摘要:
目的 利用网络药理学、分子对接技术,从肾茶中筛选潜在的治疗痛风性关节炎的活性成分及其靶点,并通过体外实验进一步验证。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、HERB等数据库获得肾茶的活性成分及其作用靶点,通过人类基因数据库(GeneCards)、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)等获得痛风性关节炎的相关靶点,采用R软件的Venny 2.1.0包获取肾茶与痛风性关节炎的交集靶点,利用软件CytoScape 3.9.1绘制“肾茶–活性成分–疾病靶点”网络,通过STRING网站构建关键靶点的蛋白质–蛋白质相互作用(PPI)网络,并通过微生信平台进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。利用分子对接技术对核心活性成分和核心靶点对接结果进行模拟可视化。使用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞,构建体外炎症模型,给药组则同时予以黄芩素(5、10、20 μmol/L)、甜橙黄酮(6.25、12.5、25 μmol/L)和鼠尾草素(12.5、25、50 μmol/L)处理。通过RT-qPCR检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平和Western blotting检测胞外信号调节激酶(ERK)、核因子-κB(NF-κB)p65磷酸化水平。结果 网络药理学最终筛选得到7个肾茶活性成分,对应靶点481个,与痛风性关节炎交集靶点共47个;“肾茶–活性成分–疾病靶点”网络识别出3种核心成分(黄芩素、甜橙黄酮和鼠尾草素);PPI筛选得到NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、肉瘤病毒癌基因同源物(SRC)、集落刺激因子1受体(CSF1R)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、肿瘤坏死因子受体超家族成员1A(TNFRSF1A)、白细胞介素-18(IL18)、白细胞介素-10(IL10)、干扰素-γ(IFNG)、Toll样受体4(TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)10个核心靶点;GO和KEGG通路分析可知肾茶通过MAPK及NF-κB等信号通路发挥作用;分子对接结果显示,3种核心成分与痛风性关节炎治疗靶点的结合能力各有不同,与MAPK14结合能力较强。RT-qPCR实验结果显示,给药组较模型组IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平明显下降;Western blotting实验结果显示,与模型组相比,给药后抑制细胞中MAPK通路及NF-κB通路的激活,显著降低ERK、NF-κB p65磷酸化水平。结论 肾茶治疗痛风性关节炎的主要活性成分为黄芩素、甜橙黄酮、鼠尾草素,以及药物主要通过MAPK/ERK和NF-κB p65信号通路发挥治疗痛风性关节炎作用。