目的 研究和建立以细胞因子水平变化作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法 THP-1细胞分别与光致敏剂6-甲基香豆素（6-MC）和对氨基苯甲酸（PABA）、光致敏剂兼光刺激剂硫氯酚（bithionol）、光致敏兼皮肤致敏剂对苯二胺（PPD）和二苯甲酮（BP）、单纯皮肤致敏剂盐酸双氯苯双胍己烷（CHD）和二硝基氯苯（DNCB）、光刺激剂蒽（anthracene）和吖啶（acridine）、皮肤刺激剂月桂基磺酸钠（SDS）、阴性对照乳酸（LA）孵育24 h，与相应溶剂孵育作为对照组，经光照射（1.7 mW·cm^-2，50 min）或避光处理后，细胞换液放入培养箱内继续培养5 h。光刺激剂需在正式光照射前进行预照射（在SOL 500人工太阳照射装置中照射30 min，然后避光放置15 min）处理。采用Luminex分析仪及多因子检测试剂盒分别检测细胞因子白细胞介素（IL）-12/P40、IL-12/P70、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-8、IL-18、IL-4和IL-13水平的改变，确定光致敏相关特异性细胞因子，建立相应的光致敏体外评价方法。结果 光致敏剂与THP-1细胞孵育并经光照后，与未照射组比较，细胞裂解液＋上清液中IL-8和TNF-α的含量均显著增加（P<0.01） ，其中IL-8的增加幅度最大，光致敏剂6-MC、PABA、PPD和硫氯酚照射与未照射组的IL-8水平比值均大于10，TNF-α水平比值均大于1.5。光刺激剂吖啶和蒽细胞模型经过光直接照射后，IL-8水平是未照射组的10倍以上，TNF-α水平是未照射组的1.5倍以上；经过预照射处理后，其照射组与未照射组IL-8比值均下降到10以下，TNF-α比值均下降到1.5以下。皮肤致敏剂DNCB和CHD、皮肤刺激剂SDS、阴性对照LA和对照组，光照射与未照射组IL-8比值均小于10，TNF-α比值均小于1.5。结论 在THP-1细胞模型中，IL-8和TNF-α对于评价化合物光致敏性具有较好的特异性和灵敏度，IL-8更优。]]> 2022/1/7 13:24:41 3true 目的 确定并验证以白细胞介素-8 （IL-8）作为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法。方法 将THP-1细胞与19种光致敏剂、4种光刺激剂、2种皮肤致敏剂、1种皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育24 h，在光照射（1.7 mW·cm^-2，50 min）或避光处理后，细胞换液放入培养箱内继续培养5 h。光刺激剂需在正式光照射前进行预照射（光照30 min，然后避光15 min）处理。用Luminex液相芯片检测技术测定细胞培养上清和细胞裂解液中IL-8和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的含量并统计分析，进一步确定评价光致敏的细胞因子指标，并进行方法验证。结果 与非照射组比较，13种光致敏剂均引起照射组THP-1细胞IL-8总含量显著增加（P<0.01） ，阿伏苯宗为非照射组的1 148～2 269倍，其余12种为非照射组的6.7～195.1倍；光刺激剂经光照射后也可引起细胞分泌IL-8显著增加（P<0.01） ，但经过预照射处理后，IL-8的含量相比直接照射组显著下降（P<0.01）。未经光照射条件下，皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞分泌IL-8比对照组显著增加（P<0.01） ，光照后IL-8含量虽也较非照射组显著增加（P<0.01） ，但增加的幅度小于皮肤致敏剂本身引起IL-8变化的幅度。在光照条件下，皮肤刺激剂、阴性受试物均可引起细胞分泌IL-8较非照射组显著性增加（P<0.05） ，但增加的幅度较小，与对照组相似。以上受试物引起光照前后细胞TNF-α变化的幅度均与对照组相近。以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是77.8%、100.0%、68.4%，并且该方法具有良好的重复性。结论 确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞因子标志物评价指标为IL-8，判定标准为： ①UVA照射后THP-1细胞中IL-8含量比非照射组显著增加；②UVA照射组与非照射组IL-8含量比值≥6.5；③当上述两条均满足时，对受试物进行UVA预照射处理，预处理照射组IL-8的含量与直接照射组（未经预照射）相比无显著性差异，且预处理照射组与预处理非照射组IL-8含量比值≥6.5。]]> 2022/1/7 13:24:42 2true 目的 确定并验证以细胞表面标志物CD54作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法 将THP-1细胞与多种光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育，在光照射或避光处理后，用流式细胞仪测定细胞表面标志物CD54和CD86的表达水平并统计分析，进一步确定具体的评价指标，并对该方法的准确性、特异性、灵敏度、重复性进行验证。结果 19种光致敏剂中有15种引起照射组THP-1细胞表达CD54的平均荧光强度（MFI）较非照射组显著增加（P<0.05、0.01） ，且照射组细胞表达CD54的相对荧光强度（RFI）值均在1.5以上。光刺激剂经光照射后也可引起细胞表达CD54的MFI显著增加（P<0.01） ，但经过预照射处理后，CD54的表达水平较直接照射组显著下降（P<0.01）。未经光照射条件下，皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞表达CD54和CD86的MFI比对照组显著增加（P<0.01） ，光照后CD54的表达反而略有下降。在光照和避光条件下，皮肤刺激剂、阴性受试物（乳酸）均未引起细胞表达CD54或CD86的显著性变化。以CD54为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是85.2%、100%和78.9%，具有良好的重复性。结论 确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞表面标志物评价指标为CD54，判定标准为：（1）光照后THP-1细胞表达CD54的MFI较照射前显著性增加；（2）光照后THP-1细胞表达CD54的RFI≥1.5；（3）当上述条件均满足时，对受试物进行预照射处理，结果仍然满足前2条标准。]]> 2022/1/7 13:24:42 1true