2021/8/11 18:23:50 11true 2021/8/11 18:23:50 10true 目的 考察新绿原酸对宫颈癌HeLa细胞体外迁移模型和斑马鱼移植瘤模型的影响。方法 MTT法检测新绿原酸（20、40、80、160、320 μmol/L）对HeLa细胞增殖的作用；应用宫颈癌细胞HeLa划痕愈合模型和Transwell实验考察新绿原酸（28、56、113 μmol/L）对体外迁移作用的影响；同时利用构建的绿色荧光蛋白（GFP）的HeLa细胞系建立斑马鱼移植瘤模型，考察新绿原酸（56、113、226 μmol/L）对体内移植瘤模型细胞迁移的作用；Western blotting法检测新绿原酸对内皮生长因子（EGF）诱导的HeLa细胞中表皮生长因子受体（EGFR）、p-EGFR蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示，新绿原酸在160 μmol/L及以下浓度对HeLa细胞增殖无明显影响；与对照组比较，56、113 μmol/L新绿原酸显著抑制划痕愈合，抑制率分别为49.3%（P<0.05）和64.1%（P<0.01）；Transwell实验结果提示，113 μmol/L新绿原酸具有显著抑制HeLa细胞向下层迁移的作用（P<0.05）；与模型组比较，113、226 μmol/L新绿原酸可显著减少斑马鱼移植瘤模型的HeLa细胞的迁移面积（P<0.05、0.01）；Western blotting结果显示，与EGF组比较，新绿原酸对EGFR表达和磷酸化有明显抑制作用，56、113 μmol/L浓度组差异显著（P<0.01）。结论 在未影响HeLa细胞增殖的浓度下，新绿原酸具有抑制宫颈癌HeLa细胞迁移的作用，其作用机制与抑制EGFR的表达有关。]]> 2021/8/11 18:23:50 9true 目的 探讨还原型谷胱甘肽片对酒精性脂肪肝（AFLD）斑马鱼模型的保肝功效。方法 选取黑色素等位基因突变型（albino）品系斑马鱼，分别水溶给予还原型谷胱甘肽片500、1 000、2 000、4 000、8 000 μmol/L，同时设置对照组和模型组，除对照组外，利用2%无水乙醇诱导斑马鱼32 h建立AFLD模型，观察记录斑马鱼的死亡情况及表型，确定还原型谷胱甘肽片的最大耐受浓度（MTC）。黑色素等位基因突变型（albino）品系斑马鱼分别给予还原型谷胱甘肽片500、1 000、2 000 μmol/L和阳性对照药RU-21 100 μg/mL，同时设置对照组和模型组，除对照组外建立AFLD模型，采用油红O染色观察斑马鱼肝脏脂肪染色强度（S），计算还原型谷胱甘肽片的保肝功效；H&E染色观察斑马鱼肝脏病理学改变；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测白细胞介素（IL）-6、高迁移率族蛋白1b（HMGB-1b）和肿瘤坏死因子（TNF）-α mRNA表达。结果 还原型谷胱甘肽片对AFLD模型斑马鱼的MTC为2 000 μmol/L。与对照组比较，模型组S显著增加（P<0.001）；与模型组比较，还原型谷胱甘肽片1 000、2 000 μmol/L组和RU-21组S显著降低（P<0.01、0.001）；还原型谷胱甘肽片500、1 000、2 000 μmol/L和RU-21 100 μg/mL组保肝功效分别为14%、32%、71%和48%。还原型谷胱甘肽片2 000 μmol/L组肝细胞结构正常，脂肪空泡较模型组减少。与对照组比较，模型组IL-6、HMGB-1b和TNF-α mRNA表达显著增加（P<0.05、0.01）；与模型组比较，还原型谷胱甘肽片500、1 000、2 000 μmol/L组IL-6、HMGB-1b和TNF-α mRNA表达显著降低（P<0.01、0.001）。结论 还原型谷胱甘肽片对AFLD具有明显的保肝作用，其机制与下调IL-6、HMGB-1b和TNF-α表达有关。]]> 2021/8/11 18:23:50 8true 目的 利用斑马鱼炎症模型，评价三峡阳菊叶水提取物（WELTGY）的抗炎作用并对其机制进行初步研究。方法 选取受精后3 d（3 dpf）的转基因斑马鱼移入6孔板中，设置对照组（胚胎培养用水）、模型组（胚胎培养用水）和WELTGY 0.4、0.8、1.6、3.2 mg/mL组，作用3 h后，向除对照组外的其他组中分别加入硫酸铜，终浓度为20 μmol/L，作用1 h后在荧光显微镜下观察转基因品系Tg（zlyz：EGFP）斑马鱼体内炎症细胞迁移情况；应用DCFH-DA活性氧（ROS）探针对AB野生型斑马鱼染色，观察荧光强度；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定野生型斑马鱼炎症相关基因的mRNA水平。结果 与模型组比较，0.4、0.8、1.6、3.2 mg/mL WELTGY组斑马鱼中迁移至侧线部位的炎症细胞数量显著减少（P<0.01），斑马鱼荧光强度明显降低，ROS含量减少。与模型组比较，0.4、0.8、1.6、3.2 mg/mL WELTGY组过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的mRNA表达显著升高（P<0.05、0.01），核因子抑制蛋白A（IκBαA）、激活蛋白-1（AP-1）的mRNA表达显著降低（P<0.01），炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6和前列腺素E2合成酶（PTGES）、髓样分化因子（MyD88）、环氧化酶（COX）-2的mRNA表达显著降低（P<0.01）；1.6、3.2 mg/mL WELTGY组核转录因子（NF-κB）的mRNA表达显著下降（P<0.05、0.01）；1.6 mg/mL WELTGY组IL-12α的mRNA表达显著下降（P<0.01）。结论 通过构建斑马鱼急性炎症模型验证了WELTGY具有抗炎作用，其机制可能是WELTGY抑制ROS释放，激活PPARγ表达，抑制NF-κB和AP-1转录活性，降低炎症因子表达，从而缓解炎症，为三峡阳菊叶在饲料添加剂中的应用提供参考。]]> 2021/8/11 18:23:50 7true 目的 以斑马鱼为模型，评价三峡阳菊叶水提物（WELTGY）对斑马鱼整体形态以及心脏、肾脏和肝脏等主要脏器的影响。方法 用不同浓度（2.8、3.4、3.8、4.8、5.8、6.8 mg/mL）的WELTGY处理受精后72 h（72 hpf）的斑马鱼，处理24、48 h后，观察斑马鱼死亡率、畸形率和整体形态；显微镜下观察斑马鱼心脏形态并拍照，记录心率，使用ImagePro Plus 5.1测量斑马鱼静脉窦-动脉球（SV-BA）距离，评价WELTGY对斑马鱼心脏的影响；显微镜下观察拍照记录各组斑马鱼是否有眼水肿，判断WELTGY对斑马鱼肾脏的影响；用WELTGY处理肝脏标记绿色荧光的转基因斑马鱼Tg（LFABP：EGFP），荧光显微镜下拍照记录斑马鱼肝脏荧光情况，评价WELTGY对斑马鱼肝脏的影响。结果 与对照组比较，2.8 mg/mL及以下浓度的WELTGY对斑马鱼的整体形态、心脏、肾脏和肝脏无明显影响；3.4 mg/mL以上浓度的WELTGY导致斑马鱼鱼鳔减小，对心脏、肝脏、肾脏无影响；4.8 mg/mL以上浓度的WELTGY导致斑马鱼心率显著降低（P<0.01），对心脏SV-BA距离、肾脏、肝脏荧光强度和荧光面积无明显影响。结论 WELTGY毒性微弱，对斑马鱼幼鱼几乎没有毒性；高浓度下会导致轻微心脏毒性，在家禽养殖业的使用中有必要合理控制用量。]]> 2021/8/11 18:23:50 6true 目的 探究白屈菜红碱（CHE）对腺样囊性癌细胞（ACC2）生长的抑制作用及机制。方法 利用CCK8法、EdU法、Hoechst33342/PI双染色法、试剂盒法检测CHE对ACC2细胞活力、细胞增殖、细胞凋亡和活性氧（ROS）水平的影响；通过Western blotting技术检测CHE对Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达的影响；利用斑马鱼移植瘤模型检测CHE对斑马鱼体内ACC2细胞生长的抑制作用。结果 CCK-8结果显示：与对照组比较，2、3、4、5、6、7、8、9、10 μmol/L的CHE显著降低ACC2细胞的存活率（P<0.05、0.01），且呈浓度相关性； ROS检测结果显示：与对照组比较，5、8 μmol/L的CHE导致ACC2细胞内的ROS水平显著上升（P<0.05、0.01）； EdU增殖检测结果表明：与对照组比较，5、8 μmol/L的CHE致使ACC2细胞的增殖能力显著下降（P<0.01）；Hoechst/PI染色结果显示：与对照组比较，CHE 5、8 μmol/L组ACC2细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）显著抑制CHE诱导的ROS水平升高、细胞凋亡增加（P<0.01）；Western blotting结果显示：2、5、8 μmol/L的CHE能够显著上调Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB蛋白的表达（P<0.01），且呈现浓度相关性，5、8 μmol/L的CHE能够显著上调p-JNK的蛋白表达（P<0.01），8 μmol/L的CHE能够显著上调p-p38的蛋白表达（P<0.01）；NAC显著降低由CHE导致的Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达增加（P<0.01），5、8 μmol/L CHE能够有效抑制斑马鱼体内肿瘤的生长（P<0.01）。结论 体外及斑马鱼移植瘤模型证明，CHE可以有效抑制ACC2细胞生长，其机制与提高细胞ROS水平，上调NF-κB、p-JNK、p-p38表达，从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡相关。]]> 2021/7/15 14:40:03 5true 目的 利用斑马鱼模型结合网络药理学，研究甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性及作用机制，探讨附子-甘草配伍减毒的现代科学内涵。方法 选用受精后48 h（48 hpf）的健康野生型AB系斑马鱼，脱膜后随机移入6孔板中，每孔30枚。对照组加入新鲜养鱼水；模型组和各药物处理组均给予乌头碱溶液，终浓度均为10 μmol/L；各药物组同时分别给予低、中、高浓度（10、50、100 μmol/L）的甘草酸、甘草素、甘草苷和低、中、高浓度（1、5、10 μmol/L）的异甘草素，各组斑马鱼处理后放入恒温光照培养箱中培养至72 hpf，在显微镜下记录斑马鱼20 s心跳并拍照，计算心率，并利用Image-Pro Plus5.0软件计算心包面积，筛选甘草中拮抗乌头碱心脏毒性的成分。通过心脏结构与功能分析、活性氧（ROS）和凋亡细胞检测，进一步验证甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性作用。基于PharmMapper、Swiss Target Prediction、STITCH数据库收集乌头碱毒性作用靶点，利用CTD、GeneCards、DisGeNET数据库，以“心脏毒性”“心脏损伤”“心衰”为关键词检索靶点，将上述两组靶点导入Draw venn在线绘图取交集，得到乌头碱心脏毒性作用靶点集；从PharmMapper数据库中收集甘草酸活性靶点集；将2个靶点集共有靶点导入String数据库进行蛋白互作分析；使用Cytoscape 3.6.0软件对结果进行拓扑分析，以节点度值中位数为标准筛选重要靶点；得到的靶点导入DAVID数据库，进行GO和KEGG分析。结果 与对照组比较，模型组幼鱼心包水肿显著（P<0.01），心率显著升高（P<0.01）；与模型组比较，甘草酸与异甘草素各浓度组、甘草苷高浓度组心包面积显著下降（P<0.01），甘草酸效果更加明显且呈浓度相关性；甘草酸低和高浓度、甘草素高浓度和异甘草素低浓度拮抗乌头碱所致心率加快效果显著（P<0.05、0.01）。甘草酸可浓度相关性地拮抗乌头碱导致的斑马鱼心室短轴缩短率降低，且高浓度组具有显著性差异（P<0.01）；甘草酸显著抑制乌头碱诱导的斑马鱼体内活性氧生成（P<0.01）；明显减弱乌头碱导致的细胞凋亡。甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性的作用机制可能与MAPK、GRB2、CDC42、EGFR、GSK3B、SRC等关键靶点，以及PI3K-Akt、Ras、FoxO等信号通路相关。结论 甘草酸可以显著拮抗乌头碱心脏毒性，可能通过调控PI3K-Akt、Ras信号通路等发挥作用。]]> 2021/7/15 14:40:03 4true 目的 评价二甲基姜黄素、黄芩苷、紫檀茋对异烟肼导致斑马鱼神经损伤的保护作用。方法 挑选受精后2 h（2hpf）的斑马鱼胚胎，设置对照组（胚胎培养用水处理）、异烟肼组（4 mmol/L）、二甲基姜黄素（0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L）组、黄芩苷（0.1、0.2、0.5、1.0 μmol/L）组、紫檀茋（0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L）组，异烟肼分别与不同浓度的药物共处理120 h，用Zebrabox斑马鱼行为分析仪分析斑马鱼幼鱼行为学轨迹变化，荧光显微镜下观察斑马鱼幼鱼多巴胺神经元的发育情况。结果 与对照组比较，异烟肼组运动轨迹明显减少，运动总距离和低速、中速运动距离均显著下降（P<0.01），运动速度明显降低；神经节长度显著降低（P<0.01）。与异烟肼组比较，二甲基姜黄素组运动轨迹明显增加，斑马鱼运动状态主要为低速运动，各浓度的二甲基姜黄素组斑马鱼总运动距离和低速运动距离均显著增加（P<0.01），运动速度明显增加，0.5、2.0、4.0 μmol/L的二甲基姜黄素组中速运动距离显著增加（P<0.01）；黄芩苷组运动轨迹明显增加，0.1、0.2、0.5和1.0 μmol/L的黄芩苷组斑马鱼总运动距离和低速运动距离均显著增加（P<0.01），运动速度明显增加；0.5和1.0 μmol/L紫檀茋组运动轨迹明显增加，紫檀茋0.5 μmol/L组的总运动距离和低速运动距离均显著增加（P<0.01），紫檀茋0.5和1.0 μmol/L浓度组运动速度明显增加。与异烟肼组比较，二甲基姜黄素和黄芩苷各浓度组多巴胺相对神经节长度显著增加（P<0.01）；紫檀茋1 μmol/L组相对神经节长度显著增加（P<0.01）。结论 二甲基姜黄素、黄芩苷和0.5、1.0 μmol/L紫檀茋对异烟肼导致的斑马鱼神经损伤有明显保护作用。]]> 2021/7/15 14:40:03 3true 目的 利用斑马鱼模型评价血必净注射液与3种抗生素并用对肝脏损伤的影响。方法 以肝脏荧光标记的斑马鱼为动物模型，设置对照组、抗生素单用（阿莫西林克拉维酸钾分散片1 000 μg/mL、左氧氟沙星片800 μg/mL、阿莫西林胶囊400 μg/mL）组、血必净注射液（2.5、5.0、10.0 μg/mL）＋抗生素组，连续给药72 h，每24 h更换暴露液，给药结束后，显微镜下拍照，统计肝面积、肝脏荧光强度。收集样品，石蜡包埋，切片，HE染色，进行组织病理学检查。结果 在阿莫西林克拉维酸钾分散片和血必净注射液的安全浓度范围内联合用药未发现斑马鱼死亡，未发现毒性加剧；在左氧氟沙星片和血必净注射液的安全浓度范围内联合用药未发现斑马鱼死亡，未发现毒性加剧；在阿莫西林胶囊的安全浓度范围内，联合应用10 μL/mL血必净注射液可导致斑马鱼全部死亡；联合应用5 μL/mL血必净注射液可导致部分斑马鱼死亡，剩余斑马鱼肝毒性加剧，与阿莫西林胶囊单用组比较，肝面积及肝脏荧光强度均显著下降（P<0.05）。结论 血必净注射液与阿莫西林克拉维酸钾分散片、左氧氟沙星片并用不会对斑马鱼的肝脏造成损伤。阿莫西林胶囊与血必净注射液并用时增加斑马鱼的肝损伤风险，应控制阿莫西林胶囊的处方浓度，并重点观察患者肝功能变化。]]> 2021/7/15 14:40:03 2true 目的 对蟾酥甲醇提取物中化学成分进行初步分析，并利用斑马鱼模型评价其抑制血管生成及抗炎活性。方法 采用液质联用（LC-MS）技术，用反相C₁₈色谱柱，以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾-三重四级杆飞行时间质谱正/负离子双重扫描方式，对提取物中的样品进行分析；采用受精后24 h（24 hpf）绿色荧光标记血管的转基因斑马鱼作为实验动物模型，荧光显微镜下观察背部节间血管生成情况，计算节间血管长度，研究PTK787（阳性药，0.2 μg/mL）和蟾酥甲醇提取物2、4、6 μg/mL浓度对斑马鱼血管生成的影响；采用受精后3 d（3 dpf）健康绿色荧光标记炎症细胞的转基因斑马鱼作为实验动物模型，设置对照组、模型（CuSO₄，20 μmol/L）组、布洛芬（阳性药，20 μmol/L）组和蟾酥甲醇提取物（0.4、0.8 μg/mL）组，计数神经丘周围炎症细胞个数。结果 蟾酥甲醇提取物中共检测出33个色谱峰，并鉴定出其中7个为结合型蟾蜍二烯酸内酯。与对照组比较，蟾酥甲醇提取物4、6 μg/mL浓度组斑马鱼血管生成受到抑制，血管长度变短，具有显著性差异（P<0.05、0.01）；与对照组比较，CuSO₄模型组斑马鱼迁移到神经丘侧线部位的炎症细胞数量显著增多（P<0.01）；与模型组比较，蟾酥甲醇提取物0.8 μg/mL组炎症细胞迁移减少，具有显著差异（P<0.01）。结论 通过LC-MS法从蟾酥甲醇提取物中鉴定出7个结合型蟾蜍二烯酸内酯，蟾酥甲醇提取物具有抑制血管生成和抗炎活性。]]> 2021/7/15 14:40:03 1true