马齿苋Portalaca oleracea L.为马齿苋科马齿苋属植物，又名长寿菜，是我国传统的药食两用植物，具有清热解毒、凉血止血的功能^[1]。《中国药典》2010年版一部关于马齿苋药材的质量标准只规定了性状鉴别、理化鉴别、显微鉴别、薄层鉴别和水分检查项，未见马齿苋药材中有效成分的测定项^[1]。马齿苋中化学成分类型众多，除有机酸、萜类、甾体、多糖外，还含有黄酮、香豆素、酚酸、酚性生物碱等酚类成分^[2]。多酚作为马齿苋中有效部位之一，具有清除自由基、抗脂质过氧化和神经保护等作用^[3]。福林酚（Folin-Ciocalteu，FC）比色法由于显色明显、误差小、稳定性高等优点^[4]，已应用于多种药材和水果中的多酚的测定^{[5, 6, 7, 8]}。本实验通过优化FC法反应条件，建立了马齿苋中多酚的测定方法，并对不同产地的马齿苋药材中多酚进行了比较，旨在为马齿苋药材的质量评价提供参考。

TU—1800紫外分光光度仪（北京普析通用公司），BL—100型高速多功能粉碎机（浙江市永康市松青五金工具厂），85—2型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器有限公司），KQ5200型超声波清洗器（昆山市仪器厂），AY—120分析天平（日本岛津），YP402N普通电子天平（上海仪器厂）。

FC试剂购自上海荔达生物科技有限公司；没食子酸对照品购自中国食品药品检定研究院，批号110831-200803；甲醇和碳酸钠均为分析纯，购自济南诚言化学试剂有限公司；马齿苋药材由山东大学药学院生药学教研所向兰教授鉴定。

将马齿苋药材用粉碎机粉碎，过20目筛。称取药材1 g，精密称定，加入80%甲醇10倍量，超声提取3次（功率200 W，频率45 kHz)，15 min/次，滤过，滤液合并后用80%甲醇定容至50 mL，即得。

取没食子酸对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成1 mg/mL的溶液。精密量取该对照品溶液适量，稀释至0.4 mg/mL，备用。

精密量取马齿苋药材供试品溶液和0.4 mg/mL没食子酸对照品溶液100 μL，分别加入FC试剂1 mL和20% Na₂CO₃ 2 mL，反应30 min后，在400～900 nm波长进行全波长扫描。结果表明马齿苋药材供试品溶液和没食子酸对照品溶液在760 nm处均有最大吸收，因此选用760 nm作为测定的最大吸收波长。

精密量取马齿苋供试品溶液100 μL，置于10 mL量瓶中，加入0.2 moL/L FC试剂1.5 mL，摇匀，静置4～5 min，分别加入20% Na₂CO₃溶液0.5、0.75、1.5、3.0、4.5 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，置于室温反应30 min后在760 nm测定吸光度，结果见表 1。可见当20% Na₂CO₃加入量为0.75 mL时，吸光度值最大，因此，确定20% Na₂CO₃溶液最佳加入量为0.75 mL。

表 1(Table 1)

表 1 20% Na2CO3加入量考察 Table 1 Amount of 20% Na2CO3 20% Na2CO3 /mL 吸光度值 0.5 0.335 0.75 0.345 1.5 0.326 3.0 0.308 4.5 0.301

表 1 20% Na2CO3加入量考察 Table 1 Amount of 20% Na2CO3

精密量取马齿苋供试品溶液100 μL，置于10 mL量瓶中，分别加入0.2 moL/L FC试剂0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，摇匀，静置4～5 min，加入20% Na₂CO₃溶液0.75 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，置于室温反应30 min后在760 nm测定吸光度，结果见由表 2。可见当加入FC试剂2 .0 mL时吸光度值达到最大值并趋于稳定，故选择2.0 mL为FC试剂的最佳用量。

表 2(Table 2)

表 2 FC试剂最佳用量的考察 Table 2 Amount of FC reagent FC试剂用量 /mL 吸光度值 0.5 0.255 1.0 0.329 1.5 0.356 2.0 0.371 2.5 0.375

表 2 FC试剂最佳用量的考察 Table 2 Amount of FC reagent

精密量取马齿苋供试品溶液100 μL，置于10 mL量瓶中，摇匀，加入0.2 moL/L FC试剂2.0 mL，摇匀，静置4～5 min，加入20% Na₂CO₃溶液0.75 mL，摇匀，在760 nm测定室温下吸光度随时间的变化，结果见图 1。结果显示，供试品溶液和FC试剂在室温下反应30 min后，吸光度值达到最大值且趋于稳定，故最佳反应时间定为30 min。

图 1 最佳反应时间考察Fig. 1 Optimum reaction time

精密量取1.0 mg/mL没食子酸对照品溶液，依次稀释至质量浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL，分别精密量取上述溶液100 μL于10 mL棕色量瓶中，加入FC试剂2 mL充分摇匀，放置4～5 min，加入20% Na₂CO₃溶液0.75 mL，加去离子水至刻度，摇匀后室温放置30 min，在760 nm波长下测其吸光度值。以吸光度值为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果表明没食子酸在0.1～1.0 mg/mL与吸光度值呈良好的线性关系，其线性回归方程为Y＝1.096 1 X＋0.044 7（R²=0.999 6）。

精密量取马齿苋药材（批号20100501）供试品溶液100 μL，按照2.3项下方法处理，在760 nm下测定吸光度值，连续测定6次，结果总多酚吸光度的RSD值为0.87%。

精密量取马齿苋药材（批号20100501）供试品溶液100 μL，按照2.3项下方法处理，每隔2 h在760 nm下测定吸光度值，共测定6次，结果总多酚吸光度的RSD值为0.90%。结果表明供试品溶液在12 h内稳定。

取马齿苋药材（批号20100501）6份，制备供试品溶液，按照2.3项下方法处理，计算总多酚平均质量分数为16.44 mg/g，RSD值为3.11%。

取马齿苋药材（批号20100501）6份，每份约0.5 g，精密称定，分别加入2.02 mg/mL没食子酸对照品溶液各4 mL，制备供试品溶液，按照2.3项下方法处理，测定，计算得总多酚的平均回收率为102.45%，RSD值为2.50%。

取不同产地的马齿苋药材，平行3份样品，制备供试品溶液，按照2.3项下方法处理，测定，结果见表 3。11批马齿苋药材中总多酚质量分数最高为17.37 mg/g，最低为6.30 mg/g。

表 3(Table 3)

表 3 不同产地马齿苋药材中总多酚的测定结果（n=3） Table 3 Determination of total polyphenols in Portulaca oleracea from various habitats (n=3) 序号 采购（集）地 采购（集）时间 总多酚/(mg∙g−1) RSD/% 1 辽宁省大连市保健大药房 2007-03 17.37±0.22 1.27 2 山东大学药学院生药所药圃（采集） 2006-08 16.49±0.53 3.24 3 济南市建联中药店（批号20100501） 2010-05 16.44±0.51 3.11 4 安徽省毫州市药市 2006-11 15.71±0.09 0.57 5 内蒙谷包头市天方医药有限公司 2006-03 14.09±0.53 3.78 6 新疆伊犁察布查尔县平原林场（采集） 2007-07 13.33±0.44 3.31 7 济南人川药业有限公司 2006-01 10.63±0.12 1.11 8 济南绿色药业有限公司 2010-04 10.53±0.20 1.87 9 新疆乌鲁木齐新特药业公司 2007-03 9.60±0.10 1.05 10 济南市建联中药店（2005） 2005-03 7.24±0.19 2.56 11 吉林省长春市国信大药房 2007-03 6.30±0.12 1.94

表 3 不同产地马齿苋药材中总多酚的测定结果（n=3） Table 3 Determination of total polyphenols in Portulaca oleracea from various habitats (n=3)

传统中药马齿苋具有清热解毒、凉血止血的功效，我国历代药典均有收载。多酚是马齿苋药效物质基础的重要组成部分，建立其测定方法对于马齿苋药材的质量控制有着重要意义。

本实验通过优化FC比色法的最佳反应条件，建立了马齿苋药材中总多酚的测定方法；在此基础上，通过考察精密度、稳定性、重复性和回收率评价了该方法。FC比色法简单、快速、稳定、准确，可用于马齿苋总多酚的测定。

本实验以总多酚为指标，考察了不同产地的马齿苋药材，结果表明不同产地马齿苋药材多酚含量差异较大，凸显了对马齿苋药材进行质量控制的重要性。基于以上结果，建议马齿苋药材中总多酚含量以没食子酸计不低于6 mg/g。此外马齿苋药材中总多酚的差异是否与不同采收季节和不同的产后加工方式有关还有待深入研究。