[关键词]
[摘要]
目的 建立驴皮药材RAPD分析方法并用于伪品马皮的鉴别。方法 采用化学试剂盒法确定了驴皮药材中DNA提取的最佳条件,采用L16(45) 正交设计方法,针对Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物设计了5因素4水平的正交试验,优化了RAPD-PCR反应条件。结果 驴皮药材RAPD-PCR反应体系的最佳条件为25 μL反应体系中含有Taq酶1.5 U、Mg2+ 0.15 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、模板DNA 1.5 μL、引物0.5 μmol/L;PCR反应条件为95 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共30个循环,最后72 ℃延伸7 min。RAPD反应结果中300~400 bp处的条带可作为鉴别驴皮及其伪品的特异性条带。结论 所建立的RAPD分析方法具有简便快捷、稳定性好、重现性高的特点,可用于驴皮药材及其伪品马皮的鉴别。
[Key word]
[Abstract]
[中图分类号]
[基金项目]
国家自然科学基金项目(81102833);山西省基础研究项目(2012021031-2);山西省中药材、中药饮片地方标准研究(2011012A)