丁酸氯维地平为超短效吡啶类钙通道阻滞剂，由英国阿斯利康公司研制并于2008年8月经美国FDA批准上市，主要用于急性高血压的治疗，以及心脏手术、经皮冠状动脉介入治疗等手术后的血压抑制^[1]。根据丁酸氯维地平的结构、性质以及在原料药及脂肪乳制备过程中易发生水解脱羧，推测其可能产生降解杂质4-(2',3'-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯。因此，设计了该化合物的合成，并利用MS和¹H-NMR确证结构，通过HPLC进一步证实该化合物为丁酸氯维地平中的主要杂质之一，这对建立和完善丁酸氯维地平分析方法，制定已知杂质限度，提高质量标准，具有重要意义。根据目标化合物的结构，课题组以2,3-二氯苯甲醛为起始原料经缩合、环合、水解反应合成了目标化合物4-(2',3'-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯，合成路线见图 1。

图 1 目标化合物的合成路线Fig. 1 Synthetic route of target compound

HP 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；6520型Accurate-Mass-Q-TOF/MS质谱仪（美国安捷伦科技公司）；Bruker 400 MHz核磁共振仪（德国Bruker公司）；2,3-二氯苯甲醛（浙江洪波化工有限公司，质量分数＞95%）；其他所用试剂均为国产分析纯。

在250 mL四口瓶中，加入2,3-二氯苯甲醛（8.76 g，0.05 mol）、乙醇80 mL、甲酸324 mg、哌啶450 mg，乙酰乙酸叔丁酯（9.48 g，0.06 mol），20 ℃控温下搅拌3 h。旋蒸至干，加入醋酸乙酯100 mL萃取，水洗（80 mL×1），氯化钠饱和溶液洗（80 mL×1），取有机层，无水硫酸钠干燥。次日，滤过，滤液蒸干，得化合物2（14.8 g），mp 97～99 ℃，收率92%。

在250 mL四口瓶中，加入化合物1（14.8 g，0.046 mol）、3-氨基丁烯酸甲酯（6.9 g，0.06 mol）、乙醇60 mL，搅拌，45 ℃下反应4 h。反应液蒸干，粗品经快速制备液相色谱分离，石油醚-醋酸乙酯（2∶1）洗脱，得化合物2（5 g），mp 154～157 ℃，收率26%。

在100 mL四口瓶中，加入化合物2（5 g，0.012 mol）、甲酸20 mL和氯仿30 mL的混合液，45 ℃下反应12 h。将反应液转移至烧杯中，加入氯仿150 mL，用饱和碳酸钠溶液调pH值为7。分液，取有机层用氯化钠饱和溶液洗（120 mL×2），有机层无水硫酸钠干燥。次日，滤过，滤液蒸干。粗品用快速制备液相色谱分离，石油醚-二氯甲烷（3∶1）洗脱，得化合物3（0.5 g），收率为13%。HPLC归一化法测得质量分数为98.3%。分子式为C₁₅H₁₅Cl₂NO₂，ESI-MS m/z：312.054 9 [M＋H]^＋。¹H-NMR（400 Hz，CDCl₃）δ：1.692（3H，s，CH₃），2.377（3H，s，CH₃），3.466（3H，s，CH₃），4.728（1H，d，CH，J＝4.8 Hz），5.024（1H，d，CH，J＝4.8 Hz），5.137（1H，s，NH），7.101～7.240（3H，m，Ar-H）。

色谱条件：Venusil MPC₁₈色谱柱（4.6×25 mm，5 μL）；进样量为20 μL；体积流量为1 mL/min；柱温为30 ℃；流动相为甲醇-水（70∶30）。

在上述色谱条件下，化合物3的保留时间为11.058 min，丁酸氯维地平产品中杂质的保留时间为11.063 min，将化合物3加入到丁酸氯维地平中进行HPLC分析，结果显示其对应的杂质峰明显增加，即可确定化合物3即为丁酸氯维地平中主要杂质之一。见图 2。

图 2 化合物3（A）、丁酸氯维地平（B）和化合物3＋丁酸氯维地平混合物（C）的HPLC图谱Fig. 2 HPLC of compound 3 (A), cleviprex butyrate (B), and compound 3 + cleviprex butyrate (C)

本课题组对丁酸氯维地平进行了合成研究，并且得到了适合工业化生产的工艺路线^[7]。在丁酸氯维地平粗品的杂质研究中，发现LC-MS中氯维地平主峰后有一分子离子峰为312的杂质峰，根据氯维地平结构筛选，推测此杂质最有可能为4-(2',3'-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯，遂设计以上合成路线，通过合成化合物3，确定了氯维地平中对应杂质的结构，进而证明此杂质为丁酸氯维地平水解脱羧降解产物。反应或储存过程中的高温、高湿和光照会加速其降解，因此在生产过程中控制反应温度，在运输和储存丁酸氯维地平成品时，避免高温和光照，可避免该杂质的过度产生。这对在有效期内保证产品质量，避免杂质含量超标至关重要。