目的: 建立附子中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的定量测定方法。方法: 采用反相高效液相色谱法, 选择Hypersil ODS2色谱柱(250mm×4.6mm,5μm), 以40mmol/L乙酸铵溶液-乙腈为流动相梯度洗脱, 检测波长235nm。结果：乌头碱、次乌头碱、新乌头碱均得到较好分离, 分别在0.170～85、0.319～159.5、0.218～109μg呈良好的线性关系, 平均回收率为102.1%(RSD=1.84%)、97.7%(RSD=1.92%)、96.4%(RSD=2.51%)。结论: 该方法简便、灵敏、准确, 可用于附子的质量控制。