目的 利用小鼠胚胎干细胞，以拟胚体面积为分化抑制终点，构建体外胚胎毒性模型。方法 模型建立：分别用训练集10个化合物青霉素G、异烟肼、5-氟尿嘧啶、羟基脲、阿司匹林、氟康唑、地塞米松、丙戊酸钠、洛伐他汀、苯海拉明处理小鼠胚胎干细胞ES-D3和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3 5 d，用细胞活力检测试剂盒检测细胞活性，得到相应的半数抑制浓度（IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}）；同时用10种化合物处理ES-D3细胞，用悬浮-悬滴培养的途径制备拟胚体，于第5天对拟胚体进行拍照，用 Image J 软件测量拟胚体的横截面积，并计算半数抑制细胞分化的浓度（ID₅₀）。根据得到的 IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀，用Python软件采用线性判别分析（LDA）拟合得到线性二分类判别式。模型验证：以上述同样的方法测定测试集3个化合物维生素C、布洛芬、顺铂的IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀，将其代入得到的判别式，并预测化合物的胚胎毒性。结果 通过训练集 10个化合物拟合出线性预测判别式为：判别值＝21.550 926 58×lg IC_{50 3T3}－7.600 241 83×lg IC_{50 D3}－14.007 571 16×lg ID₅₀＋6.675 517 2，判别值＜0，归为无胚胎毒性；判别值≥0，归为胚胎毒性。将测试集化合物的 IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀代入判别式，得到维生素C判别值＜0，为无胚胎毒性药物；顺铂和布洛芬判别值＞0，为胚胎毒性药物，均与文献中体内试验结果一致，预测正确。结论 基于拟胚体面积成功建立体外胚胎毒性模型。]]> 2023/5/9 18:51:33 5true 目的 构建BALB/c小鼠免疫复合物性肾损伤模型，探讨观察此类肾损伤的早期、简便、灵敏检测方法和候选生物标志物，为生物技术药物非临床安全性评价毒性试验中肾损伤检测提供参考。方法 BALB/c小鼠随机分为溶媒对照组和阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）低、中、高剂量造模组，每组10只。诱导免疫时，造模组动物给予2 mg·mL^-1 C-BSA和弗氏不完全佐剂 1∶1等体积混合乳剂（1 mg·mL^-1、5 mL·kg^-1），而溶媒对照组动物给予磷酸盐（PBS）缓冲液与弗氏不完全佐剂 1∶1等体积混合乳剂，sc诱导免疫，每周1次，共2次；加强免疫时，各组动物均尾iv给予C-BSA，溶媒对照组和C-BSA低、中、高剂量组剂量分别为 0、2.5、5.0、10.0 mg·kg^-1，每 3天给予 1次，共 5次。造模期末，检测造模期末小鼠 24 h尿蛋白含量；检测凝血指标，包括凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APPT）以及纤维蛋白原含量（Fbg）；检测血清血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）以及三酰甘油（TG）水平；摘取主要脏器称质量并计算脏体比、脏脑比；HE染色和特殊染色［过碘酸-希夫（PAS）染色、Masson三色染色、过碘酸六胺银（PASM）染色］后，光学显微镜下检查肾组织形态学改变；免疫组化观察肾脏补体成分3（C3）、免疫球蛋白G（IgG）、结蛋白水平；免疫荧光观察肾脏C3水平；透射电子显微镜观察肾脏肾小球基底膜、足细胞足突的变化及毛细血管内皮细胞下有无电子致密物沉积。结果 C-BSA各剂量组动物在尾iv给予C-BSA后出现不同程度精神萎靡、活动减少、皮肤发红和呼吸急促等过敏反应症状，溶媒对照组动物给药后无明显异常；在加强免疫2周后，与溶媒对照组比较，C-BSA低、中和高剂量组动物体质量增长显著缓慢（P＜0.05）；C-BSA低、中、高剂量组动物尿蛋白呈阳性。与溶媒对照组比较，C-BSA各组动物 BUN、SCr、TG 均未见规律改变，仅高剂量组动物的 BUN 升高，TG 降低；C-BSA 中 、高剂量组动物 PT 显著降低（P＜0.05），低、中剂量组动物 APPT 显著降低（P＜0.05），低、中、高剂量组动物Fbg含量显著降低（P＜0.001）；C-BSA低、中、高剂量组动物肾脏的脏体比显著升高（P＜0.01），且低、中和高剂量组的脾脏绝对质量和脏体比亦显著升高（P＜0.05、0.01）。肾脏组织病理学检查及特殊染色检查发现C-BSA中、高剂量组动物肾小球系膜基质增加、基底膜增厚；免疫组化结果显示，与溶媒对照组比较，C-BSA低、中、高剂量组动物的C3、IgG、结蛋白表达水平均显著升高（P＜0.001），高剂量组 IgG水平显著高于低、中剂量组（P＜0.05）；免疫荧光结果显示，与溶媒对照组比较，C-BSA高剂量组C3水平显著升高（P＜0.001）；透射电镜结果显示C-BSA低、中、高剂量组动物肾脏肾小球基底膜增厚、足细胞足突部分融合，C-BSA中、高剂量组动物肾脏肾小球基底膜可见少量电子致密物沉积。结论 成功建立了免疫复合物性肾损伤模型和早期、简便、灵敏的检测方法，C3、IgG和结蛋白可作为生物技术药物非临床安全性评价毒性试验中肾损伤检测的候选生物标志物。]]> 2023/5/9 18:51:33 4true 目的 介绍大鼠及小鼠 Pig-a基因突变试验方法，并汇总国家药物安全评价监测中心 2015—2022年开展的基于免疫磁珠检测法的大鼠及小鼠 Pig-a 基因突变试验背景数据。方法 阴性物质包括超纯水和 0.5% 羧甲基纤维素钠（CMCNa），雄性 C57BL/6J 小鼠间隔 24 h ig 0.5% CMC-Na，连续 7 d；雄性 SD 大鼠间隔 24 h ig 0.5% CMC-Na，连续 14 d；大鼠间隔24 h ig 超纯水，连续 3 d。阳性对照为已知致细菌突变化合物，包括 N-乙基-N-亚硝基脲（ENU，10、40 mg·kg^-1）、盐酸丙卡巴肼（PCZ，60、150 mg·kg^-1）、乌拉坦（EC，300、800 mg·kg^-1）、N- 亚硝基二甲胺（NDMA ，1.5 mg·kg^-1）、N- 亚硝基二乙胺（NDEA，15 mg·kg^-1）。小鼠间隔 24 h ig ENU 40 mg·kg^-1，连续 3 d；间隔 24 h ig NDMA 1.5 mg·kg^-1、NDEA 15 mg·kg^-1，连续 7 d。大鼠间隔 24 h ig PCZ 150 mg·kg^-1、EC 800 mg·kg^-1、ENU 40 mg·kg^-1，连续 3 d ；间隔 24 h ig PCZ 60 mg·kg^-1、EC300 mg·kg^-1、ENU 10 mg·kg^-1，连续28 d。分别于给予受试物前，首次给予后14、28 d采集外周血，用流式细胞术检测大鼠红细胞表面 CD59蛋白的结合情况，结合免疫磁性计数微球技术计算网织红细胞（RETs）占总红细胞的百分率（%RET）（作为外周血毒性考察指标）、总红细胞中CD59表达为阴性细胞（RBC^CD59-，即突变的总红细胞）发生率和RETs中CD59表达为阴性细胞（RET^CD59-，即突变的 RETs）发生率。结果 各试验%RET数值均无大幅增加。SD大鼠和 C57BL/6J 小鼠的阴性对照组RBC^CD59-和 RET^CD59-突变率均低于 5×10-6，小鼠的背景值相对不稳定。连续 3 d ig给予小鼠 40 mg·kg^-1的 ENU，RBC^CD59-和RET^CD59-发生率自给药后2周开始均大幅增加（P＜0.05），给药后4周进一步增加（P＜0.01、0.001）；给予小鼠NDMA后2、4周，RBC^CD59-发生率略有增加，但仍在阴性背景范围内，但RET^CD59-发生率在给药后第2周大幅增加（P＜0.001），给药后第4周则大幅回落；给予小鼠NDEA后2周，RBC^CD59-和RET^CD59-发生率均有所增加（P＜0.05、0.001），给药后第 4 周则有所降低。连续3 d ig给予大鼠40 mg·kg^-1 ENU，或连续28 d ig给予大鼠10 mg·kg^-1 ENU，RBC^CD59-、RET^CD59-发生率自给药后第2周开始均大幅增加（P＜0.001），给药后第 4 周进一步增加（P＜0.001）；连续 3、28 d ig 给予大鼠不同剂量的 PCZ 或 EC 后，RBC^CD59-和RET^CD59-发生率的变化趋势与 ENU类似，但 EC诱发的突变细胞率低于 ENU和 PCZ。结论 体内 Pig-a基因突变试验可在首次给药后4周内有效检出致细菌突变化合物ENU、PCZ、EC、NDMA、NDEA的致突变性。提供了大鼠和小鼠Pig-a基因突变试验的背景值范围，为标准化试验方法的建立和研究结果的判定提供借鉴。]]> 2023/5/9 18:51:33 3true 目的 基于 RBL-2H3及 P815细胞系，选择 Compound 48/80（C48/80）为阳性药构建类过敏反应的体外评价模型，初步评价聚山梨酯80、维生素K₁注射剂（VK₁I）、注射用两性霉素B脂质体（ABL）导致类过敏反应的潜在风险。方法 应用 CCK-8 法检测 C48/80（10、30、60、100 μg·mL^-1）、聚山梨酯 80（2.5、5.0、10.0、50.0 mg·mL^-1）、VK₁I（0.625、1.250、2.500、5.000、10.000 mg·mL^-1）、ABL（0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg·mL^-1）对 RBL-2H3、P815 细胞活性的影响，计算半数抑制浓度（IC₅₀），阳性药及受试物均选择＜IC₅₀浓度进行后续实验；结合中性红染色形态学观察，研究阳性药及受试物的细胞毒性；流式细胞仪检测Annexin V阳性细胞率及Fluo-4AM标记率；ELISA法检测β-氨基己糖苷酶（β-Hex）及组胺释放量。结果 中性红染色结果显示，在C48/80作用下RBL-2H3、P815细胞部分皱缩或者偶有破损，但大部分细胞仍维持完整细胞形态；在聚山梨酯 80、ABL、VK₁I高浓度的作用下，RBL-2H3、P815细胞大部分仍能保持正常形态。C48/80在＜IC₅₀浓度时能够引起较强的细胞脱颗粒反应，模型建立成功。聚山梨酯80、VK₁I在＜IC₅₀浓度时均出现了浓度相关性细胞脱颗粒现象，与对照组比较，2种细胞聚山梨酯80 2.5、5.0 mg·mL^-1组及VK₁I 0.75、1.50、3.00 mg·mL^-1组Annexin V阳性率、Fluo-4AM标记率均显著升高（P＜0.05、0.01）；聚山梨酯 80 2.5、5.0 mg · mL^-1 组及 VK₁I 1.5、3.0 mg·mL^-1组的组胺、β-Hex释放量显著升高（P＜0.05、0.01）。ABL 组 Annexin V 阳性率浓度相关性升高趋势不明显 ，与对照组比较 ，仅 P815 细胞 ABL 2.00 mg·mL^-1组显著升高（P＜0.05），且升高幅度不大 ；与对照组比较 ，2种细胞ABL 1、2 mg·mL^-1组的Fluo-4AM标记率和组胺、β-Hex释放量显著升高（P＜0.05、0.01）。结论 聚山梨酯80、VK₁I高浓度具有导致类过敏反应产生风险，ABL 还需进一步研究。]]> 2023/5/9 18:51:33 2true 2023/5/9 18:51:33 1true