摘要:
目的 探讨红花黄色素通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法 取50只大鼠,其中40只采用单次ip链脲佐菌素法制备DM大鼠模型,并将其随机分为模型组和红花黄色素低、中、高剂量组,其余10只为对照组;红花黄色素低、中、高剂量组分别ip 20、40、80 mg/kg红花黄色素,对照组和模型组ip等量生理盐水溶液,连续给药6周。观察大鼠一般状态,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察RGC形态学变化并计数;采用原位凋亡(TUNEL)法检测并对比RGC凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法和蛋白免疫印迹法检测各组大鼠视网膜组织中p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspasae-3)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白表达情况,并对比p-p38MAPK与p38MAPK蛋白表达比值。结果 实验期间所有大鼠均存活,对照组大鼠无异常;模型组大鼠血糖较高、饮食量及尿量较大,体质量减轻;红花黄色素低、中、高剂量组大鼠各指标较模型组均有所改善。病理学观察发现,对照组大鼠视网膜各层细胞均无异常;模型组大鼠RGC排列紊乱、细胞核稀疏,双极细胞层及感光细胞层细胞数目减少,排列稀疏;红花黄色素低、中、高剂量组大鼠RGC及外层双极细胞层和感光细胞层异常程度均较模型组减轻,其中红花黄色素高剂量组减轻最为明显。与对照组比较,模型组大鼠RGC数量显著减少(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),视网膜中Caspase-3、VEGF mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05),p-p38MAPK/p38MAPK值显著升高(P<0.05);与模型组比较,红花黄色素低、中、高剂量组大鼠RGC数量显著增多(P<0.05),RGC凋亡率显著降低(P<0.05),视网膜Caspase-3、VEGF mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),p-p38MAPK/p38MAPK值显著降低(P<0.05),且各剂量组间比较差异显著(P<0.05)。结论 红花黄色素可通过抑制p38MAPK信号通路保护DM大鼠RGC,减少其凋亡,其中80 mg/kg的红花黄色素保护作用最佳。