2024/2/21 13:51:49 9true 2024/2/21 0:00:00 8true 2024/2/21 0:00:00 7true 目的 对防风Saposhnikovia divaricata中分离得到均一多糖的结构及其免疫调节活性进行研究。方法 采用DEAE-纤维素、Sephadex G-75等柱色谱法，对防风多糖进行系统分离纯化，采用ESI-MSⁿ、GC-MS、NMR等谱学技术，对分离得到的防风多糖SP800203的相对分子质量分布、单糖组成、寡糖片段、糖残基类型和糖苷键连接方式等进行分析，确定其结构。采用细胞实验和斑马鱼实验，研究防风多糖SP800203的免疫调节活性。结果 从防风中分离得到防风多糖SP800203，糖醛酸质量分数为75.73%，相对分子质量约为7.14×10⁴，由鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸组成，单糖物质的量比为2.8∶6.7∶6∶84.5。主链由半乳糖醛酸聚合而成，2条支链分别由阿拉伯糖、半乳糖醛酸、半乳糖、鼠李糖，以及阿拉伯糖、半乳糖醛酸、半乳糖聚合而成，二者分别通过β、α糖苷键与主链相连。防风多糖SP800203可以促进巨噬细胞一氧化氮、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β和白介素-6的释放，增加斑马鱼的免疫细胞密度和巨噬细胞数量。结论 防风多糖SP800203为从防风中分离得到的新的均一多糖，具有良好的免疫调节活性；研究结果为阐明防风免疫调节作用机制奠定了基础，为防风临床应用及进一步研究与开发提供科学依据。]]> 2024/2/21 0:00:00 6true 目的 从罗汉果Siraitia grosuenorii根中分离纯化多糖组分，初步分析其结构特征并研究其免疫调节作用。方法 干燥罗汉果根经95%乙醇脱脂，用70 ℃水提醇沉得到粗多糖，再经Cellulose DE-52纤维素阴离子交换柱、Sephadex LH-20凝胶柱分离纯化，得到均一多糖LGP-A。采用高效凝胶渗透色谱法（high performance gel permeation chromatography，HPGPC）与PMP柱前衍生化法测定其相对分子质量和单糖组成；通过傅里叶红外光谱（FT-IR）、核磁共振波谱（NMR）、刚果红实验、扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）等方法对LGP-A的初步结构进行分析。利用CCK法、ELISA试剂盒、中性红实验对RAW264.7细胞的增殖、一氧化氮（NO）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及吞噬能力进行检测，评价LGP-A的免疫活性。结果 LGP-A的相对分子质量为1.83×10⁶，主要由半乳糖（Galp，51.23%）和阿拉伯糖（Araf，44.68%）组成。红外光谱及核磁波共振波谱对其结构分析证明，LGP-A可能主要含有T-α-L-Araf（A）、→3)-α-L-Araf-(1→（B）、→5)-α-L-Araf-(1→（C）、→3,5)-α-L-Araf-(1→（D）、→3)-β-D-Galp-(1→（E）、→3,6)-β-D-Galp-(1→（F）、→6)-β-D-Galp-(1→（G）和→3)-α-D-Galp-(1→（H）片段。质量浓度在0.625～5.0 μg/mL时，LGP-A能促进RAW264.7细胞的增殖，并能明显促进细胞分泌NO、IL-6和TNF-α，提高细胞吞噬率，表明LGP-A具有显著的免疫调节活性。结论 LGP-A是从罗汉果根中得到的天然均一多糖，其初步结构和活性的研究为罗汉果根资源的开发提供了一定的依据。]]> 2024/2/21 0:00:00 5true 目的 探究一贯煎多糖（YGJP -W）的基本结构特征以及其改善四氯化碳（CCl₄）诱导小鼠肝纤维化的活性，分析YGJP-W抗肝纤维化活性与其调节肠道菌群结构变化关系。方法 采用水提醇沉和弱阴离子交换色谱制备一贯煎多糖组分YGJP-W，依次采用苯酚-硫酸法、间羟基联苯法、BCA蛋白定量分析试剂盒、高效凝胶渗透色谱法（high performance gel permeation chromatography，HPGPC）、FT-IR、离子色谱仪及扫描电镜法（scanning electron microscope，SEM）对一贯煎多糖的总糖含量、糖醛酸含量、蛋白含量、相对分子质量分布、官能团、单糖组成及形貌特征进行表征，采用CCl₄诱导的小鼠模型，检测YGJP-W（50、100 mg/kg）干预3周后的小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝组织羟脯氨酸水平，并通过HE染色和天狼猩红染色观察肝脏组织学变化，评价YGJP-W改善肝纤维化活性；采用16S rDNA测序技术评价YGJP-W对小鼠肠道菌群的影响；采用抗生素联合YGJP-W干预，评价YGJP-W是否通过调节肠道菌群发挥药效作用。结果 YGJP-W总得率为11.60%，总糖质量分数为92.48%，至少由相对分子质量为1.74×10⁵和5.6×10³的2种多糖组成，单糖组成包含半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖，其物质的量比为1.0∶2.8∶1.4∶1.6。YGJP-W干预3周后，能够显著改善CCl₄引起的肝功能异常、肝组织病理损伤、胶原沉积和纤维化。YGJP-W在改善肝纤维化的同时能够引起小鼠肠道菌群结构变化，在门水平上，YGJP-W显著性降低拟杆菌门丰度[（57.4±14.6）% vs（79.3±8.1）%，P＜0.01]，增加变形菌门[（10.4±4.7）% vs（2.1±1.9）%，P＜0.01] 和放线菌门[（3.7±2.4%）% vs（0.3±0.1）%，P＜0.01）]丰度，在属水平上，YGJP-W增加狄氏副拟杆菌属Parabacteroides、埃希氏菌-志贺氏菌属Escherichia-Shigella、活泼瘤胃球菌属Ruminococcus_gnavus_group、萨特氏菌属Sutterella、毛螺菌属NK4A136组Lachnospiraceae_NK4A136_group和梭杆菌属Fusobacterium共6个菌属的丰度（LDA score＞3，P＜0.01），降低拟普雷沃氏菌属Alloprevotella），肠鼠杆菌属Muribaculum，普雷沃氏菌属UCG-001 Prevotellaceae_UCG-001和另枝杆菌Alistipes共4个菌属的丰度（LDA score＞3，P＜0.01）。抗生素联合YJGP-W干预，YJGP-W抗肝纤维化的活性显著减弱。结论 多糖类成分YJGP-W是一贯煎抗肝纤维化的重要物质基础，YJGP-W发挥抗肝纤维化的作用可能与其调控肠道菌群相关。]]> 2024/2/21 0:00:00 4true 目的 构建黄精炮制品多糖的酶水解产物指纹图谱，结合化学计量学方法评价不同蒸晒次数黄精炮制品多糖的差异。方法 采用糖苷酶水解，结合高效薄层色谱（high thin-layer chromatography，HPTLC）、亲水作用色谱-高效液相色谱-蒸发光检测器（hydrophilic interaction liquid chromatography-high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector，HILIC-HPLC-ELSD）和超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱（ultra high pressure liquid chromatography-quadrupole time of flight tandem mass spectrometry，UHPLC-QTOF/MS）对相应的酶解产物进行高效分离和检测。由此产生的自下而上的指纹图谱反映了黄精炮制品多糖的变化，通过相似度和偏最小二乘-判别分析（partial least squares-discriminant analysis，PLS-DA）对指纹图谱进行综合评价。结果 HPTLC分析发现，果糖随着蒸晒次数的增加逐渐降低，结合色谱分析发现，六蒸六晒和十二蒸十二晒为黄精炮制过程中的转折点。同时根据酶水解中寡糖的变化，利用相似度和PLS-DA对不同蒸晒次数的黄精炮制品进行了清晰的聚类。结合UHPLC-QTOF/MS分析表明，不同蒸晒次数黄精炮制品中含有蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖及蔗果八糖。结论 基于酶解法分析不同蒸晒次数样品的质量动态变化，结合所建立的多元指纹图谱，进一步阐释了不同蒸晒次数黄精炮制品的科学内涵。]]> 2024/2/21 0:00:00 3true 目的 分析茯苓多糖成分对秀丽隐杆线虫体内抗氧化和抗衰老作用的影响，并阐明其潜在机制。方法 将L4期线虫随机分为低、中、高剂量（10、20、40 μg/mL）的茯苓多糖组和空白组进行培养；采用百草枯抗氧化实验、寿命实验、脂褐素测定实验、应激实验（紫外/高温）、生理功能实验（吞咽频率/摆动次数/产卵量）探究茯苓多糖对野生型秀丽隐杆线虫抗氧化和抗衰老作用；将突变体线虫分为茯苓多糖组（40 μg/mL）和空白组，采用应激实验、寿命实验、线虫BZIP结构域蛋白1（protein skinhead-1，skn-1）绿色荧光蛋白的细胞定位检测、qRT-PCR实验、活性氧（reactive oxygen species，ROS）检测探究茯苓多糖的抗衰老的作用机制。结果 茯苓多糖显著延长线虫的寿命，减少脂褐素的产生，增强对紫外线和热胁迫的抵抗力，提高咽部泵血频率和运动能力，显示出显著的抗衰老生物活性。茯苓多糖的抗衰老作用是通过skn-1信号通路介导的，而不依赖于胰岛素样受体β亚基（insulin-like receptor subunit beta，daf-2）和神经元乙酰胆碱受体亚基eat-2（neuronal acetylcholine receptor subunit eat-2，eat-2）信号通路。茯苓多糖增加了线虫中skn-1转录因子的核定位，上调了下游抗氧化基因谷胱甘肽S-转移酶4（glutathione S-transferase 4，gst-4）和gst-7的转录水平，并显著降低了细胞内ROS水平。然而，在skn-1突变体蠕虫中未观察到这些效应。结论 茯苓多糖在秀丽隐杆线虫中表现出抗氧化和抗衰老的作用，其机制涉及调控skn-1转录因子及其下游抗氧化基因，最终降低ROS水平，增强机体的抗氧化应激能力。]]> 2024/2/21 0:00:00 2true 目的 通过观察蒲公英多糖（dandelion polysaccharide，DP）联合小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）靶向沉默长链非编码RNA（LncRNA）结肠癌相关转录因子1（colon cancer-associated transcript 1，CCAT1）对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影响，探究DP抗乳腺癌可能的分子机制。方法 在线数据工具分析CCAT1在乳腺癌组织中的差异表达，qRT-PCR分别检测CCAT1在乳腺癌细胞系中的差异表达、DP（100、200 μg/mL）对MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231细胞中CCAT1表达的影响以及siCCAT1对MDA-MB-231细胞中CCAT1表达的影响；CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验分别检测DP联合siCCAT1对MDA-MB-231细胞活力、迁移和侵袭能力的影响；在线数据工具预测CCAT1下游靶基因及靶基因富集的信号通路；Western blotting检测DP联合siCCAT1对MDA-MB-231细胞EMT相关蛋白及蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）/糖原合成激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）/细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）/周期蛋白依赖性激酶6（cyclin-dependent kinases 6，CDK6）信号通路中关键蛋白表达的影响。结果 与癌旁正常组织及正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比，CCAT1在人乳腺癌组织和细胞中高表达（P＜0.01）；与对照组比较，DP呈剂量和时间相关性地抑制MDA-MB-231及MCF-7细胞活力（P＜0.05、0.01），但对MCF-10A细胞活力无明显影响；与MCF-10A及MCF-7细胞相比，DP可显著下调MDA-MB-231细胞中CCAT1表达水平（P＜0.01）；与siNC组比较，siRNA可显著降低CCAT1在MDA-MB-231细胞中的表达（P＜0.01），且DP（200 μg/mL）联合siCCAT1更加显著降低了MDA-MB-231细胞中CCAT1的表达水平（P＜0.01）；与对照组及siNC组比较，DP（200 μg/mL）和siCCAT1均能抑制MDA-MB-231细胞活力（P＜0.01），且DP（200 μg/mL）联合siCCAT1对MDA-MB-231细胞活力的抑制作用更为明显（P＜0.01）；与对照组及siNC组比较，DP（200 μg/mL）和siCCAT1均能抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭（P＜0.01），且DP（200 μg/mL）联合siCCAT1抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的作用更为明显（P＜0.01）；与单独用DP或siCCAT1相比，DP联合siCCAT1处理MDA-MB-231细胞中EMT进程相关蛋白E-cadherin表达上调更为显著（P＜0.01），N-cadherin和Vimentin蛋白表达下调更为显著（P＜0.01）；在线生物工具预测出CCAT1靶基因共1 929个，这些靶基因主要富集在RNA聚合酶II启动子转录调控、信号转导、转录调控等关键生物过程；富集的通路主要有癌症、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/Akt信号通路；与对照组及siNC组比较，DP（200 μg/mL）和siCCAT1均能下调MDA-MB-231细胞中Akt/GSK-3β/Cyclin D1/CDK6信号通路关键蛋白p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β、Cyclin D1、CDK6蛋白表达水平（P＜0.05、0.01），且DP（200 μg/mL）联合siCCAT1应用时对其关键蛋白下调作用更为显著（P＜0.01）。结论 DP联合siCCAT1显著抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程，其机制可能与下调MDA-MB-231细胞中CCAT1表达进而抑制Akt/GSK-3β/Cyclin D1/CDK6信号通路有关。]]> 2024/2/21 0:00:00 1true