瑞舒伐他汀钙是降血脂类固体口服制剂瑞舒伐他汀钙片的主要成分，化学名称为双-[(E)-7-[4-(4-氟基苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]-嘧啶- 5-基](3R,5S)-3,5-二羟基庚-6-烯酸]钙盐，结构见图 1。有关物质研究作为化学药药学研究的重点，是国家药品审评过程中较为关注的一项重要技术指标。近年，国家出版、刊登了大量有关物质研究的指导原则和研究报道^{[1, 2, 3, 4]}。因此，建立良好、有效的有关物质检测方法在药物研发中非常重要。本文参照现有标准^{[5, 6, 7]}，建立了瑞舒伐他汀钙原料药中有关物质的检测方法，对杂质限度进行了修订。结果证明所制定方法合理有效，重复性好，准确度高。

图 1 瑞舒伐他汀钙的结构Fig. 1 Structure of rosuvastatin calcium

Agilent HP 1100高效液相色谱仪；XA205型电子分析天平（梅特勒-托利多公司）。

瑞舒伐他汀钙对照品（批号090701，质量分数为99.7%）、瑞舒伐他汀内酯（批号090202，质量分数为98.0%）、瑞舒伐他汀钙非对映异构体（批号090301，质量分数为99.0%）、瑞舒伐他汀钙原料药（批号分别为090901、090902、090903，规格25 kg/桶）均购自石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

Phenomenex Luna C₁₈ (2)色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为水-乙腈-1%三氟乙酸水溶液（62∶37∶1），体积流量为1.0 mL/min，柱温为40 ℃，进样量为20 μL，检测波长为242 nm。

取瑞舒伐他汀钙原料药适量，精密称定，加乙腈-水（30∶70）溶解并稀释至刻度，配成质量浓度为0.5 mg/mL供试品溶液。

精密量取0.5 mg/mL瑞舒伐他汀钙原料药供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加乙腈-水（30∶70）稀释至刻度，摇匀，即得。

称取瑞舒伐他汀钙对照品25 mg，置50 mL量瓶中，加乙腈15 mL，超声使其溶解，加水稀释至刻度，摇匀；量取此溶液10 mL置洁净的玻璃小瓶中，将小瓶于20 ℃置15 000～25 000 lx·光照下照射2 h，调节光照时间以获得等量的光降解产物Ⅰ和Ⅱ。将光照后的溶液转移至25 mL量瓶中，加乙腈5 mL振摇，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

取瑞舒伐他汀钙对照品250 mg，置量瓶中，于50 ℃加热7 d，放冷，即得。

称取约含0.5%氧化降解产物25 mg、瑞舒伐他汀内酯和瑞舒伐他汀非对映异构体对照品各10 mg，置同一50 mL量瓶中，加乙腈15 mL，超声使其溶解，加光降解产物Ⅰ和Ⅱ的储备溶液2 mL，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

精密量取系统适用性试验溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图 2。理论板数按主成分峰计算为20 577，主成分峰与最近杂质峰以及各杂质峰之间均能有效分离，分离度符合规定。

1-瑞舒伐他汀钙 2-非对映异构体 3-氧化产物 4-光降解产物Ⅰ 5-光降解产物Ⅱ 6-瑞舒伐他汀内酯 1-rosuvastatin calcium 2-non enantiomer 3-oxidation product 4-photodegradation productⅠ 5-photodegradation product Ⅱ 6-rosuvastatin lactone图 2 系统适用性试验溶液的HPLC图谱Fig. 2 HPLC chromatograms of system suitability solution

制备0.5 mg/mL瑞舒伐他汀钙原料药（批号090903）供试品溶液和1%自身对照溶液，分别进样，重复测定6次，结果见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 系统精密度试验结果 Table 1 Results of system precision test 样 品 质量分数/% RSD值/% 氧化产物 — — 内酯 0.032 12.90 光降解产物Ⅰ 0.030 0 光降解产物Ⅱ 0.030 0 非对映异构体 0.153 3.37 其他最大单杂质 0.038 10.60 总杂质 0.272 2.77

表 1 系统精密度试验结果 Table 1 Results of system precision test

平行制备6份0.5 mg/mL瑞舒伐他汀钙原料药（批号090903）供试品溶液和1%自身对照溶液，分别进样，结果见表 2。表明RSD最大值为14.1%，小于20%，提示方法精密度良好。

表 2(Table 2)

表 2 方法精密度试验结果 Table 2 Results of method precision test 样 品 质量分数/% RSD值/% 氧化产物 — — 内酯 0.028 14.4 光降解产物Ⅰ 0.030 0 光降解产物Ⅱ 0.030 0 非对映异构体 0.155 3.53 其他最大单杂质 0.038 10.60 总杂质 0.270 2.34

表 2 方法精密度试验结果 Table 2 Results of method precision test

有关物质按照瑞舒伐他汀钙1%自身对照法进行检测。因此，在1%自身对照溶液浓度的20%～200%进行线性考察。精密量取0.5 mg/mL瑞舒伐他汀钙对照品溶液2 mL，置100 mL量瓶中，加乙腈-水（30∶70）稀释至刻度，制成1%自身对照溶液浓度的200%溶液。精密移取上述溶液8、5、2、1 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈-水（30∶70）稀释至刻度，制成1%自身对照溶液浓度的160%、100%、40%、20%的溶液。将上述5个浓度溶液分别进样，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，进样质量为横坐标，进行线性回归，得方程Y＝938 127.5 X－5 326.1（r＝0.999 8）。表明瑞舒伐他汀钙在0.020 1～0.201 3 μg与峰面积有良好的线性关系。

取0.5 mg/mL瑞舒伐他汀钙原料药（批号090903）供试品溶液，放置0、1、2、4、8、10 h后分别进样，考察杂质氧化产物、内酯、光降解产物、非对映异构体、其他最大单杂和总杂的变化。结果表明，氧化产物、内酯、光降解产物、非对映异构体、其他最大单杂和总杂几乎无明显变化，表明本品溶液在10 h内稳定。

将0.5 mg/mL瑞舒伐他汀钙、氧化产物、内酯、光降解产物Ⅰ和Ⅱ和非对映异构体的对照品溶液分别逐步进行稀释，进样，记录色谱图，按信噪比3∶1测得瑞舒伐他汀钙的检测限为2.76 ng，氧化产物、内酯、光降解产物Ⅰ和Ⅱ和非对映异构体各杂质的检测限依次为1.85、1.32、1.08、1.11、2.06 ng。

参考国家药品监督管理局药品标准YBH04162008、YBH08932008以及稳定性检测结果，拟定瑞舒伐他汀钙氧化产物、内酯、非对映异构体限度均不得超过0.5%，光解产物Ⅰ、Ⅱ均不得过0.2%，其他最大单杂不得超过0.5%，总杂不得超过1.5%。

取瑞舒伐他汀钙原料药3批样品，制备供试品溶液，按上述条件进行测定，结果见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 瑞舒伐他汀钙样品有关物质测定结果 Table 3 Determination of related substances in rosuvastatin calcium samples 批号 氧化产物/% 内酯/% 光解产物Ⅰ/% 光解产物Ⅱ/% 非对映异构体/% 其他最大单杂/% 总杂质/% 090901 — 0.03 — — 0.19 0.03 0.25 090902 — 0.04 — — 0.15 0.04 0.23 090903 — 0.03 0.03 0.03 0.15 0.04 0.28

表 3 瑞舒伐他汀钙样品有关物质测定结果 Table 3 Determination of related substances in rosuvastatin calcium samples

瑞舒伐他汀钙有关物质现有测定方法中，标准YBH04162008中控制已知杂质个数为1；而YBH08932008没有控制已知杂质，且有关物质检测方法为梯度洗脱，在操作过程中容易引起基线噪声干扰；瑞舒伐他汀钙片进口注册标准JX20030283中有关物质测定方法为等度，色谱系统易操作，对2个已知杂质进行了控制。

为了更好地控制药品质量，本实验以瑞舒伐他汀钙片进口注册标准JX20030283为参考，依据《中国药典》2010年版二部附录药品杂质分析指导原则，对进口注册标准JX20030283中有关物质的个数和限度进行了修订，严格控制了氧化产物、内酯、非对映异构体、光解产物Ⅰ和Ⅱ 5个杂质。光解产物Ⅰ和Ⅱ为样品处理过程中受光照射产生，通过避光操作可以避免，因此拟定限度均不得过0.2%。为了有效防止光解产物Ⅰ和Ⅱ的产生，本测定方法采取避光操作。

本法合理严谨，方法精密度好，检测灵敏度高，因此可准确用于瑞舒伐他汀钙原料药中有关物质的检测。