2025/8/2 15:18:46 5true 2025/8/2 15:18:47 4true 目的 构建基于HepaRG细胞的三明治培养模型，为评价药物致胆汁淤积风险提供一种高通量且适宜短期研究的参考方法。方法 通过检测5(6)-羧基-2,7二氯荧光素（CDF）及紧密连接蛋白1（ZO-1）荧光强度，结合光学显微镜观察细胞形态，确定模型在96孔培养板中最佳接种密度及建模时间；以对乙酰氨基酚（APAP）为受试物，CCK-8法确定给药浓度；制备三明治培养模型，给药后利用免疫荧光法检测胆汁淤积相关指标，包括CDF、脂质含量、多药耐药蛋白3（MRP3）、法尼醇X受体（FXR）及胆盐输出泵（BSEP），验证模型对评价胆汁淤积的适用性。结果 模型最佳接种密度为每孔7×10⁴个，培养72 h后即可给药。与相同时间的对照组相比，在APAP质量浓度为300～1 200 μg·mL^-1时，细胞脂质含量没有显著性变化；给药1 d，APAP质量浓度在300～600 μg·mL^-1时，CDF荧光强度均显著升高（P＜0.01），给药3 d，CDF荧光强度均显著下降（P＜0.05、0.01）；给药1 d、APAP质量浓度在1 200 μg·mL^-1时，给药3、7 d APAP质量浓度在600～1 200 μg·mL^-1时，MRP3表达量显著下降（P＜0.05、0.01）；给药3、7 d，APAP质量浓度在1 200 μg·mL^-1时，FXR表达量显著下降（P＜0.01）；给药7 d，APAP质量浓度在300 μg·mL^-1时，BSEP表达量显著下降（P＜0.01）。结论 成功建立短期三明治肝细胞培养模型并揭示了APAP导致胆汁淤积的多靶点机制，验证了该模型评价胆汁淤积风险的可靠性。]]> 2025/8/2 15:18:47 3true 目的 建立一种基于心脏类器官模型的场电位测定方法，用于临床前药源性心脏毒性评价。方法 自组织法体外构建人诱导多能干细胞（hiPSC）的心脏类器官模型，显微镜下观察形态，培养至第18天（D18）免疫荧光法检测成纤维细胞标志物波形蛋白（VIM）、内皮细胞标志物（CD31）、心肌细胞标志物肌钙蛋白T（cTnT）的表达；选用钾通道阻滞剂E-4031作为阳性药评估方法的有效性，待心脏类器官状态稳定（D18≤培养时间≤ D30）、选取信号强度稳定且持续时间超过3 d的类器官分为对照组（不加药）、E-4031（0.5 μmol·L^-1）组，加药前1 h进行培养基更换，加药后使用微电极阵列技术对场电位进行检测，记录波形和电生理参数；应用建立的模型对美西律（3、10、30 μmol·L^-1）潜在的心律失常风险进行评估。结果 自D1起，hiPSC浓缩聚集呈球状，形成拟胚体，随着诱导分化时间延长，细胞球直径逐渐增加，球体边缘逐渐清晰；D8，球体产生自发性跳动； D18，心脏类器官状态稳定，细胞球体直径大小趋于稳定，直径为（1 499.03± 101.60） μm，形状规则，边缘光滑清晰，搏动频率规律，可达（33.39± 8.14）次·min^-1。VIM、CD31、cTnT在心脏类器官内高度表达，到达预期成熟特征。与对照组相比，加入0.5 μmol·L^-1的E-4031 1 h时，T波明显延长； 1 h起场电位持续时间（FPD）变化率显著升高（P＜0.05、0.01），校正场电位持续时间（FPDc）的变化率显著升高（P＜0.05）；搏动周期增加，3 h时达到较高幅度，尖峰振幅的变化率呈现出下降趋势，但差异均不显著。类器官暴露于3、10 μmol·L^-1美西律后，与对照组相比T波均无明显位移，当美西律浓度达30 μmol·L^-1时无场电位信号。与对照组相比，3 h时10 μmol·L^-1的美西律组FPDc变化率显著增加（P＜0.05）；搏动周期变化率在美西律浓度为10 μmol·L^-1时存在明显变化，3 h时达到较高幅度，存在显著性差异（P＜0.001）； 3 μmol·L^-1的美西律组尖峰振幅的变化率表现出明显的下降趋势，5 h时存在显著性降低（P＜0.05），当美西律浓度达到10 μmol·L^-1时，尖峰振幅的变化率愈加明显，1、3、5 h时呈现显著性下降（P＜0.05）。结论 建立的心脏类器官的场电位检测方法可以用于评估药物引起的心脏毒性，可在药物研发早期提供较为准确的数据支持。]]> 2025/8/2 15:18:47 2true 目的 构建人源结直肠腺瘤（CRA）复发类器官，评价几种中药活性成分对CRA复发类器官活性的影响。方法 收集内镜下切除后再发腺瘤的CRA患者组织，腺瘤数量数目超过2枚且少于6枚，直径为5～10 mm，构建CRA复发三维（3D）类器官；使用高内涵智能分析仪和光学显微镜观察类器官形态；运用苏木精-伊红（HE）染色观察类器官组织学形态；采用外显子组测序检测CRA复发类器官与源组织基因学特征的一致性；采用CellTiter-Glo检测1 000.00、100.00、10.00、1.00、0.10、0.01 μmol·L^-1的盐酸小檗碱、人参皂苷Rg₃、大黄素、姜黄素、丹参酮Ⅱ A、黄芩素、异甘草素对6例CRA复发类器官活性的影响，绘制活性曲线，并计算半数抑制浓度（IC₅₀）值。结果 建成CRA复发类器官，形态多以内部透亮、近圆的囊样结构为主，且囊壁多有向外侧隆起的蕈状结构；经过多次传代、冻存再复苏后其形态结构均能保持一致；每组类器官与源组织之间的突变类型比例基本一致，插入和缺失突变的长度和比例、拷贝变异数均具有较高度相似性； 7种中药活性成分对6例CRA复发类器官的IC₅₀均值分别为盐酸小檗碱69.79 μmol·L^-1、人参皂苷Rg₃ 110.92 μmol·L^-1、大黄素14.33 μmol·L^-1、姜黄素4 352.02 μmol·L^-1、丹参酮Ⅱ A 1 772.97 μmol·L^-1、黄芩素16.01 μmol·L^-1、异甘草素78.48 μmol·L^-1，CRA复发类器官对大黄素和黄芩素具有更高的敏感性。结论 成功构建能够稳定传代、冻存和复苏的CRA复发类器官，其能维持源组织的组织学和基因学特征；经CRA复发类器官活性评价，大黄素和黄芩素具有治疗CRA复发的潜力，为中医药在治疗CRA复发和防治结直肠癌（CRC）领域的有效应用提供理论和方法学参考。]]> 2025/8/2 15:18:47 1true