2021/10/8 0:00:00 5true 2021/10/8 18:19:01 4true 目的 研究TRAIL基因修饰的脐带间充质干细胞（TRAIL-MSCs）联合化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）对人脑胶质瘤细胞U-87MG、人肺癌细胞A549和人宫颈癌细胞HeLa的杀伤作用。方法 通过基因工程手段结合慢病毒转染体系构建高表达十二聚体TRAIL蛋白（dTRAIL）的TRAIL-MSCs，应用流式细胞技术检测TRAIL-MSCs的生物学特性；通过ELISA技术检测TRAIL-MSCs分泌的TRAIL量来评估转染效果；CCK-8法检测低浓度（0、1、2、4、8、16 μg/mL）5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞的增殖抑制率，并计算其对各细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）；CCK-8法检测5-FU（IC₅₀）、UC-MSCs培养上清、TRAIL-MSCs培养上清、5-FU（IC₅₀）＋UC-MSCs培养上清和5-FU（1/4 IC₅₀、1/2 IC₅₀和IC₅₀）＋TRAIL-MSCs培养上清对U-87MG、A549、HeLa细胞的增殖抑制率，计算5-FU和TRAIL-MSCs培养上清的相互作用系数（CDI）；Westernblotting法检测5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞死亡受体DR4、DR5蛋白表达的影响；台盼蓝染色法观察5-FU、UC-MSCs、TRAIL-MSCs、5-FU＋UC-MSCs和5-FU＋TRAIL-MSCs对U-87MG、A549、HeLa细胞的杀伤作用。结果 生物学检测结果表明TRAIL-MSCs在维持UC-MSCs生物学特性的同时能够高表达TRAIL蛋白。5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞均有增殖抑制作用，抑制作用由高到底依次为HeLa细胞（IC₅₀为9.15 μg/mL） >A549细胞（IC₅₀为10.62 μg/mL） >U-87MG细胞（IC₅₀为22.37 μg/mL）。与对照组比较，除A549细胞UC-MSCs培养上清组外，各处理组细胞增殖抑制率均显著升高（P<0.01、0.001）；与相应各5-FUIC₅₀及TRAIL-MSCs培养上清组比较，U-87MG、HeLa细胞5-FU （1/4 IC₅₀、1/2 IC₅₀和IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组细胞增殖抑制率均显著升高（P<0.001），A549细胞5-FU （IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01、0.001）；5-FU （1/2 IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组对U-87MG的细胞增殖抑制协同效应最显著（CDI<0.7且P<0.001）； 5-FU （1/4 IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组对A549的细胞增殖抑制具有协同作用，但其协同效果并不显著； 5-FU （1/4 IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组对HeLa细胞增殖抑制的协同效果最显著（CDI<0.7且P<0.01）。经5-FU处理后U-87MG、A549、HeLa细胞DR4和DR5的蛋白表达明显升高，其中DR5的表达水平高于DR4，与对照组比较差异均具有统计学意义（P<0.001）。与对照组比较，5-FU、TRAIL-MSCs和5-FU＋TRAIL-MSCs组对于肿瘤细胞U-87MG、A549、HeLa均具显著的杀伤作用（P<0.001）；与5-FU或TRAIL-MSCs组比较，5-FU＋TRAIL-MSCs组的杀伤效果更显著（P<0.001）。结论 TRAIL-MSCs联合低浓度的5-FU对肿瘤细胞U-87MG、A549和HeLa具有显著的细胞杀伤作用，二者联用协同效果显著，机制可能与5-FU提高DR4、DR5蛋白表达、提高肿瘤细胞对TRAIL-MSCs的敏感性相关。]]> 2021/10/8 18:19:01 3true 目的 构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因修饰的脐带间充质干细胞（TRAIL-MSCs），并检测其联合地塞米松（DEX）对急性T淋巴细胞白血病细胞系（Jurkat）的影响。方法 通过慢病毒载体将SPD-TRAIL基因转染脐带间充质干细胞（UC-MSCs）构建TRAIL-MSCs，使其能够表达十二聚体TRAIL蛋白（dTRAIL）。通过CCK-8法、流式细胞术检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs、DEX （200 μmol/L）、DEX （200 μmol/L） ＋UC-MSCs和DEX （200 μmol/L） ＋TRAIL-MSCs对Jurkat细胞增殖、凋亡的影响；显微镜光镜下观察细胞形态及密度；通过实时荧光定量PCR及Westernblotting法检测各组Jurkat细胞表面死亡受体DR4、DR5 mRNA和蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示，各处理组均可以抑制Jurkat细胞的增殖，与对照组比较有显著性差异（P<0.01）；同时，DEX可以提高TRAIL-MSCs （抑制率约20%）对Jurkat细胞的增殖抑制作用，抑制率提高至60%，与TRAIL-MSCs组比较差异显著（P<0.01）。显微镜观察结果发现，DEX与TRAILMSCs联合组对肿瘤细胞Jurkat的杀伤作用最明显；流式细胞术结果显示，TRAIL-MSCs对Jurkat细胞有促进凋亡的作用，凋亡率达10%，单独使用DEX后，凋亡率约20%，与对照组比较差异显著（P<0.01）； DEX联合TRAIL-MSCs作用于Jurkat细胞48 h后，细胞凋亡率为38%，较TRAIL-MSCs组显著提高（P<0.01）。TRAIL-MSCs组DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较对照组显著降低（P<0.01），DEX组DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较对照组显著升高（P<0.01），DEX与TRAIL-MSCs联合作用后，DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较DEX组显著降低（P<0.01）。结论 DEX可以提高肿瘤细胞Jurkat对TRAILMSCs的敏感性，增强TRAIL-MSCs对肿瘤细胞的杀伤作用，可能与提高DR4、DR5表达有关。]]> 2021/10/8 18:19:01 2true 目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡配体（TRAIL）基因修饰间充质干细胞（TRAIL-MSCs）对神经胶质瘤细胞的杀伤作用。方法 复苏冻存的脐带间充质干细胞（UC-MSCs）种子库细胞，通过慢病毒转染的方法制备TRAIL-MSCs。ELISA法检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs细胞上清中TRAIL的含量；采用CCK-8试剂盒法检测重组TRAIL蛋白（rTRAIL，0、25、50、100、200、400 ng/mL）对U87MG、U251细胞的增殖抑制情况；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测U87MG、U251细胞中死亡受体DR4、DR5 mRNA表达水平，比较2种细胞对TRAIL的敏感性；将U87MG、U251细胞分别分为对照组、UC-MSCs培养上清（阴性对照）组、TRAIL-MSCs培养上清（含TRAIL约100 ng/mL）组和rTRAIL（100 ng/mL）组，CCK-8法检测细胞增殖抑制率；Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率；qRT-PCR法检测DR4、DR5 mRNA表达水平。结果 TRAIL-MSCs培养上清中TRAIL表达量显著高于UC-MSCs（P<0.01）；rTRAIL对U87MG细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为162 ng/mL，而对U251细胞的IC₅₀大于800 ng/mL，U87MG对TRAIL的敏感性更高，差异显著（P<0.01）；U87MG细胞DR4、DR5 mRNA相对表达量均显著高于U251细胞（P<0.01）；与对照组比较，TRAIL-MSCs培养上清、rTRAIL对U87MG、U251细胞均有显著增殖抑制及促进凋亡的作用（P<0.05、0.01） ，TRAIL-MSCs培养上清作用效果显著优于rTRAIL（P<0.01）；与U251相比，U87MG对TRAIL-MSCs培养上清的敏感性更强；TRAIL-MSCs培养上清处理的U87MG细胞DR4、DR5 mRNA表达量显著降低（P<0.01）。结论 TRAIL-MSCs对神经胶质瘤细胞有显著增殖抑制和杀伤作用，其功能可能与其受体DR4及DR5有关。]]> 2021/10/8 18:19:01 1true