精密称取105 ℃干燥至恒定质量的盐酸林可霉素对照品10.14 mg、利巴韦林对照品5.08 mg，置50 mL量瓶中，加水至刻度，超声5 min使溶解，取出，加水至刻度，制成含盐酸林可霉素202.8 μg/mL、利巴韦林101.6 μg/mL的混合对照品溶液，备用。

精密量取复方盐酸林可霉素滴鼻剂5 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密吸取5 mL置于50 mL量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，备用。

按照处方比例，称取除盐酸林可霉素和利巴韦林之外的氯化钠、羟苯乙酯等其他辅料，加水，即得。

Shim-pack VP-ODS C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-0.05 mol/L四硼酸钠溶液（用磷酸调pH值至6.0）（B）；梯度洗脱，程序分别为1～7 min，5%A，7～8 min，5%～50%A，8～20 min，50%A；柱温：30 ℃；体积流量：1 mL/min；检测波长：210 nm；进样量：10 μL。理论板数按盐酸林可霉素、利巴韦林计分别为40 375、4 393，色谱峰与其他峰分离度大于1.5，色谱图见图 1。可见阴性对照中的辅料对样品测定无干扰，样品主峰与对照品主峰的保留时间一致。

1-利巴韦林 2-盐酸林可霉素1-ribavirin 2-lincomycin hydrochloride图 1 混合对照品（A）、复方盐酸林可霉素滴鼻剂（B）和阴性对照（C）的HPLC图谱Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A),Compound Lincomycin Hydrochloride Nasal Drops (B),and negative sample (C)

分别精密量取含盐酸林可霉素202.8 μg/mL、利巴韦林101.6 μg/mL混合对照品溶液，依次注入高效液相色谱仪1、2、4、6、8、10 μL，进样测定。以进样质量为横坐标，测得的峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，求得回归方程。盐酸林可霉素：Y＝597 065.05 X－2 517.26（r＝0.999 5）；利巴韦林：Y＝2 391 976.43 X＋19 459.73（r＝0.999 6）。结果表明，盐酸林可霉素和利巴韦林分别在0.202 8～2.028 0 μg和0.101 6～1.016 0 μg与峰面积具有良好的线性关系。

取含盐酸林可霉素202.8 μg/mL、利巴韦林101.6 μg/mL混合对照品溶液，连续进样6次，每次10 μL，测定峰面积，结果盐酸林可霉素和利巴韦林的峰面积的RSD值分别为0.85%、0.61%。

取批号为20140701样品6份，制备供试品溶液，进样分析，进样量为10 μL，计算质量浓度，结果盐酸林可霉素、利巴韦林质量浓度的RSD值分别为1.16%、0.76%。

取批号为20140701样品适量，制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12 h进样10 μL，测定峰面积，计算得盐酸林可霉素峰和利巴韦林峰面积值的RSD值分别为0.91%、0.64%，表明供试品溶液在12 h内测定的结果稳定。

按照处方配比和工艺，分别精密称取盐酸林可霉素、利巴韦林以及适量辅料，分别配制相当于处方量80%（含盐酸林可霉素3.95 mg、利巴韦林2.05 mg）、100%（含盐酸林可霉素4.94 mg、利巴韦林2.56 mg）、120%（含盐酸林可霉素5.93 mg、利巴韦林3.07 mg）的模拟样品各3份，制备供试品溶液；另取105 ℃干燥至恒定质量的盐酸林可霉素和、利巴韦林对照品适量，制备混合对照品溶液。进样测定，外标法计算回收率，结果盐酸林可霉素、利巴韦林的平均回收率分别为100.54%、99.95%，RSD值分别为1.11%、1.45%（n=9）。

取3批复方盐酸林可霉素滴鼻剂样品，制备供试品溶液。分别精密量取供试品溶液和混合对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定盐酸林可霉素、利巴韦林峰面积，计算样品中各成分的质量浓度，结果见表 1。本制剂标示量为含盐酸林可霉素20 mg/mL、利巴韦林10 mg/mL，测定结果符合在标示量95%～105%的标准。

表 1(Table 1)

表 1 复方盐酸林可霉素滴鼻剂中盐酸林可霉素、利巴韦林的测定结果(n=3) Table 1 Determination of lincomycin hydrochloride and ribavirin in Compound Lincomycin Hydrochloride Nasal Drops (n=3) 批 号 盐酸林可霉素 利巴韦林 质量浓度/(mg·mL−1) RSD/% 质量浓度/(mg·mL−1) RSD/% 20140701 19.83 0.06 9.89 0.15 20140702 20.08 0.18 9.77 0.11 20140801 20.15 0.03 9.97 0.04

表 1 复方盐酸林可霉素滴鼻剂中盐酸林可霉素、利巴韦林的测定结果(n=3) Table 1 Determination of lincomycin hydrochloride and ribavirin in Compound Lincomycin Hydrochloride Nasal Drops (n=3)

本制剂中两种主要成分盐酸林可霉素和利巴韦林在水中均易溶解，且本制剂制备时用纯化水制成，故对照品用纯化水溶解。

盐酸林可霉素和利巴韦林的测定方法中检测波长分别为214、207 nm^[1]，考虑到207 nm更接近紫外末端吸收，且210 nm作为盐酸林可霉素和利巴韦林HPLC测定波长均有文献报道，不影响检测结果^{[2, 3]}，故本实验选择210 nm作为检测波长。

在筛选流动相试验中发现，同时使用甲醇-水（5∶95）作为流动相时两组分保留时间接近，分离度较差，相互干扰，故采用甲醇-0.05 mol/L四硼酸钠溶液梯度洗脱法，两组分相对保留时间适宜，分离度好，并可得到较好的峰型。pH值过低会导致盐酸林可霉素峰产生拖尾现象，故将四硼酸钠溶液用磷酸调pH值至6.0^[4]。