栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效^[1]。栀子中主要有效成分为环烯醚萜苷类化合物^[2]，具有利胆、解热、抗炎、抗病毒、保护心脑血管等药理活性^[3]，但在体内消除快，滞留时间短，肠道内具广泛的吸收窗^{[4, 5]}，因此制备成缓释制剂可减少服用次数，提高患者顺应性，减少血药浓度的波动性，避免峰谷现象，降低药物的不良反应。本实验制备了持续释放12 h的栀子总苷缓释片，对其多组分释放度的评价方法进行了探讨。

Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司），ZRS—8G智能溶出试验仪（天津大学无线电厂），CARY300紫外分光光度计（瓦里安公司），AG285分析天平（梅特勒托利多公司）。

栀子苷（批号110749-200309，中国食品药品检定研究院）；羟异栀子苷（自制，质量分数大于98%）；京尼平龙胆二糖苷（自制，质量分数大于98%）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。栀子总苷（UV法以栀子苷计质量分数为91.2%，自制）；HPMC（K15M，批号ZB06012N01，美国陶氏公司）；MCC（PH102，批号212824109，美国FMC公司）；硬脂酸镁（批号131011，上海药用辅料厂）。

取栀子总苷192 g、HPMC 144 g、MCC 144 g，过100目筛，混匀，用95%乙醇适量润湿，制成软材，过20目筛制粒，50 ℃干燥，过18目筛整粒，加适量硬脂酸镁混匀，用12 mm浅凹冲模压制成片，即得栀子总苷缓释片。每片质量480 mg，含栀子总苷192 mg，制备3批，批号分别为1311-1、1311-2和1311-3。

Kromasil C₁₈色谱柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈（A）-0.05%三氟乙酸水溶液（B），梯度洗脱，0～15 min，95%～94%B；15～23 min，94%～90%B；23～35 min，90%～80%B；体积流量：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；检测波长：327 nm；进样量：10 μL。

精密称取羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷对照品适量，用水溶解，定容，制得含羟异栀子苷0.121 0 mg/mL、京尼平龙胆二糖苷0.215 6 mg/mL、栀子苷1.113 0 mg/mL混合对照品溶液。

取栀子总苷缓释片10片，研细，精密称取53.3 mg，置于100 mL量瓶中，加水超声10 min使溶解，加水至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜滤过，即得（相当于1片栀子总苷缓释片溶解于900 mL溶出介质中）。

按处方比例精密称取空白辅料21.3 mg，置于100 mL量瓶中，加水超声10 min使溶解，加水至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

取混合对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL置于10 mL量瓶中，加水定容，得到系列对照品溶液。按色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行回归，得线性方程。羟异栀子苷：Y=1 608 X－1.966，r=0.999 9，线性范围0.121 0～1.452 0 μg；京尼平龙胆二糖苷：Y=1 002 X－6.455，r=0.999 9，线性范围0.215 6～2.587 2 μg；栀子苷：Y=1 359 X－2.130，r=1.000 0，线性范围1.113 0～13.356 0 μg。

取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μL注入色谱仪，结果样品和对照品分离度均较好，辅料没有干扰，见图 1。

1-gardenoside 2-genipingeniobioside 3-geniposide 1-羟异栀子苷 2-京尼平龙胆二糖苷 3-栀子苷图 1 混合对照品（A）、栀子总苷缓释片（B）和阴性样品（C）的HPLC图谱Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A),GardeniaTotal Glycosides Sustained-release Tablets (B),and negative sample (C)

取混合对照品溶液0.1、0.6、1.2 mL置于10 mL量瓶中，加水至刻度。按上述色谱条件，重复进样6次，其相对保留时间稳定，记录峰面积，计算得羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷峰面积的RSD值分别为1.00%、0.67%、0.77%；0.98%、0.79%、0.63%；1.12%、0.59%、0.75%。

取批号1311-1样品制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h测定，羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷和栀子苷峰面积的RSD值分别为2.13%、2.03%、1.09%，说明供试品溶液在24 h内稳定。

取批号1311-1样品10片研细，平行制备供试品溶液6份，分别测定，记录峰面积，计算得羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷和栀子苷质量分数的RSD值分别为1.03%、1.38%、0.95%。

精密称取干燥至恒定质量的栀子总苷原料5.7、11.5、19.2 mg，按处方比例加入相应空白辅料，使栀子总苷含量相当于栀子总苷缓释片总量的30%、60%、100%，分别制备3份，置于100 mL量瓶中，制备供试品溶液，分别测定，计算得羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷的平均回收率分别为为99.53%、99.97%、100.53%，RSD值分别为0.56%、0.47%、0.22%。

取供试品溶液10 μL注入液相色谱仪，按色谱条件测定，计算各供试品溶液中羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷和栀子苷的质量浓度。

分别取栀子苷对照品溶液、供试品溶液溶液和阴性对照溶液，以试剂作为空白，在200～400 nm波长扫描，结果对照品在237.4 nm处有最大吸收，供试品溶液在236.6 nm处有最大吸收，两者均在波长237 nm左右处有最大吸收，与栀子苷的最大吸收波长接近，阴性对照溶液在237 nm处几乎无吸收，故选择237 nm作为检测波长。

精密称取栀子苷对照品，加水配成32.14 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。精密量取栀子苷对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置10 mL量瓶中，定容，同时以水做空白。照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010版一部附录VA）在237 nm波长处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标，栀子苷质量浓度为横坐标，计算得回归方程C=38.96 A－0.020 4，r=0.999 9。结果表明栀子苷在6.428～32.140 μg/mL呈良好的线性关系。

配制质量浓度分别为6.428、16.07、32.14 μg/mL栀子苷对照品溶液，每个质量浓度均配制3份溶液，平行测定吸光度，计算得RSD值分别为1.26%、1.12%、0.69%。

取批号1311-1样品制备供试品溶液，置于37 ℃水浴中，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h测定吸光度值，结果其RSD值为2.02%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

取批号1311-1样品10片研细，依照“线性关系的考察”项下方法制备供试品溶液6份，分别测定，记录吸光度值，计算得其RSD值为1.83%。

精密称取干燥至恒定质量的栀子总苷原料5.7、11.5、19.2 mg，按处方比例加入相应空白辅料，使栀子总苷含量相当于栀子总苷缓释片总量的30%、60%、100%，分别制备3份，依照“线性关系的考察”项下方法制备供试品溶液，分别测定，计算得栀子总苷回收率为102.4%，RSD值为0.12%。

取供试品溶液适当稀释，以水为空白，在237 nm波长处测定吸光度值，以栀子苷计计算栀子总苷的质量分数。

取3批栀子总苷缓释片样品，依照《中国药典》2010年版二部释放度测定法（附录XD第一法）转蓝法，转速100 r/min，溶出介质为脱气的水900 mL，溶出温度（37.0±0.5）℃。取栀子总苷缓释片6片，分别投入6个转篮内，从药片浸入溶出介质开始计时，在1、2、3、5、7、9、12 h分别取溶液5 mL，同时补充相同温度体积的水，所取溶液用0.45 μm微孔滤膜滤过，测定羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、栀子总苷的质量浓度（3批样品平均值），根据标准曲线的回归方程及累积释放度计算公式，计算各时间点的累积释放率，绘制累积释放曲线，见图 2。

图 2 栀子总苷缓释片释放曲线Fig. 2 Cumulative release curves of GardeniaTotal Glycosides Sustained-release Tablets

结果表明，栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、羟异栀子苷和栀子总苷可持续释放12 h，12 h累积释放率达到90%以上，达到了缓释制剂要求，4条释放曲线比较接近，表明各组分释放同步较好。

采用相似因子法，以栀子苷的累积释放率为参比，计算羟异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷和栀子总苷累积释放率与其相比的相似因子（f₂），f₂分别为81%、72%、91%，说明释放的同步性较好，实现均衡释放。

分别将栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、羟异栀子苷、栀子总苷的累积释放度（M_t/M_∞）或待释放度（1－M_t/M_∞）与时间（t）分别按零级方程、一级方程和Higuchi方程进行拟合，结果见表 1。结果表明栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、羟异栀子苷、栀子总苷均以按Higuchi方程拟合的相关系数最大，R²＞0.99，说明释放机制相同。

表 1(Table 1)

表 1 栀子总苷缓释片累积释放度拟合方程 Table 1 Cumulative release rate-time model fitting of GardeniaTotal Glycosides Sustained-release Tablets 指 标 零级释放方程 一级释放方程 Higuchi方程 栀子苷 Mt/M∞=6.267 t＋26.06 （R²=0.940） (1－Mt/M∞)=4.622－0.220 t （R²=0.988） Mt/M∞=28.99 X－3.198 （R²=0.991） 京尼平龙胆二糖苷 Mt/M∞=6.245 t＋24.09 （R²=0.948） (1－Mt/M∞)=4.611－0.202 t （R²=0.987） Mt/M∞=28.82 X－4.904 （R²=0.994） 羟异栀子苷 Mt/M∞=6.449 t＋28.52 （R²=0.939） (1－Mt/M∞)=4.838－0.308 t （R²=0.938） Mt/M∞=29.85 X－1.613 （R²=0.991） 栀子总苷 Mt/M∞=6.120 t＋27.22 （R²=0.949） (1－Mt/M∞)=4.619－0.220 t （R²=0.977） Mt/M∞=28.23 X－1.159 （R²=0.994）

表 1 栀子总苷缓释片累积释放度拟合方程 Table 1 Cumulative release rate-time model fitting of GardeniaTotal Glycosides Sustained-release Tablets

中药缓控释制剂的研究已取得了较大的进展^{[6, 7]}，但中药不同于化学药物，中药是通过多组分、多系统、多靶点发挥治疗作用的，各组分之间通过对吸收、代谢和作用的相互影响，产生综合治疗作用。中药各组分由于理化性质不同，释放速度会有所不同，在缓控释制剂能否同步释放应作为释放度评价的重点。本研究对栀子总苷缓释片中栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、羟异栀子苷3个指标成分和栀子总苷的释放特度进行了测定，可持续释放12 h，各组分释放率相似因子大于70%，基本达到了同步释放，符合缓释制剂的要求。

本实验考察了盐酸溶液（pH 1.2）、磷酸盐缓冲液（pH 6.8）和水3种溶剂，结果栀子苷、京尼平龙胆二糖苷和羟异栀子苷3个指标成分的溶出差异不明显，均符合漏槽条件，这与栀子总苷水溶性较好有关，确定用水作为溶出介质。