摘要:
目的 结合高通量测序技术和传统可培养技术对虎耳草Saxifraga stolonifera内生真菌类群及多样性进行系统分析,并对其抗氧化活性进行初筛,为虎耳草内生真菌资源的开发与利用奠定基础,也为天然抗氧剂的筛选提供了菌种资源。方法 虎耳草内生真菌多样性的分析采用Illumina Miseq高通量测序技术和组织分离法,利用化学法检测虎耳草内生真菌对1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical,DPPH)、羟基自由基(hydroxyl radical, OH)和2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABT] 等自由基的清除率,进而筛选出具有抗氧化活性的菌株。结果 高通量测序分析发现虎耳草内生真菌隶属于347属,其中Dactylonectria(15.68%)为根部优势菌属,茎部的优势菌属为Humicola(9.57%),而叶部优势菌属为炭疽菌属Colletotrichum(5.33%)。利用组织分离法从虎耳草分离到381株内生真菌,隶属于31个属,主要类群为炭疽菌属(19.42%)、篮状菌属Talaromyces(10.76%)和曲霉菌Aspergillus(8.66%)。基于高通量测序的和组织分离法分析的多样性指数显示虎耳草根部内生真菌的多样性明显高于茎部和叶部,而且虎耳草内生真菌总体多样性指数均高于多数已报道的其他药用植物。24株代表性菌株发酵液的抗氧化活性初筛结果显示:对DPPH、OH和ABTS自由基清除率高于50%的菌株分别占总数的91.67%、79.17%和83.33%,其中菌株Talaromyces sp. HECS10对DPPH、OH和ABTS 3种自由基的清除率均高于75%。结论 虎耳草内生真菌的类群分布具有较高的多样性,且蕴含着较高比例的抗氧化活性菌种资源,为筛选微生物来源的天然抗氧化剂提供了重要资源库。