摘要:
目的 通过网络药理学、分子对接和体外实验探讨汉防己甲素(TET)治疗胰腺癌的潜在作用靶点,并阐明其相关分子机制。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、SwissTargetPrediction和PharmMapper数据库构建TET的潜在作用靶点数据集,与在GeneCards和OMIM数据库中获得的PAAD相关靶点取交集,得到TET治疗PAAD的潜在作用靶点。利用STRING数据库获取交集靶点蛋白的蛋白质–蛋白质相互作用(PPI)网络信息并导入Cytoscape 3.8.0筛选核心靶点;运用Metascape数据库对交集靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。使用AutoDock和PyMol软件进行分子对接验证。采用CCK-8法检测不同梯度浓度TET对胰腺癌细胞增殖活性的影响;胰腺癌细胞分为对照组和汉防己甲素6.25、12.5、25 μmol/L组,采用细胞划痕愈合实验、克隆形成实验和流式细胞术检测各组细胞迁移率、克隆形成情况和细胞周期变化。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)–蛋白激酶B(Akt)通路相关基因表达水平。结果 获得TET影响胰腺癌的潜在靶点140个,分析构建胰腺癌与TET之间的PPI网络,获得核心靶点Akt1、表皮生长因子受体(EGFR)和PIK3CA等。分子对接显示这些核心靶点与TET都具有良好的结合活性。GO和KEGG富集分析表明TET治疗胰腺癌的关键靶点主要涉及磷酸化等生物学过程和PI3K-Akt等信号通路。胰腺癌细胞的死亡率随着TET浓度的增加而升高。与对照组比较,TET组细胞迁移率降低(P<0.01),TET组PANC-1细胞克隆形成数减少(P<0.001);与对照组比较,TET组G0/G1期比例升高(P<0.001)。与对照组相比,TET组血小板源性生长因子受体α(PDGFRA)基因表达下调(P<0.05),而T细胞白血病/淋巴瘤1A(TCL1A)、Jun、ILK、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核转录因子-κB抑制剂α(NF-κBIA)、PIK3CA、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)基因表达水平显著升高(P<0.05)。结论 TET可抑制人胰腺癌细胞增殖、迁移和克隆,造成细胞周期阻滞,其作用机制可能与PI3K-Akt信号通路有关。