硫磺熏蒸是一种传统中药材加工和养护方法，用于部分中药材的加速干燥及贮藏^[1]。2011年6月，国家食品药品监督管理总局制订了中药材及其饮片二氧化硫残留限量标准，山药、牛膝、党参等11种传统习用硫黄熏蒸的中药材及其饮片，二氧化硫残留量不得超过400 mg/kg；其他中药材及其饮片的二氧化硫残留量不得超过150 mg/kg。除了二氧化硫残留，硫磺熏蒸产生的二氧化硫，能与中药材中含酮基、羟基、酯键等成分发生化学反应，导致药材的成分在熏蒸过程中发生变化，从而影响药材和饮片的质量^{[2, 3, 4]}，其中白芍熏蒸后芍药苷降低90%以上，导致熏蒸后的白芍饮片中芍药苷不合格^[2]。我国现在黄芪产量最大的区域在甘肃定西和陇西地区，当地的药农和药商储藏前大多用硫磺熏蒸。药材市场的黄芪饮片检测发现二氧化硫残留在150 mg/kg左右^[5]。本实验参照当地熏蒸方法对黄芪药材和饮片进行硫磺熏蒸，测定熏蒸前后黄芪药材中黄酮类和皂苷类成分的变化，探讨硫磺薰蒸对黄芪药材质量的影响。

Water 高效液相色谱仪（2690型泵，996检测器，自动进样器，Empower色谱工作站）。Waters Acquity UPLC system（二元泵处理器，样品处理器，ELSD检测器）。

毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷对照品购于成都曼斯特公司（产品批号2009-A0511，HPLC法测定质量分数＞98%）；毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪皂苷I、黄芪皂苷II、黄芪皂苷III、黄芪甲苷对照品均购于天津马克生物技术有限公司（HPLC法测定质量分数＞98%）。乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）；娃哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。

4份黄芪样品于2011年12月在甘肃省采集，见表 1。样品均由中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所郭宝林研究员鉴定为蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao的根。参照当地熏蒸方法对黄芪药材和饮片进行硫磺熏蒸。取黄芪药材（饮片）5 kg，置于密封有小开口的熏箱中，放置天然硫磺50 g，使其燃烧，散发烟雾，连续熏蒸10 h。1、2号重复3次得到样品X1-1、X1-2、X1-3、X2-1、X2-2、X2-3，3、4号熏蒸1次得样品X3、X4。

表 1(Table 1)

表 1 样品采集信息 Table 1 Collected information of samples 样品编号 产地 状态 样品信息 采集时间 1 甘肃陇西首阳镇 饮片（圆切片） 栽培 2011-12-05 2 甘肃陇西首阳镇 药材（条状） 栽培 2011-12-05 3 甘肃岷县梅川镇 饮片（斜切片） 栽培 2011-12-06 4 甘肃陇西蔡子镇 饮片（斜切片） 栽培 2011-12-07

表 1 样品采集信息 Table 1 Collected information of samples

Venusil ASB色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）（Agela公司）；流动相：乙腈（A）-0.3%甲酸溶液（B）；梯度洗脱：0～10 min，18%A；10～35 min，20%A；35～52 min，24%A；52～60 min，27%A；60～65 min，34%A；65～70 min，40%A；70 min，50%A；体积流量：1.0 mL/min；检测波长：260 nm；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。对照品及样品色谱图见图 1。

1-毛蕊异黄酮苷 2-芒柄花苷 3-毛蕊异黄酮 4-芒柄花素 1-calycosin glucoside 2-ononin 3-calycosin 4-formononetin图 1 混合黄酮对照品（A）和黄芪（B）的HPLC色谱图Fig. 1 HPLC chromatograms of flavonoids mixed reference substances (A) and Astragali Radix sample (B)

分别精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素对照品适量，用甲醇溶解，摇匀，分别制成4.448、2.600、1.396、1.000 μg/mL的混合对照品溶液

取1号黄芪药材，在50 ℃下干燥3 h,，粉碎（过2号筛），精密称定1.0 g，加入100 mL甲醇，回流提取1.5 h，转移，减压浓缩，定容到10 mL量瓶中，用0.45 μm滤膜滤过，即得。

精密量取混合对照品溶液1 mL，定容至10 mL，制成贮备液；精密吸取上述混合对照品溶液5、10 μL，贮备液5、10、20 μL，注入液相色谱仪，测定。以进样质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程及其线性范围。结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 4种黄酮类成分的线性回归结果 Table 2 Linear regression results of four kinds of flavonoids 黄酮成分 回归方程 线性范围/μg r 毛蕊异黄酮葡萄糖苷 Y=9.53×105 X＋1.28×104 0.008 9～2.224 4 0.999 5 芒柄花素葡萄糖苷 Y=9.25×105 X＋1.57×104 0.005 2～1.300 0 0.999 6 毛蕊异黄酮 Y=1.23×106 X＋4.80×103 0.002 8～0.697 6 0.999 9 芒柄花素 Y=1.87×106 X＋1.25×103 0.002 0～0.500 0 0.999 9

表 2 4种黄酮类成分的线性回归结果 Table 2 Linear regression results of four kinds of flavonoids

色谱柱：Waters Acquity UPLC（150 mm×2.1 mm，1.7 μm），乙腈（A）-0.3%甲酸溶液（B）；梯度洗脱：0～4 min，20%A；4～8 min，33%A；8～11 min，41%A；11～12 min，44%A；12～14 min，45%A；14～18 min，65%A；体积流量：0.2 mL/min；柱温：30 ℃；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度70 ℃，喷雾器温度42 ℃，氮气体积流量2.07 L/min。对照品及样品色谱图见图 2。

1-黄芪甲苷 2-黄芪皂苷III 3-黄芪皂苷II 4-黄芪皂苷I 1-astragaloside IV 2-astragaloside III 3-astragaloside II 4-astragaloside I图 2 混合皂苷对照品（C）和黄芪药材样品（D）的UPLC色谱图Fig. 2 UPLC chromatograms of saponins mixed reference substances (A) and Astragali Radix (B)

分别精密称取黄芪皂苷I、黄芪皂苷II、黄芪皂苷III、黄芪甲苷对照品适量，用甲醇溶解，摇匀，分别制成19.2、4.04、1.52、1.76 μg/mL的对照品溶液。

精密称定黄芪粉末2.0 g，置于烧瓶中，加入60 mL甲醇，盖上塞子，冷浸过夜，水浴回流提取3 h，提取液回收并浓缩至干，残渣加水5 mL，微热溶解，过固相萃取柱（1 000 mg/6 mL，先用20 mL甲醇和5 mL水预处理），先用5 mL双蒸水洗涤，然后用20%甲醇溶液5 mL洗涤，弃去洗涤液。用100%甲醇20 mL洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇使其溶解并定容至5 mL量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，过0.22 μm微孔滤膜，即得。

分别吸取2、3、5、6 μL对照品溶液，注入液相色谱仪，测定。以进样质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程及其线性范围，结果见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 4种皂苷类成分的线性回归结果 Table 3 Linear regression results of four kinds of saponins 成 分 回归方程 线性范围/μg r 黄芪皂苷I Y=3.10×107 X－1.01×106 0.038 4～0.576 2 0.999 9 黄芪皂苷II Y=3.27×107 X－2.95×105 0.009 7～0.145 0 0.999 8 黄芪皂苷III Y=2.29×107 X－2.83×103 0.003 1～0.045 1 0.999 9 黄芪甲苷 Y=1.99×107 X－2.97×103 0.003 6～0.053 4 0.999 8

表 3 4种皂苷类成分的线性回归结果 Table 3 Linear regression results of four kinds of saponins

采用以上方法，对样品进行测定，采用标准曲线法计算熏蒸前后全部12个样品8种成分的含量，结果见表 4。可以看出硫磺熏过的黄芪药材中的两种黄酮苷含量有降低，毛蕊异黄酮苷在3份饮片中降低程度为12.6%～15.6%，在1份药材中降低22.1%；芒柄花苷在3份饮片中降低程度为8.8%～25.2%，在1份药材中降低10.8%。毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量略有降低或基本不变，降幅最大的是1号饮片的芒柄花素的含量，降低了9.6%；皂苷类成分中黄芪皂苷I的含量基本不变，黄芪甲苷降低幅度为2.7%～12.4%，4号黄芪饮片样品降低了12.4%；黄芪皂苷II、黄芪皂苷III含量变化有高（3号样品分别升高5.4%，7.8%）有低（2号样品分别降低9.9%，4.3%），或基本不变。如果药材样品不同测定次数之间以约5%误差来考虑的话，可以认为硫磺熏蒸后黄酮苷有降低，其余成分变化不明显。

表 4(Table 4)

表 4 黄芪药材硫磺熏蒸前后黄酮和皂苷成分的测定结果 Table 4 Determination of flavonoids and saponins in Astragali Radix before and after processed by sulfur fumigation 编 号 熏蒸 情况 黄酮/(mg·g-1) 皂苷/(mg·g-1) 毛蕊异黄酮苷 芒柄花苷 毛蕊异黄酮 芒柄花素 总和 黄芪皂苷I 黄芪皂苷II 黄芪皂苷III 黄芪甲苷 总和 1 未熏 0.503 7 0.269 7 0.048 0 0.027 0 0.849 4 0.373 5 0.087 4 0.035 0 0.031 5 0.527 3 X1-1 熏 0.436 4 0.227 3 0.045 5 0.025 9 0.735 1 0.380 7 0.084 8 0.034 8 0.030 7 0.532 1 X1-2 熏 0.412 8 0.213 5 0.044 7 0.023 4 0.694 4 0.359 7 0.088 0 0.033 8 0.029 0 0.510 5 X1-3 熏 0.426 2 0.223 6 0.045 7 0.024 0 0.719 5 0.376 4 0.085 3 0.035 9 0.0304 0.528 0 均值 0.425 1 0.221 5 0.045 3 0.0244 0.716 3 0.372 3 0.086 0 0.034 8 0.030 0 0.523 5 下降率 15.6% 17.9% 5.6% 9.6% 15.7% 0.3% 1.6% 0.6% 4.8% 0.7% 2 未熏 0.528 1 0.229 0 0.063 2 0.036 4 0.858 7 0.359 5 0.099 7 0.016 1 0.029 3 0.504 5 X2-1 熏 0.420 0 0.202 6 0.059 1 0.036 7 0.718 4 0.349 1 0.088 0 0.015 8 0.028 3 0.481 1 X2-2 熏 0.406 3 0.201 5 0.060 0 0.036 9 0.704 7 0.362 5 0.089 8 0.015 4 0.028 5 0.496 2 X2-3 熏 0.408 4 0.208 7 0.061 7 0.037 4 0.716 2 0.354 9 0.091 5 0.015 0 0.027 8 0.489 2 均值 0.411 6 0.204 3 0.060 3 0.037 0 0.713 1 0.355 5 0.089 8 0.015 4 0.028 2 0.488 8 下降率 22.1% 10.8% 4.6% -1.6% 17.0% 1.1% 9.9% 4.3% 3.8% 3.1% 3 未熏 0.452 6 0.254 2 0.174 3 0.135 4 1.016 5 0.395 7 0.097 1 0.020 4 0.026 1 0.539 3 X3 熏 0.382 5 0.190 2 0.174 1 0.128 5 0.875 3 0.401 2 0.102 3 0.022 0 0.025 4 0.550 9 下降率 15.5% 25.2% 0.1% 5.1% 13.9% -1.4% -5.4% -7.8% 2.7% -2.2% 4 未熏 0.616 1 0.263 8 0.034 9 0.013 7 0.928 5 0.183 4 0.057 7 0.011 0 0.017 0 0.269 1 X4 熏 0.538 2 0.240 5 0.034 0 0.013 4 0.828 1 0.189 1 0.057 5 0.010 5 0.014 9 0.272 0 下降率 12.6% 8.8% 2.6% 2.2% 10.8% -3.1% 0.3% 4.5% 12.4% -1.1%

表 4 黄芪药材硫磺熏蒸前后黄酮和皂苷成分的测定结果 Table 4 Determination of flavonoids and saponins in Astragali Radix before and after processed by sulfur fumigation

硫磺熏蒸后毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷含量有所降低，可能和其他苷类情况一样^{[8, 9, 10, 11, 12]}，黄酮苷在二氧化硫作用下发生了分解，也可能是其他原因所致。硫磺熏蒸对多糖含量的影响还待考察。黄芪不仅药用，食用量很大，应该禁止硫磺熏蒸，同时应当建立和引导使用适合药农和药商储藏的方法，才能根本上杜绝熏蒸现象，规范黄芪药材的质量。